全 文 ：·
2 0 8
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锥花福禄考叶片愈伤组织诱导与植株再生研究
孙元峰 ’ , 李庆伟 ’ , 申顺先 ` , 李培胜 2
l( 河南农业职业学院 ,河南中牟 4 5 14 50 ; 2洛阳市植保植检站 ,河南洛阳 4 71 0 0)
摘 要 : 以锥花福禄考的 叶片为 外植体 ,进行愈伤 组织诱导 、 不 定芽分化增殖及 生根培养 , 确 定了锥
花福禄考快繁体 系的最适培养条件 : ( 1 )初代培养基 : M s + BA .O 4 m岁L + N A A I , s m以;L ( 2) 丛生 芽增
殖培养基 : M s + 6一B A I . o m g /L + I BA o . l m g/ L + G A 3 1 . s m g /L ; ( 3 )生根培养基 : 1 /ZM S + N A A o . l m g /L 。
关键词 : 锥花福禄考 ;组织培养 ; 快速繁殖
C a llu S In d u ct io n a n d P l a n t le t Re g e n e rat io n of P h lo x Pa n ie u ia 一 t a Le sf
S u n Y u a nfe
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o叩 an i e u l a 一 ta w e r e u s e d a s e x p l a n t s to i n d u e e e a l i , b u d s a n d or o t i n g i n s e v e n
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.
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e o p t im al m e di a w e er ( 1) M S + BA O
.
4 m g /L + NA I
.
5 m g几: (2 )M S + 6一 BA I . om岁L+ I-
B A O
.
l m g /L+ G凡 1 . s m g/ L : (3 ) 12/ M S + N A AO , l m g /L .
Ke y w o心 s : hP l田争 an i e u la 一 ta , T i s s u e e u lut er , R a p id onr p a g at i o n
锥花福禄考 伽hl oxP an ic “ l a 一 t a) 又叫天蓝绣球 、 宿
根福禄考 ,是花葱科福禄考属多年生草本 。 北方露地栽
培花期为 6一 1 月`IJ , 正值其他花卉开花较少的夏季脚 ,
是北方园林植物中理想的绿化地被植物 。 福禄考常规
繁殖主要靠分株和扦插 , 受自然条件影响较大 , 不能快
速满足大批量生产需要 3[,’j 。 为此笔者利用组织培养方
法 , 来进行快速繁殖研究 , 为其种苗规模化生产奠定基
石出。
1 材料与方法
1
.
1 材料来源 2 005 年 4 月 7 日上午取材 , 试验材料
选自于河南省农业高新科技园花卉基地 , 剪中上部枝
条带回室内 , 以完全展开的叶片作为初代培养外植体 。
1
.
2 外植体表面灭菌与接种 把枝条上剪下完全展开
的叶片 (带叶柄 ) , 用洗洁精液洗涤 2~3 而n , 流水冲洗
3 0m in 后滤纸吸干水分置于超净工作台上 , 用 75 %的
酒精灭菌 10 5 , 倒去酒精 , 再用 0 . 1%升汞 (加 3 滴几 吐
温一80 )灭菌 6m in , 最后用无菌水冲洗 5一6 遍 ,无菌滤
纸吸干水分 ,用灭过菌的剪刀剪去叶柄及叶缘部分 ,切
成 .0 5 c耐 大小的小块 , 接种到诱导培养基上 , 叶面朝
上 。
1
.
3 培养基
1
.
3
.
1 诱导培养基 以 M S 为基本培养基 ,添加不 同浓
度生长素和分裂素 (见表 2) 及其它附加物 (蔗糖浓度
为 3% , 琼脂浓度为 0 . 6 5% ) , pH S . 5一 6 . 0 , 以 s oml 三角
瓶为培养容器 , 每瓶 15血 培养基 , 12 1一 12 3℃高压灭
菌 15~2 0而 n 。 每组接种 2 0 瓶 , 每瓶接种一个叶片小
块 , 重复 3 次 。
1
.
.3 2 增殖培养基 基本培养基不变 , 采用 肠 (3今设计
进行 3 因素 3 水平的正交试验 (见表 D , 根据设计安
排 9 组实验 5[] ,每组接种 5 瓶 , 每瓶接种 2 个愈伤组织
块 , 重复 3 次 。 其它附加成分同初代培养 。
表 1 与 (3 4) 因子水 平
1
.
.3 3 生根培养基 以 M S 培养基 、 12/ M S 培养基附
加不同浓度生长素 (见表 6) , 其它附加成分同初代培
养 , 每组接种 5 瓶 , 每瓶接种 3 个单芽茎段 , 重复 3
次 。
第一 作者简介 : 孙元峰 ,男 , 19 53 年生 , 河南叶县人 , 副教授 , 主要从事植物保护的教学与科研工作 。 E 一~ 1
: :
un yu 曲如 g@ y a h o o .c o .m cn 。 通讯作者 : 李庆伟 ,
eT h 03 71
一
67 29 07 23
,
E
一
m ial : iql in gw ie 83 0@ os hu .co m
。 通信地址 : 45 14 50 河南省中牟县青年西路 38 号河南农业职业学院 。 收藕日期 : 20 5刁.8 3 1, 修回日期 :
2 0 0 5
一
0 9
一
05
。
中闻零 学通报 第 21 卷 第 n 期 2 0 5 年 1 月
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:
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2 0 9
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-一一二二= ;二二二二二二二二= 二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二 二 二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二竺竺二 = 二二二 二竺竺竺竺竺竺竺- , , =竺 , .一 - ~ 一一一 -一 - 一一 ~1 . 4 培养条件 培养室温度为 (25 土 2) ℃ , 以日光灯为 伤组织的速度较快 , 接种 d7 后 , 可 以看到在叶片切光源 , 每天连续光照 1h0 ,光照强度是 2 00 一 3 0 0 0xL 。 口处 出现愈伤组织 , 15 d 后在叶片中间开始出现愈伤2 结果与分析 组织 , 4 d5 的叶片愈伤组织 (见图 1) 诱导结果见表 o2
.21 叶片愈伤组 织 的诱 导 锥花福禄考叶片产生愈 从表 2 可以看出 , 单独使用细胞分裂素 B A 不能
表 2 不同外源激素配合对锥花福禄考叶片愈伤组织诱导的影响
7,
一
0
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o厂1780860190%0114850072741立20l1qù丹,4006`U
植物橄索 ( m岁L )
M S
+ B A O
.
2
M S
+ BA O
.
2+ N A A O
.
5
M S
十 BA .O 2+ N A A 1 0
M S
+ B A O
`
2+ N A A I
.
5
M S + B A 0 2 + N A A 2
.
0
M S十 B A O ,4
M S
+ B A O
.
4 + N A A O
.
5
M S + B A O
.
4+ N A人 1 . 0
M S 十B A O
,
4+ N A A I
户
5
M S
+ B A O
.
4 + N A A2
.
0
接种数 污染数 愈伤组织数 愈伤组织诱导率 (%)
注 : 以接种后 4 5d 统计 。
诱导锥花福禄考叶片产生愈伤组织 , 且 B A 浓度加大 M S一旧 A .O 4 m叭 + N A A I . 5
时 , 会有玻璃化 (见 图 3) 出现 ; 只有同时使用细胞分 10 0% 。
裂素和生长素才能诱导叶片产生愈伤组织 , 随着生 .2 2 继代增 殖 系数 的 分析
长素 浓度 的升 高会有根 产生 。 在所 作实验 中 , 结果如表 3 所示 。
表 3 不同外源激素配合对锥花福禄考叶片愈伤组织分化的影响
m g/ L 诱导效果最好 , 为
增殖培养基的正交实验
组合号
o j ( l )
0
.
5 ( l )
0 5 ( ] )
1
.
0 (2 )
1
.
0 ( 2)
1 0 (2 )
2
.
0 ( 3)
2
.
0 ( 3)
2乃 ( 3)
1
.
5 3 3
6
.
2 2 2
9
.
4 0 7
7
.
8 7 4
0
.
1 ( 1)
0
.
2 (2)
0 3 (3 )
0
.
1 ( l )
0 2 (2)
0 3 (3 )
0
.
1 ( 1)
0
.
2 (2)
0
.
3 (3 )
5
.
97 0
5
.
6 89
5
.
50 3
O
`
4 67
0 5 ( 1)
1
.
0 (2)
么0 (3 )
1
.
0 (2)
2
.
0 (3 )
0
.
5 ( l )
2
.
0 (3 )
0
.
5 ( l )
1
.
0 (2)
5 7 33
5
.
7 9 1
5
一
6 37
0
.
1 56
丛生芽情况
苗少但粗壮
苗粗壮但数少
苗壮但芽数少
髓恶姗.l24因子代号A B C
6
.
5 5 6
6
.
17 8
5
.
9 3 3
9
.
4 8 9
9
`
4 0 0
9 3 3 3
苗多且壮
苗多且健壮
苗多且壮
苗细且愈伤组织轻度玻璃化
个别苗玻璃化 ,
苗多纤细
456789KIZ3R
注 : 接种后 30 d结果 。 括号内的数字代表激素含量水平 。 K 为平均数 , l 、 2 、 3 表示浓度水平 。 增殖系数 = 增殖芽数 / 接种愈伤组织数 , 取 3 次重复的平均
值 。
从表 3 的水平和水平均值可以看出 , 不同激素配 的影响趋势是不同的 。 从表 3 还可以看出 ,各因子极
比对锥花福禄考叶片愈伤组织丛生芽诱导的效果不 差顺序为 A > B > C , 这反映对增殖系数影响顺序是
同 , 各处理诱导增殖率大小依次是 : 7 > 8 > 9 > 4 > A > B > C 。 激素 A 诱导增值率以 A 3 最高 , 但苗生长
5 > 6 > 1 > 2 > 3
。 具体在选择的 3 个因子中 , 随着 A 情况确以 2A 为最好 , 故 2A > A 3 > A l ;激素 B 为 lB
因子含量水平的上升 , 增殖系数呈增加趋势 , 且 3 个 > 132 > B 3 ;激素 C 为 C Z > C l > C 3 ;最优的激素含量
水平差异明显 ; 随着 B 因子含量水平的上升 , 增殖系 组合为 ZA B I CZ 。
数呈下降趋势 , 3 个水平差异不明显 ; 随着 C 因子含 对表 3 结果进行方差分析 (见表 4) , 表明 , A 、 B 因
量水平的上升 , 增殖系数先升后降 , 3 个水平差异不 素对试验结果的影响达显著水平 (p 感 .0 05) , C 则没
明显 ; 这说明不 同的激素及其含量水平对增殖系数 有 ,和直观分析情况吻合 。
表 4 以 3今实验结果的方 差牡析 _
_
变异因子
4 7
.〔6 6
2 9 0 3 0
0
.
0 19
2
.
2 73
2 0
.
70 7 * *
12 7 2
*
0
.
(洲) 8
3
.
7 8忿 12
0
.
9 3 5
住95 2
DF一24
BACE
总变异
注 : l 、 因 S S e < S S e ,故 S S e = 0 . 0 3 7+ 9 . 0 55 = 9刃9 2 , fe 鸽 : 2 、 ,F ( 2 4 )= 6 . 94 `下 ( 2 4 )= 18 . ( )0
对增值系数最大的激素含量组合 A 3B I C Z 和最
优激素含量组合 九2 B I C 2 的结果进行了验证 , 结果
如表 5 。
从表 5 来看 , 最优 的增值培养基为 ZA B 1c Z
2 10
Ch in e s e Ar gi e ul tr u
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.
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.
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hP tl : /n zh t
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o
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.
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衰 5两种激素含 t组合继代培养基的增值效果
激素组合
A3B I Q
八2 B I2 C
接种芽数 芽诱导数 增殖系数 丛生芽情况
0 3
30
肠8
8 2 1
8
.
9 3 3
6. 沥 7
苗纤细
苗粗壮
( M S+6
一
B A I
.
om留毛 +B I A O. l m留 L十 C A 3 1. s m醉 ), 结果
与试验情况相吻合 (见图 2) 。
.2 3 生根情况 由表 6 可以看 , 最适宜的生根配方为
12/ M S+ N A A O
.
l m g/ L
。
3 结果与讨论
在植物组织培养中 ,激素的种类和浓度及其配比 ,
对试验结果有相当大的影响 。 通常认为 , 生长素和细
胞分裂素比值高时有利于根的形成 , 反之有利于芽
表 6 不 同培养基配方对锥花福禄考生根的影响
编号 激素组合 接种芽数 生根数 生根率 (肠 )
01825349韶9邓价14545 7朽M S
M
s+ 2
.
4一0 . l m创L
M
s + 2 4一 0 . 3 m岁L
M s+ 2
.
4一 0石m叭
M s + N AA O
.
l m创L
M s+ N A A O
.
3m叭
M+s N A A O
.
s m创L
122M s
112油+2 . 4一D o l m g IL
IZZM s+2 一 D O3 m叭
112M
s+ 2
.
4一 0 . 5m目飞
112M s + N A A O
.
l m班
112M s + N A A O
.
3 m倒毛
O
4D
21
月j4ō,`U
26
`
6 7
1 1 1 1
7 5万6
5 1
.
1 1
20
15 1
.
11
8 6
.
6 7
6 2
.
2 2
3 7
.
7 8
3 2 2
.
2 2
19 3
.
3 3
75 55
789101234
注 : 接种后 3d0 结果
图 1 愈伤组织 图 2
的形成 , 浓度相当时形成愈伤组织网 。 笔者在试验过
程中 , 也获得了相同的结论 。 叶片愈伤组织形成中 ,
生长素浓度高时 , 直接在叶片上生根 , 但不形成愈伤
组织 ;丛生芽诱导时 , 过高的细胞分裂素浓度引起了
芽数增多 ,但畸形芽出现 ; 过高的生长素浓度直接生
根 , 芽形成减少 。
正交设计的应用 , 能大大减少试验次数 , 同时准确
率也较高 。 在试验中通过正交设计来筛选适宜锥花
福禄考叶片愈伤组织丛生芽增值的最佳培养基配方
时 , 取得了事半功倍的效果 。
李慧等在银 白杨不定芽诱导中指出不定芽的再生
率随着 6一A 浓度的提高而明显下降 , 不定芽的再生
系数也减少 , 同时玻璃化的程度也加重门 。 蔡宣梅等
在百合花丝上研究也指出 , 过高浓度的 6 一B A 虽然可
以提高繁殖系数 , 但是小鳞茎呈丛生状态 , 且有玻璃
化现象 18 。 笔者在试验中发现丛生芽产生较多和单使
丛生芽 图 3 玻璃化苗
细胞分裂素时 , 会出现玻璃化现象 , 且玻璃化比较严
重 (见图 3 ) 。
参考文献
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