全 文 ：中国微循环 2009年 6月第 13卷第 3期　
基金项目:河北省科学技术与社会发展指导计划(052761690)
作者单位:075029　河北张家口 ,河北北方学院微循环研究所
第一作者简介:李延伟(1970-),女 ,汉族 ,河北省张家口人 ,主管
技师。主要从事临床检验。现在张家口市中心血站工作。
文章编号:1007-8568(2009)03-0179-04 ·实验研究·
夏至草醇提物对急性微循环障碍
大鼠血小板功能的影响
李延伟 ,雷　慧 ,刘正泉 ,刘春艳 ,张玉平 ,张利民 ,赵自刚 ,牛春雨
【摘要】　目的　观察夏至草醇提物(EEMI)对高分子右旋糖苷(Dextran500)致急性微循环障碍
(AMD)大鼠血小板功能的影响。方法　Wistar雄性大鼠分为夏至草组 、模型组和对照组。 前二组静注
10% Dextran500(10 ml/kg)复制 AMD模型(对照组以等量生理盐水代替)。 6min后 ,夏至草组自颈静
脉缓慢推注 EEMI(1 g/ml, 6g/kg),其它两组以等量生理盐水代替。 40 min后 ,观察血小板粘附与聚集
功能 、脑血流量和体外血栓形成。结果　①模型组血小板聚集率(5 min)显著低于对照组 , 而血小板聚
集时间 、解聚率及粘附率均显著高于对照组;夏至草组在不同时间点及最大的血小板聚集率均显著低
于对照组和模型组 , 血小板聚集时间 、解聚率及粘附率均显著高于对照组 , 但血小板粘附率显著低于模
型组。②模型组及夏至草组的脑血流量 、血栓长度 、血栓湿重 、血栓干重 、血栓形成率均显著低于对照
组 , 但夏至草组的血栓干重显著低于模型组。结论　EEMI能明显降低 Dextran500致 AMD大鼠的血小
板聚集与粘附功能 、减少血栓形成。
【关键词】　夏至草;急性微循环障碍;高分子右旋糖苷;血小板功能;血栓
中图分类号:R285.5;R364.1;R311.5　　　　文献标识码:B
EffectsofEthanolExtractfromMrrubiumIncisumonPlateletFunctioninRatswithAcuteMi-
crocirculatoryDisturbance
LIYan-wei, LEIHui, LIUZheng-quang, LIUChun-yan, ZHANGYu-ping, ZHANGLi-min, ZHAOZI-
gang, NIUChun-yu.InstituteofMicrocirculation, HebeiNorthUniversity, Zhangjiakou075029, China
【Abstract】　Objective　ToobservetheefectsofethanolextractfromMrubiumIncisum(EEMI)on
plateletfunctioninratswithacutemicrocirculatorydisturbance(AMD)inducedbyDextran500.Methods　
MaleWistarratswererandomlydividedintothreegroups:MrrubiumIncisumgroup, modelgroupandcontrol
group.TheAMDmodelwasestablishedbyintravenouslyadministeringDextran500(10 ml/kg)inMrubium
Incisumgroupandmodelgroup, andDextran500 wasreplacedbyequivalentnormalsalineincontrolgroup.6
minuteslater, EEMIwasinfusedinMrrubiumIncisumgroup(1g/ml, 6g/kg);inothergroupsethanolextract
fromMrrubiumIncisumwasreplacedbynormalsaline.After40 min, thefunctionofplateletaggregationand
adhesion, cerebralbloodflowvolume, thrombosisinvitrowereobserved.Results　 ①Comparedwithcontorl
group, theplateletaggregationrateat5mininmodelgroupwaslower, andtheplateletaggregationtime, disag-
gregationandadhesiverateweredecreased, respectively.InMrrubiumIncisumgroup, theplateletaggregation
ratewasincreasedthanthatofcontorlandmodelgroup, theplateletaggregationtime, disaggregationandadhe-
siverateweredecreasedthancontrolgroup, buttheplateletadhesiveratewaslowerobviouslythanmodel
group.②Thecerebralbloodflowvolume, thelength, wetanddryweightofthrombosisinmodelandMrrubi-
umIncisumgroupswerelowerobviouslythancontrolgroup, butthedryweightofthrombosisinMrrubiumInci-
sumgroupwaslowercomparedwithmodelgroup.Conclusion　EEMIcouldobviouslyreducetheplateletag-
gregationandadhesion, reducethethrombosisforminginAMDratssubjectedtoDextran500.
【Keywords】　MrrubiumIncisumBenth;Acutemicrocirculatorydisturbance(AMD);Dextran500;
Plateletfunction;Thrombosis
·179·
JChinMicrocircJun2009, Vol.13, No.3
　　高分子右旋糖苷(Dextran500)可引起大鼠急
性微循环障碍 (acutemicrocirculatorydisturbance,
AMD),其中血液微循环障碍表现为微血流流速变
慢 、流态异常 ,淋巴微循环障碍表现为微淋巴管收
缩性指数与收缩频率降低 ,而应用夏至草醇提物
(ethanolextractfromMrrubiumIncisum, EEMI)可减
轻血液及淋巴微循环障碍[ 1] 。此外 , Dextran500还
可引起大鼠肝 、肾 、心 、肺等器官的组织学损伤 ,而
应用 EEMI可减轻各器官的形态学损伤 [ 2] ,其部分
机制为 EEMI能减轻组织细胞的自由基损伤 [ 3] 、降
低一氧化氮的合成与释放 [ 4] 有关。前期研究也表
明 , Dextran500还可引起血栓形成增多[ 5] ,导致弥
散性血管内凝血(disseminatedintravascularcoagula-
tio, DIC),加重微循环障碍;但 EEMI对 Dextran500
导致的过量微血栓是否有干预作用 ,值得研究 。
材料和方法
1　制备 EEMI
实验用唇形科夏至草属植物夏至草 [ mrrubium
incisumBenth]全草(购自张家口医药站 ,经原张家
口医学院中医系姜希强教授鉴定),制备过程:水煎醇
沉 ,活性炭脱色 、灭菌 ,制成含生药为 1 g/ml的 EE-
MI,并验证其 pH、澄清度 、溶血试验 ,均合格后使用。
2　实验动物及分组
清洁级 Wistar雄性大鼠 20只 , 体质量 240 ～
300g,购自中国医学科学院实验动物繁育中心(许
可证号:SCXK京 2000-2006),饲养环境:室温 20 ～
23℃,相对湿度(55 ±15)%,照明度 280 ～ 350LX,
光照节律 12 h明 12 h暗 ,昼夜交替 ,标准日粮 ,清
洁饮水 ,自由饮食 。按随机数字表法随机分为对照
组(n=6)、模型组(n=6)、夏至草组(n=8)。实验
前所有大鼠禁食 12 h,自由饮水。对实验动物的处
置依据动物伦理学标准 。后二组应用 Dextran500
复制 AMD模型。
3　AMD模型复制及 EEMI干预
所有大鼠经 1%戊巴比妥钠(购自北京化学试
剂厂 ,批号 20000919)以 50mg/kg的剂量肌肉注射
全身麻醉 ,颈部手术 ,剥离左颈静脉 , 1%肝素钠(购
自北京奥博星生物技术责任有限公司 ,批号 001218)
以 0.5ml/kg的剂量全身抗凝 ,插管 ,用于复制模型
及药物干预。术后稳定 15 min,将 10% Dextran500
(瑞典 PharmaciaBiotech)以 10 ml/kg的剂量应用
WZF-50F2型微量注射泵(浙江大学医学仪器有限公
司)从左颈静脉缓慢匀速推注 , 3min注完 ,复制 AMD
大鼠模型[ 6, 7] 。 6 min后 ,夏至草组用微量注射泵由
颈静脉缓慢推注 EEMI(6g/kg,用前经等量生理盐水
稀释);模型组输入与 EEMI等量的生理盐水;输液时
间为 5min。药物干预时间 40min。
4　血小板粘附与聚集功能检测
经 EEMI干预或相当治疗 40 min后 ,迅速经颈
总动脉放血 ,根据检测项目将标本分别进行处理 ,取
3ml肝素抗凝血应用 3-9D型微循环 、血流变 、红细胞
变形 、综合分析仪(成都麦赛科贸公司)应用透光法
进行血小板粘附功能检测:取富血小板血浆 1.0 ml,
用 0.55 ml放入黏附转盘中以取得贫血小板血浆并
取 0.45 ml装入第二个比色杯中 ,将两个比色杯分
别放入黏附仪中进行操作 ,检测透光度 ,计算血小
板黏附率 。
采用比浊法进行血小板功能聚集检测:将剩余
的 0.45 ml富血小板血浆放入比色杯中;加入搅拌
棒 ,加入 ADP聚集剂 40 μl～ 50 μl(配制方法:1 mg
ADP,加 1 ml生理盐水配成备用液 ,分装成 50 μl小
瓶共 20瓶 ,避光冷冻保存。用时每小瓶备用液 50
μl加 1.25 ml生理盐水摇匀即成应用液;ADP由
ICNBiomedicalsInc生产 ,批号:160053),测定不同
时间的血小板聚集率。
5　体外血栓形成试验
将 0.9 ml不抗凝全血注入血栓形成胶皮管中 ,
两端联成环状为密闭 ,将血栓管环放在血栓转盘上 ,
匀速转动 15min。其形成机理为不抗凝全血在密闭
匀速转动 15 min后将管内血栓血倒在吸水纸上 ,用
镊子夹出血栓 ,测量血栓长度(mm),称量湿重 ,经 7
min烘干后测干重 ,记录数据 ,计算血栓形成率。
6　计算脑血流量
由于脑血流量与全血黏度 、血浆黏度 、红细胞
压积 、纤维蛋白原等因素有关 ,故 3-9D型血流变分
析仪的测定脑血流量的原理主要是根据这些指标
的变化 ,依据 GrotaJ等学者 [ 8]的国际公认法制定
参数分析系统 ,计算脑血流量。本文与脑血流量相
关实验数据见文献 [ 9] 。
7　统计学方法
所有数据以均数 ±标准差( x±s)表示 ,经 SPSS
16.0统计软件包进行单因素方差分析 ,组间比较用
两样本均数 t检验 , P<0.05为具有显著性差异 。
结　果
1　EEMI对 AMD大鼠血小板黏附率的影响
·180·
中国微循环 2009年 6月第 13卷第 3期　
模型组及夏至草组的血小板黏附率均显著高
于对照组(P<0.01 ～ 0.05),但夏至草组显著低于
模型组(P<0.01),见图 1。
2　EEMI对 AMD大鼠血小板聚集率的影响
如表 1所示 ,模型组与夏至草组在不同时间点及
最大的血小板聚集率均显著低于对照组 ,且夏至草组
的血小板聚集率低于模型组(P<0.01 ～ 0.05);模型
组与夏至草组的血小板聚集时间 、解聚率均显著高
于对照组(P<0.01 ～ 0.05)。
3　EEMI对 AMD大鼠体外血栓形成的影响
模型组及夏至草组的脑血流量 、血栓长度 、血
栓湿重 、血栓干重 、血栓形成率均显著低于对照组
(P<0.05 ～ 0.01),但夏至草组的血栓干重显著低
于模型组(P<0.05 ,表 2)。
4　EEMI对 AMD大鼠脑血流量的影响
模型组及夏至草组的脑血流量均显著低于对
照组(P<0.05),两组间未见统计学差异 ,见图 2。
表 1　夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠血小板功能的影响( x±s)
组别 n 血小板聚集率(%)
1min 3min 5min Max
血小板聚集时间
(s)
血小板解聚率
(%)
对照组 6 45.2±5.8 49.5±5.5 54.2±3.4 61.5±1.5 10.0±0.0 17.8±5.6
模型组 6 35.6±3.4＊ 30.3±6.0＊＊ 27.5±5.2＊＊ 42.3±4.7＊＊ 23.2±11.6＊＊ 57.2±13.6＊＊
夏至草组 8 10.5±3.0＊＊△ 14.3±2.7＊＊△ 11.5±2.1＊＊△ 24.6±3.1＊＊△ 20.9±6.1＊ 67.4±8.8＊＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与模型组比较:△P<0.01。
表 2　夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠脑血流量和
体外血栓形成的影响( x±s)
组别 n 血栓长度(mm)
血栓湿重
(mg)
血栓干重
(mg)
血栓形成率
(%)
对照组 6 14.8±2.7 51.7±12.1 40.7±9.8 49.2±5.8
模型组 6 6.1±0.7＊＊ 24.2±3.8＊＊ 19.2±3.8＊＊ 39.8±5.7＊
夏至草组 8 5.5±1.2＊＊ 21.9±3.7＊＊ 12.3±3.0＊＊△ 34.9±5.8＊＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与模型组比较:△P<
0.05。
讨　论
Dextran500引起 AMD的主要因素与其作为大
分子物质激活内源性凝血途径 、形成大量微血栓有
关;大量微血栓阻塞于微血管 ,进一步引起血管内皮
以及组织缺血 、缺氧 ,释放大量组织因子 ,激活外源
性凝血途径 ,加剧凝血功能紊乱;大量微血栓阻塞于
组织 ,导致器官功能障碍;形成了凝血功能紊乱 -微
循环障碍-器官功能障碍的恶性循环 ,成为器官功能
障碍的主要因素[ 10] 。研究表明 , 夏至草醇提物对
Dextran500致急性微循环障碍大鼠器官功能具有较
好的保护作用 ,可减少重要器官肝 、肾 、心 、肺的微血
栓形成 ,减少出血 ,减轻组织器官的形态学损伤 [ 3] 。
为此本研究从血栓形成与血小板功能角度探讨夏至
草醇提物干预器官损伤的机制 ,为其临床治疗提供
实验依据 。
实验结果表明 ,注射 Dextran500后 ,大鼠出现
急性血小板功能异常 ,表现为:血小板黏附率明显升
高 、血小板聚集率 、脑血流量 、血栓形成长度 、湿重 、
干重及血栓形成率均显著降低。其主要原因可能为
Dextran500为大分子量物质 ,注入血管后激活内源
性凝血系统 ,增强血液凝固性 ,导致血小板继发黏附
性增高;但由于形成大量微血栓 ,引起血小板数量的
消耗性减少 [ 5] ;加之 ,在血小板聚集功能检测过程
中 ,并没有将血小板数量调整至同一水平 ,因此血小
板体外聚集性降低的机制与血小板数量消耗有关。
从而使血栓形成长度 、湿重 、干重及血栓形成率等指
标显著降低;由于微血栓的形成导致脑血流量降低。
而输入夏至草醇提物后 ,血小板聚集率 、脑血流量 、
血栓形成长度 、湿重及血栓形成率等指标均未见显
著性变化 ,其原因可能为:输注 EEMI是在输入 Dex-
tran500后 6min,而此时血液凝固性增高已发生 、继
·181·
JChinMicrocircJun2009, Vol.13, No.3
之消耗性低凝已经形成 ,单纯输入夏至草并未补充
凝血因子以及血小板的数量 。但是 ,输入 EEMI却
在较短的时间内降低了过度增高的血小板黏附率 、
减少了血栓干重 ,提示 EEMI从抑制血小板黏附功
能的角度 ,避免了血液的凝固性增高 ,减少微血栓形
成 ,这对于重建 Dextran500导致 DIC后的凝血 、抗
凝 、纤溶各系统的平衡是非常有利的;结合各重要器
官组织形态观察少见血栓与红细胞淤滞 [ 2]也证实了
其作用效果 。
总之 , EEMI可明显降低 Dextran500导致大鼠
过度增强的血小板黏附功能 、减少血栓形成 ,从而重
建机体的凝血功能平衡 ,这对于器官功能的保护是
有益的 。至于 EEMI中有效成分的提取与筛选 、EE-
MI对凝血因子和血小板数量的影响以及调节凝血
平衡的具体分子机制 ,均有待进一步研究 。
参　考　文　献
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(上接第 168页)
缺血-再灌注损伤组可见大量的凋亡细胞 ,证实了缺
血 -再灌注损伤可诱导心肌细胞凋亡发生。粉防己
碱预处理组的凋亡心肌细胞较 IRI组明显减少 ,细胞
凋亡指数显著低于缺血-再灌注损伤组(P<0.01)。
说明粉防己碱预处理有抑制缺血-再灌注损伤所致
心肌细胞凋亡的作用。通过免疫组化检测发现 ,缺
血 -再灌注使 Bcl-2和 Bax蛋白的表达明显增多 ,但
以 Bax的增多更为显著 ,使 Bcl-2/Bax值显著降低 ,
细胞凋亡明显增多。而粉防己碱预处理组 Bcl-2表
达增加 , Bax表达下降 , Bcl-2 /Bax值显著升高 ,心肌
细胞凋亡数量明显减少 。因此 ,粉防己碱抑制心肌
缺血-再灌注损伤引起细胞凋亡的机制可能与下调
Bax和上调 Bcl-2的蛋白表达 ,升高 Bcl-2 /Bax比值
有关。
总之 ,粉防己碱预处理可明显减轻心肌再灌注
损伤 ,而上调 Bcl-2蛋白表达 、下调 Bax蛋白表达 ,
升高 Bcl-2/Bax值 ,抑制心肌细胞凋亡可能是其抗
缺血-再灌注损伤的主要保护机制之一。
参　考　文　献
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