全 文 ：收稿日期:2012－07－09
基金项目:甘肃省科技支撑计划项目( 0804NKCA119－08)
作者简介:李炀( 1987－) ，男，在读硕士研究生。研究方向:中药制剂工艺与新剂型的研究。
通讯作者:景明( 1963－) ，男，教授，主要从事中藏药资源与开发研究。Tel: 0931－8761250 E-mail: jm@ gszy． edu． cn
湿生扁蕾中 1，7－二羟基－3，8－二甲氧基口山酮对照品的制备
李 炀，景 明，陈 晖
(甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的 研究湿生扁蕾中对照品 1，7－二羟基－3，8－二甲氧基口山酮的制备方法。方法 湿生扁蕾
药材用乙醇提取，从乙醇提取物中分离、制备对照品，采用紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱对其进行
结构鉴定。结果 所得对照品用归一化法定量，质量分数大于 98%。结论 该对照品可作为控制湿生扁蕾
质量的指标成分。
关键词:湿生扁蕾; 1，7－二羟基－3，8－二甲氧基口山酮;制备
中图分类号:R284． 3 文献标识码:B 文章编号:1003－8450(2013)01－0050－03
藏药湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物 Gentianopsis
paludosa(Munro)Ma． 的干燥全草，藏药称机合斗，
产于甘肃、青海、四川、西藏等地区，生长在海拔
2 300 ～ 4 100 m的河滩草地、沟边、山坡。具有清热
解毒、健脾止泻等功能，藏医用全草治疗结膜炎、急
性肾盂肾炎、疮疥肿毒、肝炎、胆囊炎、流行性感冒及
胆病引起的发热等［1］，由湿生扁蕾制成的冲剂对小
儿腹泻有显著的疗效。湿生扁蕾的化学成分主要有
三萜类、口山酮类和黄酮类，口山酮类是其特征性成分
和具有药理活性的主要成分［2］。王焕弟等［3］在对
湿生扁蕾有效成分抑菌作用的研究中发现，1，7－二
羟基－3，8－二甲氧基口山酮的抑菌作用最强。目前制
备藏药湿生扁蕾化学对照品的研究在国内还未见报
道，市场上也无 1，7－二羟基－3，8－二甲氧基口山酮对
照品出售。迄今藏药湿生扁蕾尚缺乏科学的质量控
制标准，制约了湿生扁蕾药用价值的研究和新药开
发。为了建立湿生扁蕾药材质控指标，本实验对湿
生扁蕾化学对照品 1，7 －二羟基－3，8 －二甲氧基
口山酮进行制备研究，为规范藏药湿生扁蕾的质量提
供了可靠的分析方法及理论基础。
1 仪器与药品
Necolet IR － 5DXFT 红外光谱仪(KBr 压片) ，
Bruker 公司 ACF－300 核磁共振仪(TMS 做内标) ，
Nicolet FTMS－2000 质谱仪，岛津 UV2487 型紫外－
可见分光光度仪，Agilent HP1100 高效液相色谱仪，
X－4 数字显示显微熔点测定仪(未校正) ;乙腈、甲
醇均为色谱纯(天津市德恩化学试剂有限公司) ，水
为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯，硅胶 G(青岛海
洋化工有限公司) ;藏药湿生扁蕾药材采自甘肃省
甘南藏族自治州临潭县，经甘肃农业大学陈垣教授
鉴定。
2 方法与结果
2． 1 药材的提取
称取湿生扁蕾粉末(60 目)500 g，加 10 倍量
80%乙醇浸泡过夜，回流提取 3 次，每次 1 h，滤过，
合并滤液，滤液回收乙醇，减压浓缩至无醇味，得湿
生扁蕾提取液约 300 mL，加蒸馏水 500 mL，超声处
理 10 min，使之充分悬浮，用氯仿反复萃取，回收氯
仿后得 48 g浸膏。
2． 2 化合物的分离
硅胶(200 ～ 300 目)600 g 干法装柱，取氯仿萃
取所得浸膏，加等量硅胶拌匀，上样后常压柱色谱分
离，用氯仿－丙酮溶剂系统(90 ∶ 10，80 ∶ 20，70 ∶
30，60 ∶ 40，50 ∶ 50，40 ∶ 60，30 ∶ 70，20 ∶ 80，10 ∶
90)进行梯度洗脱，以氯仿 －甲醇(10 ∶ 1，10 ∶ 2，
10 ∶ 3)为展开剂，对所得组分经薄层检测后，将相
同斑点的馏分合并，得到 6 个部分，其中第 3 部分再
经硅胶柱色谱，以石油醚－醋酸乙酯(100 ∶ 2)洗脱，
放置析出黄色结晶，用乙醇重结晶 3 次，得淡黄色针
晶 320 mg。
2． 3 对照品的结构鉴定
为淡黄色针晶(95%乙醇) ，易溶于氯仿、丙酮、
乙醇;分子式 C15H12O6;熔点为 196 ～ 198 ℃;FeCl3
反应呈阳性;10% H2SO4 乙醇溶液显色为黄色。
—05—
第 30 卷 第 1 期
2013 年 2 月
甘肃 中 医 学 院 学 报
J. GANSU COLLEGE OF TCM
Vol. 30 No. 1
Feb． 2013
UVλmax(MeOH) :238，260，310，375 nm。1 H-NMR
(400 MHz，CDCL3)δ:7． 36 (1H，d，J = 9． 0 Hz，
H-6) ，7． 15(1H，d，J = 9． 0 Hz ，H-5) ，6． 35(1H，d，
J =2． 4 Hz，H-4) ，6． 32(1H，d，J = 2． 4 Hz，H-2) ，
4． 03(3H，s，8-OCH3) ，3． 88(3H，s，3-OCH3) ，13． 13
(1H，s，1-OH)。ESI-MS m/z:289［M + H］+，274
［M+H-CH3］
+，鉴定为 1，7－二羟基－3，8－二甲氧基
口山酮。
2． 4 对照品杂质检查
2． 4． 1 薄层色谱法 取适量 1，7－二羟基－3，8－二
甲氧基口山酮，加甲醇制成 2 mg /mL 的溶液，吸取
5 μL点于硅胶 G 板上，以氯仿－甲醇(10 ∶ 3)为展
开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检
视。结果供试品为一个斑点。薄层色谱图见图 1。
1，2，3，4 对照品;5 溶剂
图 1 对照品薄层色谱图
2． 4． 2 高效液相色谱法 色谱柱 ZORBAX SB－C18
(250 mm×4． 6 mm，5 μm) ，检测波长 260 nm，流速
为 1． 0 mL /min，柱温 25 ℃，对照品质量浓度为
0． 46 mg /mL(甲醇) ，进样量 10 μL，以乙腈－0． 4%
磷酸水溶液(40 ∶ 60)、乙腈 － 0． 4% 磷酸水溶液
(50 ∶ 50)、乙腈－0． 4%磷酸水溶液(60 ∶ 40)为流动
相分别测定。结果表明，对照品为一个主峰，保留时
间分别为 13． 91，10． 33，6． 79 min。改变流动相分析
时未出现异常峰。
2． 5 对照品纯度检测
2． 5． 1 高效液相色谱( HPLC) 面积归一化法 色
谱柱 ZORBAX SB－C18(250 mm×4． 6 mm，5 μm) ，乙
腈－0． 4%磷酸水溶液(50 ∶ 50)为流动相，检测波长
为 260 nm，对照品溶液质量浓度为 0． 46 mg /mL，采
集时间比保留时间延长 1 倍以上，归一化法计算，质
量分数为 98． 22%。高效液相色谱图见图 2。
图 2 对照品高效液相色谱图
2． 5． 2 不加校正因子的主成分自身对照法 对照
品溶液质量浓度为 0． 460，0． 018 mg /mL，按照上述
高效液相色谱法分别测定，计算，杂质质量分数
1． 69%，对照品质量分数 98． 31%。
3 讨论
初步预试验筛选结果表明，乙醇和甲醇作为提
取溶媒都有很好的提取效果，考虑到乙醇更加安全、
无毒，试验选用乙醇作为提取溶剂。预试验同时采
用冷浸法和热回流法提取湿生扁蕾的化学成分，含
量测定显示，热回流提出的 1，7－二羟基－3，8－二甲
氧基口山酮比冷浸法提出的含量高。
藏药湿生扁蕾所含口山酮类成分主要有 1，8－二
羟基－3，7－二甲氧基口山酮、1－羟基－3，7，8－三甲氧
基口山酮、1，7－二羟基－3，8－二甲氧基口山酮、1－0－β－
D－葡萄糖苷－7－羟基－3，8－二甲氧基口山酮，其中 1，
7－二羟基－3，8－二甲氧基口山酮是湿生扁蕾具有药理
活性的特征性成分之一，自制的 1，7－二羟基－3，8－
二甲氧基口山酮对照品，HPLC 归一化法测定纯度达
98%以上，含量符合《新药审批办法》中规定的中药
化学对照品纯度在 98%以上的要求，可作为湿生扁
蕾的化学对照品使用。
本试验结果显示，通过现代科学方法制备湿生
扁蕾的化学对照品并建立质量标准可行，但化学对
照品制备工艺考察，质量标准研究中药材产地、鉴别
和指纹图谱的研究等还有待进一步完善和规范。
参考文献:
［1］张宝琛，甄润德，胡柏林，等． 湿生扁蕾的化学成分研
究［J］．中草药，1980，11(4) :149．
［2］王焕弟，谭成玉，杜昱光，等． 藏药湿生扁蕾的化学成分
研究［J］．中国药学杂志，2005，40(14) :1059．
［3］王焕弟，谭成玉，白雪芳，等． 藏药湿生扁蕾的抑菌作用
研究［J］．时珍国医国药，2006，17(10) :190．
—15—
第 30 卷 第 1 期
2013 年 2 月
甘肃 中 医 学 院 学 报
J. GANSU COLLEGE OF TCM
Vol. 30 No. 1
Feb． 2013
The preparation of reference substance of 1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone in
Gentianopsis paludosa
Li Yang，Jing Ming，Chen Hui
(Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China)
Abstract:Objective To study the preparation method of reference substance of 1，7-dihydroxy-3，8-dime-
thoxyxanthone in Gentianopsis paludosa． Methods Used ethanol extract Gentianopsis paludosa，isolated and pre-
pared reference substance from the ethanol extract for structural identification by using ultraviolet spectroscopy，in-
frared spectroscopy，mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectra． Results The reference substance
mass fraction is greater than 98% with the normalized quantitative． Conclusion The reference substance can be
used as index component on controlling the quality of Gentianopsis paludosa．
Key words:Gentianopsis paludosa;1，7-dihydroxy-3，8-dimethoxyxanthone;preparation
櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊
收稿日期:2012－08－31
基金项目:浙江省科技厅现代中药制剂及其重点关键技术研究科技创新团队子课题( 2012R10044－09) 、浙江省中医药管理局青年教师资助项
目( 2010ZQ001)
作者简介:章德军( 1988－) ，男，在读硕士研究生，主要从事药物新剂型与新技术研究。
通讯作者:熊阳( 1979－) ，女，副教授，理学博士，主要从事中药新剂型与新型给药系统研究。Tel: 0571－86613524 E-mail: xyxnb@ 126． com
农吉利碱油水分配系数的紫外分光光度测定法研究
章德军，黄绳武，熊 阳
(浙江中医药大学，浙江 杭州 310053)
摘 要:目的 测定农吉利碱的油水分配系数，为农吉利碱脂质体经皮制剂处方设计提供参考。方法
建立农吉利碱的紫外含量测定方法，采用摇瓶法，正辛醇－水系统测定农吉利碱的油水分配系数。结果 农
吉利碱在 39． 04 ～ 175． 68 μg /mL质量浓度范围内与吸光度呈现良好的线性关系，平均回收率为( 100． 86±
1． 36) %，RSD为 1． 35% ( n = 6 ) ，实验测定得到农吉利碱的油水分配系数值为 3． 659，logP 值为 0． 563。
结论 紫外分光光度法操作简便，准确性高，可作为农吉利碱油水分配系数的测定方法;从农吉利碱的油水
分配系数来看，将农吉利碱制备成脂质体经皮制剂时需要采取一定的措施提高包封率以及增加药物的经皮
渗透性。
关键词:农吉利碱;紫外分光光度法;油水分配系数
中图分类号:R284 文献标识码:B 文章编号:1003－8450(2013)01－0052－03
农吉利碱(Monocrotaline)又称农吉利甲素、野
百合碱、猪屎豆碱、大叶猪屎豆碱等，是临床常用、试
验研究较多、研究较为透彻的抗癌中药成分，对多种
实验性肿瘤有抑制作用［1］，临床主要适用于皮肤
癌，如鳞状细胞癌(SCC)和基底细胞癌(BCC)［2］，疗
效确切。
农吉利碱属于吡咯里西啶类生物碱(PA) ，目前
PA是已知的最重要的植物性肝毒成分，被称为肝毒
吡咯里西啶生物碱，若被吸收进入体循环具有较大的
毒性，除可引起造血功能抑制、白细胞和血小板下降、
骨髓抑制和胃肠道反应、泌尿系统刺激等症状外，最
明显的毒性是肝脏毒性，它对肝脏具有蓄积的、不可
逆的、强烈的毒性作用，可引起肝细胞出血性坏死、肝
巨细胞症及静脉闭塞症等［3］。但事实上，农吉利碱原
形化合物毒性较弱，而是在经过肝脏转化成代谢产物
后引起肝毒性，因此，在民间或医院中常采用农吉利
鲜草浆或干品粉末外敷用于治疗 SCC 和 BCC，毒性
小并且效果良好［4］，但是临床应用不便。
—25—
第 30 卷 第 1 期
2013 年 2 月
甘肃 中 医 学 院 学 报
J. GANSU COLLEGE OF TCM
Vol. 30 No. 1
Feb． 2013