全 文 ：藏药麻花艽中四种苦苷类化学成分的 HPLC测定
孙 菁1 ,3 , 陈桂琛 1 , 李玉林1 , 3 , 赵先恩2 , 王洪伦1 ,3
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810008;2.山东省曲阜师范大学化学学院 , 曲阜 273165;
3.中国科学院研究生院 , 北京 100039)
摘 要:建立了藏药麻花艽中龙胆苦苷(gentiopicroside)、落干酸(loganic acid)、
獐牙菜苦苷(swertiamarin)和獐牙菜苷(sweroside)4种苦苷类成分的HPLC分析方
法 。色谱柱为Eclipse XDB-C8(4.6 mm i.d.×150mm , 5μm), 流动相为体积分数
5%乙腈+10 mmoL甲酸～ 95%乙腈水溶液 , 检测波长为 240 nm 。结果表明 , 该
方法具有良好的线性关系和回收率 , 为麻花艽中苦苷类成分的进一步开发利用
提供了科学依据 。
关键词:藏药;麻花艽;龙胆苦苷;落干酸;獐牙菜苦苷;獐牙菜苷;HPLC
中图分类号:O657.7 文献标识码:A 文章编号:1000-0720(2006)05-028-04
麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)为龙胆科
(Gentianaceae)龙胆属草本植物 , 是一种多年生高
山植物[ 1] , 主要分布于青藏高原 , 海拔范围为
2000 ～ 4950 m[ 2] 。麻花艽以根入药 , 为常用的重要
藏药解吉类植物之一 , 具有散风祛湿 、清热利胆 、
舒筋止痛等功效[ 3] 。其根中有效成分为环烯醚萜
苷类[ 4] , 主要包括龙胆苦苷 、獐牙菜苦苷等 。对麻
花艽根中苦苷类化学成分的研究由来已久[ 4 ,6 ～ 10] ,
但大部分都集中于龙胆苦苷与落干酸两种成
分[ 5 ,11 , 12] , 尚未有关于 4种苦苷类成分 , 即龙胆苦
苷(gentiopicroside , 代号 S1)、落干酸(loganic acid ,
代号 S2)、獐牙菜苦苷(swertiamarin , 代号 S3)、獐
牙菜苷(sweroside , 代号S4)同时测定的报道 。本文
应用HPLC分析方法 , 对麻花艽根中上述 4种有效
成分进行了定量分析 , 以期对麻花艽中苦苷类有
效成分的进一步利用提供科学依据 。
1 实验部分
1.1 仪器 、试剂及材料
Agilent1100型高效液相色谱仪(Agilent公司):
配备有四元梯度泵 , 在线真空脱气机 , DAD检测
器 , 100位自动进样器;KQ-200B型数控超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限公司);Milli-Q 超纯水
系统(美国Millipore 公司)。
龙胆苦苷 、獐牙菜苦苷对照品由中国药品生
物制品检定所(批号分别为110770-200308 、110785-
200203), 落干酸 、獐牙菜苷对照品由中国科学院
西北高原生物研究所李玉林副研究员提供;乙腈
(德国 Merck 公司)为色谱纯;其它试剂皆为分析
纯。
野生麻花艽材料(根部)于 2004年 9月底采自
四川西北部若尔盖 、青海的门源县 、班玛县 、刚察
县 、玛沁县 5个地点。
1.2 色谱条件
色谱柱:Eclipse XDB-C8(4.6 mm i.d.×150
mm , 5 μm)。流动相 A:体积分数 5%乙腈和 10
mmoL的甲酸水溶液 , B:体积分数 95%的乙腈水
溶液 。流速为 1.0 mL min , 进样量为 10 μL , 检测
波长为 240 nm , 柱温 30 ℃。梯度洗脱程序为:0 ～
20 min , B 为 0 ～ 100%。对照品 HPLC 分离图见
图 1(a)。
1.3 对照品溶液及样品制备
对照品溶液的制备:分别准确称取龙胆苦苷
—28—
第 25卷第 5 期
2006年 5 月 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol.25.No.52006-5
收稿日期:2005-06-24;修订日期:2005-09-06
基金项目:国家中西部专项(2001BA901A47);中国科学院知识创新工程领域前沿项目(CXLY-2002-08)资助
作者简介:孙 菁(1976-), 女 , 博士研究生
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2006.0134
(S1)、落干酸(S2)、獐牙菜苦苷(S3)和獐牙菜苷
(S4)对照品 , 用甲醇超声溶解配成质量浓度为 S1
1.92 mg mL 、 S2 0.77 mg mL 、 S3 1.20 mg mL 、 S4
0.17 mg mL 的对照品溶液。
样品溶液的制备:将采集到的麻花艽根部用
超纯水洗净 , 凉干 , 研成细粉 , 准确称取0.2 g , 加
甲醇 10 mL , 于 60 ℃超声提取30 min , 超声频率为
60 KHz;冷至室温后过滤 , 滤液置于 25 mL 容量瓶
中 , 用甲醇定容 , 摇匀备用。
2 结果与讨论
2.1 线性关系
对一系列对照品混合液进行分析测定 , 按照
上述色谱条件测定 4种成分各自的峰面积 , 以峰
面积为纵坐标 , 进样量为横坐标绘制标准曲线 ,
得到 4种苦苷类成分的回归方程(表 1)。
图 1 对照品及样品的色谱图
Fig.1 HPLC chromatograms of standards and samples
(a)对照品的 HPLC 图谱;(b)样品的HPLC图谱
1 、 2、 3 、 4 分别为S2、 S3、 S1 和 S4。下同
表 1 4 种苦苷类成分的回归方程及参数
Tab.1 Linear equations and factors of four iridoid glycosides
化合物 线性范围 m μg 线性方程 相关系数 r 检出限 ρ (μg mL)
S1 0.60～ 19.20 y=6015.90892 x+106.46768 0.99997 6.98E-04
S2 0.24 ～ 7.68 y=6383.99495 x+40.122864 0.99996 4.29E-04
S3 0.38～ 12.02 y=6058.4701 x+55.730207 0.99998 6.30E-04
S4 0.05 ～ 1.66 y=6535.95404 x+10.817206 0.99998 6.24E-04
2.2 精密度
对对照品溶液进行精密度实验 , 每次进样 10
μL , 重复5次 , 得 S1峰面积的 RSD为 1.06%, S2
为1.89%, S3为 1.85%, S4为 2.05%。
2.3 重复性实验
准确称取同一批样品 , 按照供试品溶液制备
方法 , 得到5份供试品溶液 , 测定结果 RSD:S1为
0.21%, S2为 0.92%, S3为0.39%, S4为 3.71%。
2.4 加样回收率实验
取已知含量的药材适量 , 加入一定量的对照
品混合溶液 , 按照样品处理方法制备并进样 10
μL , 重复进样 3次 , 计算各对照品的加样回收率 ,
得到 S1 、 S2 、 S3 和 S4 的回收率分别为 95.63%、
99.21%、 100.30%和 98.45%。
2.5 样品测定
将制得的样品液在相同条件下作HPLC 分析 ,
重复进样 5次 , 样品 HPLC 见图 1(b)。根据对照品
的保留时间和紫外吸收图确定峰的位置(紫外吸收
图见图 2), 利用线性方程计算 4种苦苷类成分的
含量(表 2)。
—29—
第 25 卷第 5期
2006 年 5月 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory Vol.25.No.52006-5
图 2 对照品及样品的紫外光谱图
Fig.2 UV spectra of standards and samples
(a)对照品中 4 种苦苷类成分;(b)样品中 4种苦苷类成分
表 2 麻花艽根中苦苷类成分的测定结果(n=5)
Tab.2 Contents of iridoid glycosides in Gentiana straminea roots
采集地点 化合物 w %
S1 S2 S3 S4 S 总和
四川若尔盖 10.305±0.004 1.826±0.004 0.782±0.004 0.221±0.007 13.134
青海门源 9.536±0.012 0.978±0.009 0.538±0.008 0.106±0.014 11.158
青海班玛 9.680±0.005 0.727±0.003 0.655±0.008 0.250±0.003 11.312
青海刚察 6.590±0.006 1.023±0.003 0.482±0.007 0.301±0.004 8.396
青海玛沁 10.727±0.003 0.859±0.004 0.643±0.006 0.412±0.003 12.641
平均 9.368±0.727 1.083±0.193 0.620±0.052 0.258±0.050 -
注:表中数值取自平均值与标准误差(n=5)
3 小结
分别测定了 5个野外麻花艽种的根部 4种苦
苷类成分 , 结果表明4种苦苷类成分中以 S1含量
最高 。就其平均值而言 , S1含量分别为S2 、S3 、S4
含量的8.65倍 、 15.11倍 、36.31倍。鉴于 S1的含
量远远高于其他 3种苦苷类成分 , 可考虑利用麻
花艽中的 S1来开发新的药源 。同时 , 不同采集地
点的样品中其苦苷类成分的含量也各有差异 , 以
四川若尔盖 、青海玛沁所采集样品中苦苷类成分
的含量较高 。生态环境是化学物质形成和变异的
重要因素 , 药用植物中有效成分的形成和积累与
其生态环境息息相关[ 13] 。这说明在考虑综合利用
麻花艽中苦苷类成分时 , 不同采样地点 、野生药
材的不同环境都是需要考虑的问题。
此外 , 本实验建立了HPLC法分析测定麻花艽
根中 4种苦苷类有效成分 , 该方法精密度高 , 重现
性好 , 并且快捷 、准确 、可控 , 为进一步系统研究
和开发利用麻花艽根中苦苷类有效成分提供了可
靠的分析方法 。
参考文献
[ 1] Ho Ting-nong , Liu Shang-wu.A worldwide monograph of
—30—
第 25卷第 5 期
2006年 5 月 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol.25.No.52006-5
Gentiana.Beijing:Science Press , 2001 , 176
[ 2] 何廷农(主编).中国植物志(第 62 卷), 北京:科学
出版社 , 1988 , 62
[ 3] 杨永昌 , 藏药志.西宁:青海人民出版社 , 1991 , 9
[ 4] 纪兰菊 , 孙洪发 , 丁经业等.高原生物学集刊 , 1992 ,
11:113
[ 5] 林鹏程 , 冶兆辉 , 卢永昌等.中药材 , 2004 , 27(11):
819
[ 6] 郭亚健 , 陆蕴如.药物分析杂志 , 1983 , 3(5):268
[ 7] 罗集鹏 , 楼之岑.药物分析杂志 , 1985 , 5(1):7
[ 8] 罗集鹏 , 楼之岑.中草药 , 1986 , 17(4):1
[ 9] 宋万志.中药通报 , 1986 , 11(1):3
[ 10] 纪兰菊 , 廖志新 , 孙洪发.高原生物学集刊 , 2002 ,
15:243
[ 11] 孙文基 , 沙振方 , 高 海等.药物分析杂志 , 1994 ,
14(1):41
[ 12] 纪兰菊 , 马玉花 , 陈桂琛等.西北植物学报 , 2004 ,
24(2):292
[ 13] 陶曙红 , 吴凤锷.天然产物研究与开发 , 2003 , 15
(2):174
Determination of four iridoid glycosides in tibetan medicine Gentiana straminea Maxim.by HPLC
SUN Jing
1, 3 , CHEN Gui-chen＊1 , LI Yu-lin1 ,3 , ZHAO Xian-en2 and WANGHong-lun1 , 3(1.Northwest Plateau Insti-
tute of Biology , Chinese Academy of Sciences , Xining 810008;2.Department of Chemistry , Qufu Normal University ,
Qufu 273165;3.Graduate School of the Chinese Academy of Sciences , Beijing 100039), Fenxi Shiyanshi , 2006 , 25
(5):28 ～ 31
Abstract:The contents of four iridoids(gentiopicroside , loganic acid , swertiamarin , sweroside)in Gentiana straminea
were determined by high performance liquid chromatography(HPLC).The analysis was performed on Eclipse XDB-C8
(4.6mm i.d.×150 mm , 5μm)column , eluted with the solution of 0.01mol L methanoic acid with 5% acetonitrile
and 95% acetonitrile and with UV detection at 240 nm.All calibration curves indicated good linear regression(r≥
0.9999)within test ranges.
Keywords:Tibetan medicine;Gentiana straminea Maxim.;Gentiopicroside;Loganic acid;Swertiamarin sweroside;
HPLC
—31—
第 25 卷第 5期
2006 年 5月 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory Vol.25.No.52006-5