全 文 ：收稿日期:2006-08-30
作者简介:俞青芬(1975-),女 ,讲师 , 05级在读硕士研究生, 主
要从事计算化学方面的研究。
HPLC法测定花锚中落干酸和龙胆苦苷的含量
俞青芬
(青海民族学院化学系 , 西宁　810007)
摘要:目的:建立反高效液相色谱法测定花锚中落干酸和龙胆苦苷的含量。方法:采用 kromasil—C18(250mm
×4.6mm , 5μm)色谱柱 , 以流动相甲醇和水(含 0.04%磷酸)的比例在 0～ 15min 内由 23:77 至 30:70 线性梯
度洗脱 , 流速 1 ml/ min ,检测波长 238 nm , 柱温 35℃。结果:两种成分均达到基线分离 ,落干酸和龙胆苦苷的
线性范围分别为 0.198 ～ 5.544 μg(r =0.9999), 0.0262 ～ 0.7336μg(r =0.9999);回收率为 96.12%(RSD=
1.73%)、97.67%(RSD=1.91%)。结论:方法测定快速 ,结果准确 、可靠。
关键词:反相高效液相色谱;花锚;落干酸;龙胆苦苷
中图分类号:O657.7+2　文献标识码:A　文章编号:1005-5320(2007)01-0042-02
Simultaneous Determination of Loganic acid and Gentianaceae in Herba Haleniae by HPLC
YUQing-fen
(Chemistry Department of Qinghai nationalities , Xining 810007 , China)
Abstract:Objective:To establish a quantitative method of simultaneously determination of loganic acid and gentiopicroside by RP—
HPLC.Method:The sample w ee separated on the column of kromasil—C18(250mm×4.6mm ,5μm)w hich eluted with methanol and wa-
ter (0.04%phosphoric acid).The ratio of methanol and w ater increased from 23:77 to 30:70 in 15 min with detected w aveleng th at
238nm , flow rate at 1ml/min ,column temperature at 350C.Results:Two compounds were baseisolated.The linear ranges of loganic acid ,
gentiopicroside were 0.198 ～ 5.544μg(r=0.9999), 0.0262 ～ 0.7336μg(r=0.9999);The average recoveries were 96.12%(RSD=
1.73%)、97.67%(RSD=1.91%).Conclusions:The method is rapid and precise.
Key Words:RP—HPLC;Herba Haleniae;loganic acid;gentiopicroside
　　花锚(Herba Haleniae )是龙胆科花锚属一年生草本植
物 ,是“藏茵陈”类药用植物中的一种 ,其全草或地上部分入
药 ,味苦 ,性寒 ,具有清热祛湿 ,疏肝利胆等功效 ,用于治疗急
性黄疸型肝炎 、胆囊炎、头昏头痛等症 。其主要化学成分有
落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、齐墩果酸 、当药黄素 、熊果
酸 、花锚苷等[ 1 ,2] 。现代药理学表明 ,落干酸具有一定的抗炎
活性 ,对角叉菜胶引起的小鼠脚肿胀和十四烷佛波醇乙脂引
起的小鼠耳肿胀抑制率达 44.4%[ 3] ;龙胆苦苷有促进胃液分
泌 、抗原虫和抗炎作用[ 4] 。对龙胆科植物中獐牙菜苦苷 、芒
果苷、龙胆苦苷的测定方法主要有薄层扫描和高效液相色谱
法[ 5 ～ 7] ,但对落干酸及龙胆苦苷分同时测定的方法都少见报
道 。本实验利用 HPLC同时测定花锚中两种成分的含量 。
1　材料与方法
1.1　材　料
1.1.1　仪器　Agilentl 100高效液相色谱仪 ,配置:手动进样
器 、在线脱气机 、高压二元梯度泵、恒温柱温箱 、DAD 检测器 、
Agilentl 100色谱工作站 、kromasil C18(250mm×4.6mm , 5μm)
色谱柱;KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.1.2　试剂　甲醇:高效液相色谱专用试剂(山东禹王实业
有限公司禹城化工厂);磷酸:AR级(北京红星化工厂);自制
三重蒸馏水;落干酸 、龙胆苦苷对照品:青海普兰特藏药研究
所孙洪发研究员提供(经归一化法测定 ,纯度大于 98%)。
1.1.3　样品采集　1#样花锚采集于循化 , 2#样花锚采集于
乐都 ,3#样花锚采集于互助等地 。阴干后粉碎过 80目筛 ,冷
藏保存 。
1.2　方　法
1.2.1　溶液配制
1.2.1.1　对照品储备液 　精密称取对照品落苷酸 396 mg 、
龙胆苦苷 127 mg ,分别置 1 ml量瓶中 ,以甲醇溶解并定容 ,
配置成相应浓度的对照品储备液 ,使用时稀释成所需浓度 。
1.2.1.2　样品溶液　精密称取粉碎至 80目的样品各 1 g ,
加入甲醇 10 ml ,超声提取 0.5 h ,抽滤 ,以甲醇洗涤滤渣 2
次 ,每次 1 ml。滤渣重复上述操作 ,所得滤液与前一次滤液
合并 ,浓缩后定容至 50 ml。
1.2.2　色谱条件
色谱柱:kromasil—C18(250 mm×4.6 mm ,5 μm)柱;流动
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Vol.24 　　
第 1 期
No.1 　 　　　　　　　
微 量 元 素 与 健 康 研 究
Studies of T race Elements and Health
　 　　　　　　　　　2007 年　1 月
Jan.　2007
相:甲醇和水(含 0.04%磷酸)的比例在 0 ～ 15 min内由 23:
77线性变化至 30:70;流速 1 ml/min;检测波长为 238 nm;柱
温 35℃。该色谱条件下落干酸 、龙胆苦苷等成分均被洗脱且
达到基线分离 ,保留时间分别为 9.606 、15.754 min。(图略)
2　结果与讨论
2.1　结　果
2.1.1　线性关系考察　精密量取两种对照品储备液 ,以甲
醇配制浓度分别为:落干酸 1.32mg/ml;龙胆苦苷 0.42 mg/
ml。以 0.5 、1.0 、2.0 、6.0 、10.0 、14.0 、20.0 μl不同体积的对
照品标准液系列溶液 ,每次进样 5 μl ,以峰面积的积分值定
量 ,测得落干酸 、龙胆苦苷的回归方程见表 1。
表 1　两种药用成分的线性方程(Y=A +BX)、
相关系数及线性范围
化合物 线性方程 相关系数(r) 线性范围(μg )
落干酸
龙胆苦苷
A=1090x -94.417
A=2925.5x -31.878
0.9999
0.9999
0.198 ～ 5.544
0.0262 ～ 0.7336
表 2　加样回收率试验测定结果(n =4)
批号 样品量(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
落干酸 1 1.98 40.38 103.99
2 38.326 3.96 42.28 100.02 96.12 1.73
3 5.94 43.33 84.36
龙胆苦甙 1 2.7385 0.262 5.44 103.14
2 0.524 5.68 97.82 97.67 1.91
3 0.786 5.89 92.05
表 3　花锚中两种有效成分的含量(%)
样品 落干酸(mg/g) 龙胆苦苷(mg/g)
1 1.649 1.482
2 2.265 1.264
3 1.217 1.007
2.1.2　精密度实验　取浓度为 1.32 mg/ml落干酸 、0.42
mg/ml龙胆苦苷混合对照品溶液 ,在选定的色谱条件下测定
色谱峰的峰面积 ,计算得 RSD 分别为 1.10%、1.16%(n =
5),表明仪器精密度良好 。
2.1.3　重复性实验　精密称取花锚样品 1g 共 6份 ,按“1.
2.2”项下方法操作 ,在选定的色谱条件下测定落干酸 、龙胆
苦苷的含量 ,计算得 RSD分别为 1.13%(n =5),表明方法重
复性良好 。
2.1.4　稳定性实验　精密称取花锚样品 1 g ,按“1.2.1.2”
项下方法操作 ,分别在 0 , 2 , 4 , 6 , 8 h时分别进样 ,测定落干
酸 、龙胆苦苷的峰面积 ,计算得 RSD 分别为 2.1%、1.5%、
1.1%、1.9%(n=5),表明样品溶液在 8 h内稳定 。
2.1.5　回收实验　精密量取 4份已测知含量的花锚 1#样
品各 50μl ,添加对照品溶液体积分别为 0 、5 、10 、15 μl ,以甲
醇稀释至 100 μl ,测定并计算落干酸和龙胆苦苷的含量 ,结果
见表 2 。
2.1.6　测定结果　取“1.2.1.2”项下制备的样品溶液按上
述色谱条件进行分析 ,经 DAD检测器检测上述两种待测组
分的峰纯度且其紫外光谱与对照品一致后 ,按外标法以峰面
积积分值计算 。得两种有效成分的含量 ,结果见表 3 。
2.2　讨　论
2.2.1　检测波长的确定　上述对照品溶液分别进样后 ,利
用 DAD检测器在 200 ～ 400 nm扫描其吸收光谱 ,各对照品
均在 238 nm波长处有较高的吸收 ,选择该波长为检测波长 。
2.2.2　流动相的选择 　上述两种有效成分色谱峰易拖尾 ,
经试验 ,当在水中加入 0.04%(V/V)磷酸时可改善落干酸 、
龙胆苦苷的峰形 。故选择甲醇和含 0.04%磷酸的水做流动
相 。
2.2.3　花锚中的两种有效成分含量的比较 　由表 2结果可
见 ,各龙胆科植物中各有效成分含量不同 ,落干酸以乐都地
区的花锚中含量最高 ,龙胆苦苷以循化地区的花锚中含量最
高 。
2.2.4　小结　所建方法具有提取 、分析方法简便、快速 、结
果准确可靠等特点 。
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微 量 元 素 与 健 康 研 究
Studies of T race Elements and Health
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