全 文 ：＊河北省中医药管理局科研基金资助课题 (200002)
夏至草提取物对大鼠实验性微循环障碍的影响＊
张利民　姜　华　任君旭　张学锋　张万明　刘艳凯
河北北方学院基础医学部 (河北张家口 075029)
提要:目的:观察夏至草提取物对大鼠实验性微循环障碍的作用 。方法:用 10%高分子右旋
糖酐 (Dextran 500)以 10ml/kg 经静脉注射 , 复制大鼠微循环障碍血瘀证模型 , 造模后夏至草治
疗组按 9.0 、 3.0 、 1.0g/kg (含生药)静脉注射夏至草提取物 , 益母草治疗组按 5.0g/kg 静脉注
射益母草注射液 , 对照组给等量的生理盐水 , 通过显微电视录像观察肠系膜微血管口径 、流态和
微淋巴管 (ML)收缩性的变化。结果:夏至草提取物可明显扩张微血管 , 促进血流 , 使 ML 自主
收缩频率 、收缩活性指数 (Index Ⅰ)、 总收缩活性指数 (Index Ⅱ)、 淋巴动力学指数 (L.D-
Index)显著增高 。结论:夏至草提取物对血液和淋巴微循环障碍有良好改善的作用 。
关键词:夏至草　微循环障碍　微血管　微淋巴管
　　夏至草(Herba Lagopsis)为唇形科夏至草属植物夏至草
的全草 , 作为中药药用历史悠久 , 具有养血调经 、活血祛瘀 、
利水消肿的作用 , 在四川 、河北 、山东 、甘肃等许多地方大量
临床应用 ,功效与益母草相似[ 1] , 现在把夏至草列为益母草
的混淆品种[ 2] 。鉴于此 ,有必要对夏至草的药效及其药效学
的物质基础进行研究 ,我们通过对夏至草主要化学成分生物
碱的提取 ,观察了夏至草提取物对急性血瘀大鼠肠系膜血液
微循环和淋巴微循环的作用 ,旨在深入研究夏至草活血化瘀
和利水消肿的作用。
1　材料
1.1　药品　夏至草提取物的制备:夏至草由内蒙驻张家口
医药站提供 ,经河北北方学院中医系姜希强教授鉴定为唇形
科夏至草属植物夏至草的全草 , 按文献[ 3]经水煎醇沉 , 再经
活性炭脱色 、灭菌制成注射液 , 生药含量为 1.0g/ml , pH 为
6.5 ,澄清度检查 、溶血试验均为合格。高分子右旋糖酐
(Dex tran 500), 瑞典 Pharmacia Bio tech 产(批号 17032000);
戊巴比妥钠 ,北京化学试剂厂生产(批号 20000919);益母草
注射液 ,深圳联合制剂中心(批号 991115)。
1.2　仪器　ZCZ—50 型自动抽注机, 浙江医科大学实验仪器厂
生产;微循环显微电视录像设备 ,徐州光学仪器厂生产。
1.3　动物分组　Wistar 雄性大鼠 30只 ,体重 250～ 300g ,由河北
医科大学动物中心提供。随机分为夏至草治疗大 、中、小剂量
组,益母草组和生理盐水(NS)对照组(n=6)。
2　方　法
2.1　微循环障碍的复制和治疗　大鼠肌肉注射戊巴比妥钠
(500mg/ kg)全身麻醉 , 分离颈静脉 , 行颈静脉插管。按常规
方法制备大鼠活体肠系膜标本 , 以 37℃±1℃K-H 灌流液
滴流维持标本环境恒定。用 10%高分子右旋糖酐以 10ml/
kg 经颈静脉注射 , 1min 注完。 6min 后开始治疗 , 夏至草三
组分别按 9.0、3.0 、1.0g/ kg 经生理盐水稀释 , 由自动抽注机
从颈静脉缓慢给药 , 输液速度为 0.5ml/min , 观察 60min;同
法 , 益母草组按 5.0g/kg 给药 ,盐水组给等量的生理盐水。
2.2　肠系膜淋巴微循环的观察　通过微循环显微电视观察记
录回肠下段肠系膜微血管一级分支(A1、V1)的口径和流态变化,
口径以百分数表述(实验前口径为 100%);微血流流态以半定量
积分法表述[ 4] ,观察 ML(micro-lymphatics ,ML)的收缩频率(a)、
最大舒张口径(b)、最大收缩口径(c)和静态口径(d)的变化, 按
Yasuda[ 5]和 Goto[ 6]的公式 ,计算 ML收缩活性指数[ IndexⅠ=(b2
-c2)/b2 ,总收缩活性指数 Index Ⅱ=(b2-c2)a2/b2 ,淋巴动力学
指数 L.D-Index=(b-c)100a/d2] ,比较各组动物在不同时期肠
系膜血液和淋巴微循环的变化。
2.3　统计方法　数据以x±s表示,以 t检验进行统计学分析。
3　结　果
3.1　肠系膜微血管口径的变化　静脉注射 Dex tran 后 , A1 、
V1 级微血管分别开始缩小;给药后 ,夏至草大 、中 、小剂量组
A1 、V1 都有不同程度增宽 , 显著宽于 NS 组(P<0.01 , P<
0.05),见表 1 和表 2。
　　表 1 夏至草对微循环障碍大鼠 A1 口径的影响(x±s , n=6)
组　别 初始管径(μm)
iv Dextran
占初始管径%
给药后占初始管径%
10min 20min 30min 60min
NS 20.03±1.85 85.29±5.25 87.21±5.11 85.13±5.43 84.81±5.02 84.75±4.92
益母草 19.88±1.76 84.88±5.62 97.86±5.76▲ 97.73±5.81▲ 96.96±4.89▲ 93.96±5.01■
夏至草(大) 19.49±1.71 85.16±5.10 98.15±5.06▲ 98.12±5.43▲ 97.93±4.46▲ 95.25±5.13■
夏至草(中) 20.10±2.02 85.23±5.02 97.89±5.38▲ 97.81±5.72▲ 96.94±4.93▲ 93.92±4.76■
夏至草(小) 19.72±1.83 84.91±5.38 96.55±5.66▲ 95.71±5.05▲ 93.75±5.06■ 90.83±4.85
　　注:与对照组比较 , ▲P<0.01 , ■P<0.05
四　川　中　医 2004 年第 22 卷第 7 期
14　 Journal of Sichuan of T raditional Chinese Medicine Vol.22 , No.7 , 2004
　　表 2 夏至草对微循环障碍大鼠 V1 口径的影响(x±s , n=6)
组　别 初始积分 iv Dextran占初始管径%
给药后占初始管径%
10min 20min 30min 60min
NS 29.22±3.98 90.24±4.23 90.41±4.02 90.21±3.91 90.08±3.75 90.11±3.93
益母草 28.86±3.73 90.30±4.11 95.75±4.10■ 95.54±4.25■ 95.39±4.13■ 95.12±4.01
夏至草(大) 28.52±3.94 89.97±4.17 96.99±4.05■ 96.86±4.00■ 96.76±3.92■ 95.62±3.72■
夏至草(中) 28.63±3.79 90.16±4.03 95.73±4.11■ 95.57±3.81■ 95.35±3.88■ 95.14±3.64
夏至草(小) 28.25±3.25 90.20±4.13 95.51±4.00■ 95.30±3.90■ 94.01±3.90 92.23±3.56
　　注:与对照组比较 , ■P<0.05
3.2　肠系膜微血流流态的变化　静脉注射 Dex tran 后 ,微血
管血流速度变慢 , 呈粒流 、粒缓流 , 出现血细胞聚集 , 尤以微
静脉明显 ,部分微静脉血栓开始形成;给药后 ,夏至草大 、中 、
小剂量组和益母草组血流改善 , 积分值降低 , 流态显著优于
NS 组(P<0.01 , P<0.05),见表 3。
　　表 3 夏至草对微循环障碍大鼠微血流流态的影响(x±s , n=6)
组　别 初始管径(μm)
iv Dextran
积分
给药后积分
10min 20min 30min 60min
NS 1.23±0.03 5.72±0.56 5.05±0.79 5.75±0.76 5.89±0.75 6.25±0.66
益母草 1.22±0.04 5.70±0.62 3.85±0.72■ 3.25±0.70▲ 3.28±0.77▲ 3.90±0.80▲
夏至草(大) 1.25±0.03 5.80±0.58 3.73±0.69▲ 3.15±0.73▲ 3.13±0.80▲ 3.66±0.78▲
夏至草(中) 1.23±0.03 5.68±0.63 3.80±0.81■ 3.21±0.82▲ 3.20±0.84▲ 3.92±0.81▲
夏至草(小) 1.24±0.04 5.75±0.64 3.83±0.83■ 3.40±0.71▲ 3.58±0.81▲ 4.50±0.78▲
　　注:与对照组比较 , ▲P<0.01 , ■P<0.05
3.3　肠系膜 ML 收缩性的变化　静脉注射 Dex tran 后 , 各
M L口径均收缩 , 占初始管径百分比下降 , 收缩频率减少 ,诸
收缩性参数均明显变小;给药后 , 夏至草大 、中 、小剂量组 ML
口径扩张 ,ML 自主收缩幅度增大 , 频率增加 , 各收缩参数显
著高于 NS 组(P<0.01 , P<0.05), 虽然药物效应大剂量组
较小剂量组稍明显 ,但没有明显的剂量效应关系。 阳性益母
草组也显示出良好的作用 ,见表 4。
　　表 4 夏至草对微循环障碍大鼠淋巴管收缩性的影响(x±s , n=6)
组　别 静态口径(%) 频率(次/min) IndexⅠ IndexⅡ L.D-I ndex
NS
iv Dex tran
给药后
85.23±8.79
85.38±9.03
2.58±0.72
2.70±0.83
0.42±0.06
0.54±0.09
1.60±0.71
1.83±1.05
1.77±0.88
2.16±0.92
益母草 iv Dex tran给药后
83.38±9.62
96.83±9.34■
2.51±0.73
4.94±0.93▲
0.45±0.09
0.56±0.10
1.63±0.83
3.41±1.10▲
1.71±0.81
3.49±0.86▲
夏至草(大) iv Dex tran给药后
84.38±8.69
105.11±9.34▲
2.54±0.80
6.30±0.82▲
0.42±0.07
0.71±0.12■
1.58±0.86
3.90±0.93▲
1.70±0.91
3.78±0.90▲
夏至草(中) iv Dex tran给药后
85.76±9.04
102.06±9.10▲
2.60±0.75
5.83±0.89▲
0.39±0.08
0.70±0.10■
1.65±0.95
3.85±1.23▲
1.69±0.90
3.66±0.89▲
夏至草(小) iv Dex tran给药后
83.69±8.71
98.82±9.15■
2.63±0.66
5.01±0.81▲
0.40±0.08
0.69±0.09■
1.58±0.88
3.46±0.79▲
1.68±0.81
3.00±0.71▲
　　注:与对照组比较 , ▲P<0.01 , ■P<0.05
4　讨　论
夏至草作为民间常用的一种中药 , 含有多种有效成分 ,
如益母草碱 、水苏碱和黄酮类等 , 虽然夏至草无论从药物性
状 、还是显微特征 , 与益母草都有明显的区别 ,但其作用与益
母草相似 ,民间甚至认为夏至草效力超过益母草[ 2 , 7] ,为了全
面探讨夏至草活血化瘀 、利水消肿的微循环机制 , 本实验观
察夏至草对血瘀大鼠肠系膜血液和淋巴微循环的作用。结
果表明 , 微循环发生障碍时 , 微血管口径收缩 , 流速变慢 ,血
细胞聚集 ,而夏至草可明显扩张微循环障碍时大鼠肠系膜微
血管口径 ,增加微血管血流量 , 使血流速度加快 , 抑制血细胞
聚集。从而改善血液微循环的灌流状态 , 增加组织细胞的营
养性血液灌注 ,达到活血化瘀功效。
淋巴微循环是微循环的重要组成部分 , 微循环障碍是淋
巴液转运 、生成障碍与血液微循环障碍协同作用的结果[ 8] 。
近年来研究表明 ,由于淋巴液的成分包括淋巴细胞和含有多
种细胞因子的组织液 ,因此决定了淋巴系统具有循环及免疫
双重功能 ,淋巴液的生成和转运 , 对维持机体的自稳态具有
重要的作用[ 9] 。这些功能的完成依赖于淋巴管的自主性节
律性收缩 ,通常采用多指标参数进行综合评价淋巴微循环的
功能。收缩参数增加反映单位时间内淋巴管节律性推动淋
巴液转运的次数 ,其增加有助于淋巴液的回流 , 实验结果表
明 , 夏至草可明显使微循环障碍时大鼠各收缩参数增加 、频
率提高 、口径增大 ,大大活跃了淋巴微循环 , 从而有利于组织
液的吸收和回流 ,降低组织液的渗透压 ,有助于水肿的消退 ,
恢复机体内环境的恒定 。综上所述 ,夏至草可以有效地改善
血液和淋巴微循环障碍 ,从微循环角度证明了夏至草的活血
化瘀 、利水消肿作用 , 为天然药物的开发提供了实验依据。
2004 年第 22 卷第 7 期 四　川　中　医
Vol.22 , No.7 , 2004 Journal of Sichuan of T raditional Chinese Medicine 15　
参考文献
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[ 9] Akira S , Tsuneyasu K , Minako O , et al.C ri tical roles of pten in
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Exp Med , 2003, 197:657～ 667
(收稿日期　2004-03-29)
＊本论文为国家自然科学基金资助项目———中药解毒作用的细胞信号转导调控机制研究项目的一部分 (项目批准号:30171155)
凉膈散对内毒素肺损伤小鼠肺组织核
因子-κB活性的影响＊
林 　慧1　余林中1 　秦清和2
1.第一军医大学中医系药理药化教研室 (广东广州 510515)　2.第一军医大学全军休克微循环重点实验室
提要:目的:通过研究凉膈散在内毒素 (LPS)损伤小鼠肺组织中对肺组织核因子-κB (NF
-κB)的活性的影响 , 探讨凉膈散对机体保护作用的机理。方法:小鼠随机分为内毒素损伤组及
低 、 中 、高剂量凉膈散组 (其中又分为 LPS损伤后 2h 、 4h 、 8h三组), 另设正常对照组 。用电泳
迁移率改变法 (EMSA)检测各组动物肺组织匀浆中 NF -κB活性 。结果:与正常对照组相比较 ,
LPS 注射后 2h肺组织核蛋白 NF -κB明显活化 , 4h 达高峰 , 8h有所下降 , 但仍高于正常对照组。
且各剂量中药组肺组织核蛋白 NF -κB活化程度呈剂量相关性 , 表现为高剂量组最低 , 中 、 低剂
量组活化有所下降。结论:各剂量凉膈散均能有效抑制 NF -κB活化 , 中药凉膈散保护机体免受
LPS 损伤作用的机理可能是通过抑制组织核蛋白 NF -κB 的活性 , 从而抑制各种炎症细胞因子的
产生 , 而起到清热解毒的作用 。
关键词:凉膈散　内毒素　肺损伤　核因子-κB
　　本课题选取了临床上治疗温病常用的清热解毒名方
“凉膈散” (宋· 《太平惠民和剂局方》), 在以往对凉膈散的
研究中发现 , 该方有降低内毒素温病动物模型血浆 TNF-
α、 减轻组织病理损害 、 降低死亡率等作用 , 近期研究进一
步发现凉膈散能有效抑制大鼠腹腔巨噬细胞产生 TNF-α,
并对 TNF-α所致次级介质的产生及病理损害有拮抗作
用[ 1 , 2 , 3 , 4 , 5] 。本课题在以往研究的基础上 , 借助现代细胞
分子病理学中相关的细胞信号转导的研究 , 拟从调控细胞
因子等炎症介质的过度产生和释放 , 进一步深入研究凉膈
散解毒作用的机理 , 为中药解毒作用的机制提出新思路 ,
从而将中药解毒法实质推向更深的层次[ 6] 。细胞因子的表
达受特定转录因子的调控 , 其中 , 核因子-κB (NF-κB)
参与许多细胞因子以及炎症介质基因的转录调控 , 在炎症
反应的细胞因子网络调节中起到重要作用[ 7] 。 NF-κB 与
肺损伤的关系也逐渐引起重视 , 本实验通过对注射内毒素
(LPS)造成肺损伤的小鼠灌服凉膈散 , 观察比较不同剂量
的凉膈散组不同时间点肺组织核蛋白 NF-κB 活性 , 论证
凉膈散对内毒素损伤肺组织保护作用的机理。
1　材料和方法
1.1　实验动物和主要试剂　健康雄性昆明种小鼠 , 体重
18 ～ 25g , 由第一军医大学实验动物中心提供。大肠杆菌内
毒素 (E.Coli O111:B4 , lipopolysaccharide , LPS , 美国
Sigma提供)。 RIPA 抽提组织蛋白试剂 , 购自上海申能博
彩生物科技有限公司。考马斯亮蓝 (CBBG-250 , Sigma)。
[γ-32P] -ATP 由北京福瑞生物工程公司-32P 研究室提
供。Gel Shift Assay Systems 试剂盒由 Promega 公司提供。
Nucleo Spin Extraction K it 由美国 Clontech 公司提供 , 其他
试剂为进口或国产分析纯。
四　川　中　医 2004 年第 22 卷第 7 期
16　 Journal of Sichuan of T raditional Chinese Medicine Vol.22 , No.7 , 2004