全 文 ：文章编号:1001 － 4829(2011)04 － 1490 － 05
收稿日期:2011 － 04 － 13
基金项目:四川省青年科技基金资助项目(08ZQ026-034) ;四川
省科技厅资助项目(07jy029-023) ;四川省科技厅支撑项目
(2008FZ0148) ;四川省科技厅产学研创新联盟合作项目
作者简介:母贵琴(1976 －) ，女，四川简阳人，博士，研究方向:
作物遗传育种，* 为通讯作者，E-mail:zhang8434@ sina． com。
撒尔维亚组织培养与快繁技术研究
母贵琴1，张 磊2，王 萌2，王 涛2，张 利2*
(1．四川农业大学农学院;2．四川农业大学生命科学与理学院，四川 雅安 625014)
摘 要:以撒尔维亚带芽茎段、叶片、种子为外植体，进行组织培养与快繁技术研究。利用正交试验设置不同激素配比的培养基，
对不同外植体分别进行增殖和生根培养，结果表明:撒尔维亚组织培养最适外植体为带芽茎段;芽诱导和增殖的最适培养基为 MS
+ IBA 0． 50mg /L + KT 0． 40mg /L + 6-BA 0． 80mg /L;最适生根培养基为 1 /2 MS + NAA 0． 50 mg /L +蔗糖 20 g·L －1。
关键词:撒尔维亚;组织培养;快速繁殖
中图分类号:S567． 23 文献标识码:A
Tissue Culture and Rapid Propagation Techniques in Salvia officinalis L．
MU Gui-qin1，ZHANG Lei2，WANG Meng2，WANG Tao2，ZHANG Li2*
(1． Department of Agricultural Science，2． Department of Biology and Science，Sichuan Agricultural University，Sichuan Yaan 625014，China)
Abstract:The tissue culture and rapid propagation techniques were developed by using bud，leaves and seeds as explants in Salvia officina-
lis． The three different explants were cultured for proliferation and rooting on the medium with different hormones according to orthogonal de-
sign． The results showed that bud was the optimal explants for tissue culture of S． officinalis，the medium of MS + IBA 0． 50 mg·L －1 + KT
0． 40 mg·L －1 + 6-BA 0． 80 mg·L －1 was the best for bud differentiation，and the medium of 1 /2MS + NAA0． 50 mg·L －1 + sucrose 20
g·L －1 was the best for rooting．
Key words:Salvia officinalis;Tissue culture;Rapid propagation
撒尔维亚(Salvia officinalis L．)又名圆丹参、洋
苏叶，为唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属(Salvia)植物，
多年生小灌木或半灌木。原产欧洲，我国有少量引
种，为集药用、芳香于一身的植物，全株含香精油或
挥发油，有收敛、祛风的作用，用于治疗消化不良。
撒尔维亚精油亦可作为食用调香剂，用于肉类食品
炖卤、煲汤或香肠、罐头食品、奶制品的调味剂［1］。
国外对撒尔维亚的化学成分及其作用进行了大量的
研究工作，开发了许多相关产品，国内在这方面也有
一定研究［2 ～ 5］。随着植物组培技术日益成熟，组织
培养在科学研究和生产上开辟了令人振奋的多个新
领域，成为举世瞩目的生物技术之一。目前国内外
对同属的 S． splenden，S． miltiorrhiza，S． deserta，S．
nemorosa，S． farinacea 等组织培养进行了大量研究
并已逐渐应用于实际生产中［6 ～ 9］，而对于撒尔维亚
组织培养技术仅做过初步探索，离实际应用还有较
大差距［10］。本研究旨在通过设计不同激素配比的
正交试验进行不同外植体的增殖、生根培养研究，建
立撒尔维亚组织培养方法，完善其快速繁殖体系，为
撒尔维亚及鼠尾草属植物的资源开发和利用奠定基
础。
1 材料与方法
1. 1 材料
材料从美国国家种质资源库征集后种植于四川
农业大学药用植物园中，经四川农业大学周永红教
授鉴定为撒尔维亚(S． officinalis L．) ，取种子、叶
片、带芽茎段为外植体备用。
1. 2 方法
1． 2． 1 外植体的处理 3 种外植体均用自来水冲
洗 2 ～ 3 h，经无菌水冲洗 2 次后于超净工作台上用
75 %的酒精消毒 30 s，0． 1 %的 HgCl2 溶液消毒 8
0941
西 南 农 业 学 报
Southwest China Journal of Agricultural Sciences
2011 年 24 卷 4 期
Vol. 24 No. 4
DOI:10.16213/j.cnki.scjas.2011.04.038
表 1 芽诱导培养基试验的因素水平表
Table 1 Factors and levels of the mediums for bud induction
水 平
因 素
A(IBA)
(mg·L －1)
B(NAA)
(mg·L －1)
C(6-BA)
(mg·L －1)
D(KT)
(mg·L －1)
1 0． 00 0． 00 0． 30 0． 00
2 0． 50 0． 17 0． 80 0． 20
3 1． 00 0． 14 1． 30 0． 40
min，无菌水冲洗 5 ～ 8 次。将叶片切成 1 cm2 的方
形，茎段切成长约 1 cm的带腋芽小段。
1． 2． 2 外植体的接种 将灭菌完毕的外植体置于
无菌滤纸上，吸干水分，接种在不同的芽诱导培养基
上，每个处理接种 3 ～ 4 个外植体，重复 3 次，置于光
照培养箱培养，(25 ± 2)℃;光照时间:12 h /d;光照
强度为 1800 ～ 2500 lx。分别在接种后 10 ，30 和 60
d观察并记录生长情况。
1． 2． 3 芽诱导培养基激素配比 采用四因素三水
平 L9(3
4)正交试验设计，考察植物激素对撒尔维亚
芽诱导及增殖的影响，以 MS 为基本培养基，添加 A
(IBA)、B(NAA)、C(6-BA)、D(KT)4 种激素，激素
和浓度水平见表 1。
1． 2． 4 生根培养基的激素配比 获得一定数量的
增殖苗后，将撒尔维亚苗转接到生根培养基中。以
1 /2MS +蔗糖 20 g·L －1为基本培养基，添加不同浓
度的激素 A1:NAA 0． 10 mg·L
－1、A2:NAA 0． 50 mg
·L －1、A3:NAA 0． 90 mg·L
－1、B1:IBA0． 50 mg·
L －1、B2:IBA 0． 80 mg·L
－1和 B3:IBA 1． 10 mg·
L －1，观察记录数据，20 d 后统计生根率和生长状
况。生根率 = (生根的芽数目 /接种的芽数目)×
100 %。
2 结果与分析
2. 1 外植体的选择
不同撒尔维亚外植体接种培养结果见表 2。从
表中可以清楚地看出:相对于种子和叶片，撒尔维亚
带芽茎段作为外植体成芽效果最好，带芽茎段是撒
尔维亚组织培养快速繁殖的最适外植体(图 1)。
2. 2 芽诱导培养基最优激素配比选择
以带芽茎段为外植体所获得的试验数据及极差
分析结果列于表 3。从芽诱导增殖倍数来看，9 种不
同的激素配比对撒尔维亚的芽诱导影响有一定差
异。极差分析结果表明，各因素的水平改变对芽诱
导的影响不同。因子 A(IBA)的极差最大为 3．
6027，其水平的改变对试验指标的影响最大，因此 A
因子是考虑的主要因素，从均值来看，其第 2 水平所
对应的数值 5． 0000 最大，所以取它的第 2 水平最
好。B(NAA)、D(KT)因素的极差分别为 1． 3333、1．
6667，表明他们的影响能力相近，其中 B 因子的第 1
水平和 D因子的第 3 水平所对应的值最大，均为 3．
6667，故取 B因子的第 1 水平和 D 因子的第 3 水平
最好。因子 C(6-BA)的极差 1． 0000 最小，说明它
的水平改变对试验指标影响最小，以第 2 水平对应
的数值 3． 3333 最大，取它的第 2 水平最好。各因素
对撒尔维亚芽诱导的影响大小顺序为 A(IBA)＞ D
表 2 撒尔维亚不同外植体接种培养结果
Table 2 The result of different S． officinalis explants after inoculation
外植体 接种数(个) 接种 10 d 接种 30 d 接种 60 d
种子 30 外表有白色絮状物质，
接种时出现粘连，未生长
未诱导出芽 未诱导出芽
带芽茎段 30 50 %诱导出芽 80 %诱导出芽 平均每个外植体成芽 2 ～ 4 个
叶片 30 40 %叶片边缘出现褐化 60 %出现褐化，且部分
褐化处周围透明培养基变黑
全部褐化
图 1 撒尔维亚带芽茎段诱导的芽(A、B分别为接入培养基 10 与 30 d后的生长情况)
Fig． 1 Shoots differentiated from bud in S． officinalis (A and B represented the growth conditions of 10 and 30 days after inoculations，respectively)
19414 期 母贵琴等:撒尔维亚组织培养与快繁技术研究
表 3 不同激素配比对芽诱导的影响结果计算表
Table 3 The results of bud induction based on different hormone ratios
处理号 第 1 列 第 2 列 第 3 列 第 4 列 芽诱导增殖倍数
1 0． 00 0． 00 0． 30 0． 00 2
2 0． 00 0． 07 0． 80 0． 20 3
3 0． 00 0． 14 1． 30 0． 40 3
4 0． 50 0． 00 0． 80 0． 40 7
5 0． 50 0． 07 1． 30 0． 00 4
6 0． 50 0． 14 0． 30 0． 20 4
7 1． 00 0． 00 1． 30 0． 20 2
8 1． 00 0． 07 0． 30 0． 40 1
9 1． 00 0． 14 0． 80 0． 00 0
极差分析结果
总和 因子 水平 1 水平 2 水平 3
A 8． 0000 15． 0000 3． 0000
B 11． 0000 8． 0000 7． 0000
C 7． 0000 10． 0000 9． 0000
D 6． 0000 9． 0000 11． 0000
均值 因子 水平 1 水平 2 水平 3
A 2． 6667 5． 0000 1． 0000
B 3． 6667 2． 6667 2． 3333
C 2． 3333 3． 3333 3． 0000
D 2． 0000 3． 0000 3． 6667
因子 极小值 极大值 极差 R 调整 R＇
A 1． 0000 5． 0000 4． 0000 3． 6027
B 2． 3333 3． 6667 1． 3333 1． 2009
C 2． 3333 3． 3333 1． 0000 0． 9007
D 2． 0000 3． 6667 1． 6667 1． 5011
(KT)＞ B(NAA)＞ C(6-BA) ，最好的组合方案为
A2B1C2D3。
根据 9 种组合对芽诱导结果进行方差分析(表
4) ，F检验结果表明，4 个因素对芽诱导的影响均未
达到显著水平。
2. 3 生根培养
不同培养基激素配比对生根诱导影响结果见表
5。结果显示，在接种后 20 d 均有白色根长出，30 d
后根长均超过 3 cm，且根系健壮，可以满足移栽要
求(图 2)。较优生根培养基为 A2:1 /2MS + NAA0．
50 mg·L －1 +蔗糖 20g·L －1。
2. 4 炼苗与移栽
将根系生长良好的壮苗在光照培养箱中进行开
口炼苗，保持较高空气湿度使嫩苗逐渐与外界接触，
3 d后取出试管苗，用流水将根部培养基冲洗干净，
移植到蛭石∶腐殖土 = 1∶ 2 的混合基质中，放置到温
表 4 芽诱导正交试验方差分析表
Table 4 Variance analysis of bud induction orthogonal experiment
变异来源 SS df MS F F0． 05(2，2)
A 24． 2222 2 12． 11 15． 57ns 19． 00
B 2． 8889 2 1． 44 1． 86ns
D 4． 2222 2 2． 11 2． 71ns
C(误差) 1． 5556 2 0． 78
总变异 32． 8889 8
2941 西 南 农 业 学 报 23 卷
表 5 不同培养基激素配比对生根的影响
Table 5 Different media hormone ratio of root training effects
处理组合
培养时间
(d) 生根条数
A1 20 1
A2 20 4
A3 20 0
B1 20 1
B2 20 1
B3 20 0
室中进行炼苗，20 d 后移至试验地中种植，30 d 后
统计移栽情况，移栽成活率可达 90 %。
3 讨 论
植物组织培养研究途径主要是通过先诱导愈伤
组织产生不定芽再获得再生植株来实现快速繁殖。
有学者认为外植体经过脱分化产生的愈伤组织容易
产生变异，可以采用外源的细胞分裂素，促使具有顶
芽或带腋芽的茎段启动生长，形成一个微型的多枝
多芽的小灌木丛状结构，这个途径跳过了愈伤组织
阶段，降低了变异的发生，有利于保持原材料的优良
特性［11］。本研究即采用此法，采用撒尔维亚的种
子、带芽茎段和叶片作为外植体，不经过愈伤组织阶
段，直接启动芽的增殖和生长，结果表明利用带芽茎
段作为外植体直接进行芽诱导其诱导率可达 80 %，
为撒尔维亚的快速繁殖提供了新途径。
外植体的褐变是植物组织培养成功的主要障碍
之一［12］。组织培养过程中外植体创口面发生的褐
变，常导致整个外植体变褐死亡，并使培养基颜色转
褐。对于本试验中叶片产生严重褐化可能一方面是
由于成熟叶片是高度分化的组织，其中的次生代谢
产物含量较高所致;另一方面由于在切分叶片的时
候产生伤口，从而使外植体中的多酚类物质暴露于
空气中，被多酚氧化酶等氧化成醌类物质导致褐
化［13］。
植物激素是培养基中的关键物质，在基本培养
基确定的前提下，筛选合适的激素种类和激素配比
是组织培养成功与否的关键。细胞分裂素有促进细
胞分裂和分化，延迟组织衰老，增强蛋白质合成，抑
制顶端优势，促进侧芽生长及显著地改变其它激素
作用地特点。生长素的主要作用在于诱导愈伤组织
的形成，胚状体的产生以及试管苗的生根。试验采
用正交设计试验方式，能够在传统的单因子比较分
析的基础上，容纳更多的因素和水平，同时大大减少
试验的次数，提高准确率。方差分析结果显示四个
图 2 撒尔维亚生根诱导
Fig． 2 Rooting culture in S． officinalis
因素对芽诱导的影响均未达到显著水平，究其原因
可能是试验误差大且误差自由度小(仅为 2) ，使检
验的灵敏度低，从而掩盖了考察因素的显著性［14］。
因此，可直接根据直观分析结果选择最优激素水平
组合。研究结果表明，IBA 对撒尔维亚培养过程中
芽的诱导影响最大，其次为 KT和 NAA，最适培养基
为:MS + IBA0． 50 mg·L －1 + KT0． 40 mg·L －1 + 6-
BA0． 80 mg·L －1。诱导外植体形成不定芽时，一般
使用相对较高的细胞分裂素浓度，与本实验研究结
果一致。
增殖苗生根时一般使用较高浓度的生长素和较
低浓度的细胞分裂素，有的单独使用细胞分裂素也
有很好的效果［15］。有实验证明，试管苗生根时加入
细胞分裂素，不仅不能促进试管苗的生根，反而不利
于试管苗的生根［16］。本研究结果显示，直接使用较
低浓度的生长素即可利于其生根，撒尔维亚最适生
根配方为:1 /2 MS + NAA0． 50 mg·L －1 +蔗糖 20 g
·L －1。
本研究为撒尔维亚的无性繁殖提供了一种高效
方法，有助于短期内提供大量的试管苗，通过人工栽
培扩大资源，确保撒尔维亚资源的可持续利用，同时
也为利用生物技术进行撒尔维亚有效成分的工厂化
生产奠定了基础。
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(责任编辑 李 洁)
4941 西 南 农 业 学 报 23 卷