全 文 ：黑龙江农业科学２０１２（１１）：２１～２４
Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
活血丹子叶无性系建立的研究
张　瑜，柏彦伸，孙靖靓，宁淑香，姜长阳
（辽宁师范大学 生命科学学院，辽宁 大连１１６０２９）
摘要：为保护资源和实现栽培，以活血丹的子叶为材料，采用组织培养的方法，进行了愈伤组织诱导与分化、
试管苗生根、继代增殖、扦插和定植的研究，建立起无性系。结果表明：ＭＳ＋ＫＴ　０．４ｍｇ·Ｌ－１＋２，４－Ｄ
１．８ｍｇ·Ｌ－１是愈伤组织诱导培养和继代增殖培养的理想培养基；１／２ＭＳ＋ＡｇＮＯ３０．７ｍｇ·Ｌ－１ ＋ＺＴ
０．２ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１是愈伤组织分化培养的理想培养基；用浓度为２．０ｍｇ·Ｌ－１的 ＡＢＴ２号溶液对
不定芽进行４８ｈ处理、Ｎ６＋ＩＡＡ　０．２ｍｇ·Ｌ－１是不定芽生根培养的理想培养基；Ｎ６＋ＡＢＴ２号０．５ｍｇ·Ｌ－１＋
ＩＡＡ　０．４ｍｇ·Ｌ－１是试管苗生根继代增殖培养的理想培养基；试管苗扦插成活率为９６．３％，定植成活率为
９８．２％；定植的试管苗保持了活血丹的所有植物学性状。
关键词：活血丹；组织培养；无性系
中图分类号：Ｓ５６７．２３＋９　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００２－２７６７（２０１２）１１－００２１－０４
收稿日期：２０１２－０９－０１
基金项目：辽宁省普通高等教育本科教学改革研究资助项
目（２０１２０３０４１－４）；辽宁省大学生创新创业训 练 资 助 项
目（２０１２０３０１５０１１）
第一作者简介：张瑜（１９９２－），女，辽宁省沈阳市人，在读学
士，从事植物组织培养研究。
通讯作者：姜长阳（１９５３－），男，辽宁省大连市人，学士，教授，
从事植物技术研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈａｎｇｙａｎｇｊｉａｎｇ＠１２６．ｃｏｍ。
　　活血丹（Ｇｉｅｃｈｏｍａ　ｌｏｎｇｉｔｕｂａ）又称佛耳草、金
钱草、连钱草等，属于唇形科连钱草属多年生草本
植物［１］，生长在林缘和溪边等环境中，在辽宁省的
沈阳、大连、鞍山及抚顺等地也有分布［２］。活血丹
的茎叶含左旋松樟酮、对聚伞花素、异薄荷酮、柠
檬烯等化学成分，作中草药用，具有利湿清热、散
瘀消肿等功效，能治热淋石淋、湿热黄疸、暑热症、
伤风咳嗽、胎咳、子肿、小儿疳积、疮痈肿痛、牙痛、
跌打损伤等疾病［３］。另外，活血丹也是一种人们
常吃的山野菜［４］。由于活血丹既有重要的药用价
值，又具有一定的食用价值，长期以来，人们一直
在大量的采集药用或食用，从而导致野生活血丹
锐减，使大连地区的活血丹资源濒危。因此，有人
试图进行栽培，但又难以得到栽种所需要的大量
种子，无法实现栽培。为保护活血丹衍生资源，满
足栽培对种苗的需求，研究者进行了野生活血丹
子叶和下胚轴无性系建立的研究。虽然已有活血
丹组织培养研究的报道［５－７］，但迄今未见活血丹子
叶无性系建立研究的报道。
１　材料与方法
１．１　材料灭菌及无菌苗的获得
２００９年９月，将生长于大连郊区山坡林缘的
活血丹种子采回实验室后，置于１００ｍＬ的磨口
广口瓶中，用自来水洗涤３次后，用蒸馏水洗涤３
次，再用０．００５％的安利洗涤液洗涤１０ｍｉｎ。接
着，用蒸馏水洗涤将安利液洗净，转移到超净工作
台上，用７５％的酒精灭菌约１５ｓ，迅速用蒸馏水
漂洗３次。再用０．０５％的 ＨｇＣｌ３灭菌１５ｍｉｎ，然
后用无菌水洗涤５次，将洗涤的无菌水倒净，把磨
口的瓶盖盖严后，放到２５℃恒温箱中处理２４ｈ
后，再用０．０５％的 ＨｇＣｌ３灭菌１５ｍｉｎ，并洗涤５
次，即可获得无菌种子。将无菌种子接种到１／２
ＭＳ０＋蔗糖１０ｇ·Ｌ－１的培养基上，在２５℃的温箱
中培养１０～１５ｄ，即可获得活血丹的灭菌苗。
１．２　培养条件
培养基加蔗糖２０ｇ·Ｌ－１，培养基ｐＨ６．２，动力
强度为２４０ｇ·ｃｍ－２［８］；在温度为２６℃，光照强度
为３　５００ｌｘ、１２ｈ·ｄ－１的条件下培养［９］。
１．３　方法
１．３．１　愈伤组织的培养　将无菌苗子叶剪成边
长为０．２ｃｍ 左右的块状，将下胚轴切成长约
０．６ｃｍ的轴段后，接种到以 ＭＳ＋ＫＴ　０．４ｍｇ·Ｌ－１
为基本培养基，附加浓度 分 别 为 ０．９、１．８、
２．７ｍｇ·Ｌ－１的ＩＡＡ、ＮＡＡ、２，４－Ｄ、ＩＢＡ的培养基
上，进行愈伤组织的诱导培养，试验重复３次，每
种处理接种１００块材料。
１．３．２　愈伤组织分化的培养　把诱导的子叶愈
伤组织经增殖培养的颗粒愈伤组织，在培养瓶内
分成由５～１０个颗粒组成的愈伤组织块后，接种
到附加浓度不同的 ＮＡＡ、ＩＢＡ、ＩＡＡ的１／２ＭＳ＋
ＡｇＮＯ３０．７ｍｇ·Ｌ－１＋ＺＴ　０．２ｍｇ·Ｌ－１培养基上，进
１２
　　　　　黑　龙　江　农　业　科　学 １１期
行分化培养试验。分化试验重复２次，每种培养
基接种１００块材料。
１．３．３　不定芽的生根培养　向培养着丛生不定
芽的培养瓶内加入５ｍＬ浓度为２．０ｍｇ·Ｌ－１的
ＡＢＴ２号溶液，将不定芽处理４８ｈ后，把不定芽从
基部切下，接种到附加０．４ｍｇ·Ｌ－１　ＩＡＡ的１／４ＭＳ、
Ｗｈｉｔｅ、Ｂ５、Ｎ６和ＬＳ五种培养基上，进行生根试验。
试验重复３次，每种培养基接种１００个材料。
１．３．４　试管苗的扦插和定植　将增殖培养的试
管苗从瓶中拔取，放到底部有一层深０．５～１．０ｃｍ
的ＡＢＴ２号溶液的塑料盘中，处理并炼苗３ｄ，然后
将试管苗根部剪掉，再把上部从中间剪开，形成两
个茎段后，把每个茎段的下部叶剪掉，上部保留１～
２个叶片，接着，把茎段下部插入已浇透水、上层为
干净河沙、并事先打上小孔的温室营养钵中。扦插
试验重复了２次，扦插的茎段数量分别为：９８０、
１　０５０段。扦插后前１２ｄ内保持湿度９０％～９５％、
温度１９℃以上和无直射光的环境条件。５月中旬，
将在温室中扦插成活的试管苗定植到大连郊区的
溪旁，共定植１　９４０株，定植后进行正常管理。
２　结果与分析
２．１　不同浓度生长素对子叶和下胚轴愈伤组织
诱导培养的影响
　　由表１可见，培养到５０ｄ时，在附加不同浓
度２，４－Ｄ的培养基上，愈伤组织的诱导生长效果
较好；其中在２，４－Ｄ的浓度为１．８ｍｇ·Ｌ－１这一培
养基上，诱导生长愈伤组织的诱导生长效果最好；
不仅愈伤组织的诱导率最高，而且愈伤组织生长
得最大，色泽、形态和长势都较理想。对培养过程
的观察还表明，在附加浓度为１．８ｍｇ·Ｌ－１　２，４－Ｄ
这种培养基上，培养７ｄ可见有的材料开始生长
出愈伤组织；培养到４５ｄ时，诱导生长的愈伤组
织就生长为半球形，表面为嫩绿色颗粒状、生长非
常旺盛的愈伤组织。把在附加浓度为１．８ｍｇ·Ｌ－１
２，４－Ｄ这种培养基上由子叶诱导培养的嫩绿色、
颗粒状愈伤组织分割大小为０．３～０．４ｃｍ的愈伤
组织块，继续接种到附加浓度为１．８ｍｇ·Ｌ－１　２，４－
Ｄ这种培养基上进行愈伤组织的继代增殖培养。
经过４６ｄ的培养，就可以培养生长一代与用子叶
块为材料，在这种培养基上诱导培养５０ｄ生长的
几乎完全一样的嫩绿色颗粒半球状愈伤组织块。
重复的３次试验，每次试验增殖６代的统计证明：
平均每代愈伤组织的增殖系数为２４．６。３次重复
试验的结果基本一致。以子叶为材料进行愈伤组
织诱导和继代增殖培养的结果证明：ＭＳ＋ＫＴ
０．４ｍｇ·Ｌ－１＋２，４－Ｄ　１．８ｍｇ·Ｌ－１是活血丹子叶诱
导愈伤组织培养与增殖培养的理想培养基。
表１　不同浓度生长素对子叶和下胚轴愈伤组织诱导培养的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｕｘｉｎｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｏｆ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ　ａｎｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ
生长素
Ａｕｘｉｎｓ
浓度／ｍｇ·Ｌ－１
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
诱导率／％
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
愈伤组织色泽、形态及平均大小／ｃｍ
Ｃｏｌｏｒ，ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｍｅｄｉａ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ
长势
Ｇｒｏｗｔｈ
无 ０ ０ ０ －
ＩＡＡ　 ０．９　 ０　 ０ －
ＩＡＡ　 １．８　 ５ 白色、松软、０．３ ＋
ＩＡＡ　 ２．７　 ３ 白色、松软、０．２ ＋
ＮＡＡ　 ０．９　 ３８ 白黄相间、较硬、０．８ ＋＋
ＮＡＡ　 １．８　 ５９ 白黄浅绿相间、较硬、１．３ ＋＋
ＮＡＡ　 ２．７　 ５６ 白黄浅绿相间、较硬、１．６ ＋＋
２，４－Ｄ　 ０．９　 ６４ 浅绿、表面较光滑、１．９ ＋＋
２，４－Ｄ　 １．８　 ９３ 嫩绿色、表面颗粒状、１．９ ＋＋＋
２，４－Ｄ　 ２．７　 ９１ 浅绿、表面凸凹、１．９ ＋＋
ＩＢＡ　 ０．９　 ０　 ０ －
ＩＢＡ　 １．８　 ０　 ０ －
ＩＢＡ　 ２．７　 ０　 ０ －
　　注：－为不生长；＋生长较差；＋＋生长一般；＋＋＋生长旺盛。下同。
Ｎｏｔｅ：－ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｎｏ　ｇｒｏｗｔｈ；＋ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｗｏｒｓｅ　ｇｒｏｗｔｈ；＋＋ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ；＋＋＋ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｇｏｏｄ　ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
２２
１１期 　　张　瑜等：活血丹子叶无性系建立的研究
２．２　不同浓度生长素对愈伤组织分化培养的
影响
　　由表２可见，培养至５４ｄ时，在附加浓度不
同的ＮＡＡ的培养基上培养的愈伤组织分化效果
较好。其中在附加浓度为０．１ｍｇ·Ｌ－１　ＮＡＡ的培
养基上，分化效果最好。不仅分化率为９６％、培
养的每块愈伤组织平均能分化出３．６个不定芽，
而且不定芽长势好。对分化培养过程的观察还显
示，在附加浓度为０．１ｍｇ·Ｌ－１　ＮＡＡ的培养基上
培养到６ｄ时，就可见在愈伤组织块的顶端形成
大小０．１～０．２ｃｍ的不定芽；培养到５４ｄ时，每
个愈伤组织块就会分化生长一个由２～７个、高
０．５～１．３ｃｍ、外观长势较旺盛的不定芽丛。２次
重复试验统计结果大致相同。结果证明：活血丹
子叶愈伤组织分化培养的理想培养基为１／２
ＭＳ＋ＡｇＮＯ３０．７ｍｇ·Ｌ－１＋ＺＴ　０．２ｍｇ·Ｌ－１＋
ＮＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１。
表２　不同浓度生长素对愈伤组织分化培养的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｕｘｉｎｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ
ＩＢＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
ＩＡＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
分化率／％
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
平均分化不定芽个数
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｂｕｄｓ　ｏｎ　ｅａｃｈ　ｃａｌｕｓ
长势
Ｇｒｏｗｔｈ
０ ０ ０ ０ ０ －
０．１　 ０　 ０　 ０　 ０ －
０．５　 ０　 ０　 ０　 ０ －
１．０　 ０　 ０　 ０　 ０ －
１．５　 ０　 ０　 ０　 ０ －
０　 ０．１　 ０　 ２９　 １．３ ＋
０　 ０．５　 ０　 ３５　 １．２ ＋
０　 １．０　 ０　 ０　 ０ －
０　 １．５　 ０　 ０　 ０ －
０　 ０　 ０．１　 ９６　 ３．６ ＋＋
０　 ０　 ０．５　 ４１　 ２．３ ＋
０　 ０　 １．０　 １６　 ２．１ ＋
０　 ０　 １．５　 １１　 １．０ ＋
２．３　不同培养基对不定芽生根培养的影响
培养到３０ｄ时统计，结果证明：以Ｎ６为基本
培养基的生根效果最好。在这种培养基上，３次
重复实验的平均生根率达到了９７．６％，平均每株
试管苗的高度４．８ｃｍ、具有７．３条白色根、６．４个
叶片、茎粗０．２３ｃｍ，外观上试管苗生长非常旺
盛。把由不定芽生根培养的试管苗，切成至少有
２个叶片、长约１．５ｃｍ 的茎段后，直接接种到
Ｎ６＋ＡＢＴ２号０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ　０．４ｍｇ·Ｌ－１这
种培养基上，进行生根继代增殖培养。３次重复
试验，每次增殖７代的统计结果表明：２８ｄ为一个
增殖培养周期，会培养出一代长势与不定芽３０ｄ
为一个生根周期培养的试管苗长势一致每个培养
周期的繁殖系数为２．７，几乎没有无效苗。说明：
对不定芽用浓度为２．０ｍｇ·Ｌ－１的 ＡＢＴ２号溶液
进行４８ｈ处理后，不定芽生根培养的理想培养基
是Ｎ６＋ＩＡＡ　０．４ｍｇ·Ｌ－１；试管苗生根继代增殖培
养的理想培养基是 Ｎ６＋ＡＢＴ２号０．５ｍｇ·Ｌ－１＋
ＩＡＡ　０．４ｍｇ·Ｌ－１。
２．４　试管苗的扦插与定植
扦插成活后１４ｄ可长出新叶，扦插３０ｄ后的
平均成活率为９６．３％。
定植后４０ｄ统计，共成活１　９０５株，扦插成活
率为９８．２％。扦插成活的试管苗５０ｄ后生长加
速，后期长势非常旺盛，翌年正常开花结果，并且
试管苗具有活血丹所有的植物学性状。
３２
　　　　　黑　龙　江　农　业　科　学 １１期
３　结论与讨论
在以往的活血丹研究中［７］，把嫩茎作为材料
用于愈伤组织的诱导培养，培养基中添加浓度为
２．０～２．５ｍｇ·Ｌ－１的２，４－Ｄ得到了理想的效果，这
种结果与该研究基本一致。由此再一次证明，在
植物组织培养研究的愈伤组织诱导中，常用的
ＩＡＡ、ＮＡＡ、２，４－Ｄ和ＩＢＡ四种生长素中，２，４－Ｄ
对愈伤组织的诱导作用最强。但是，在愈伤组织
分化、不定芽生根及生根继代增殖培养研究中，该
研究所得到的理想培养基与前人的研究有所差
异，这是由于研究材料的差异引起的。前人的研
究所采用的是嫩茎，而该研究采用的是子叶，并且
其子叶是来自种子的。种子的形成过程会由于杂
交等形成新的基因型，这样就会引起与前人的研
究材料的基因型的差异，从而导致研究过程理想
培养基的差异。
在该研究中，采用试管苗增殖培养和扦插２
种方法进行快速繁殖。试管苗增殖培养２８ｄ为１
个培养周期的繁殖系数为２．７。这种方法１株试
管苗１ａ能繁殖约为４０万株试管苗。扣除多种
非正常因素的影响，１ａ繁殖２０万株试管苗完
全能得到保证。而后者的扦插方法，又将使繁殖
速度提高近１倍。因此，即使在繁殖过程中受到
多种不利因素的影响，用这２种方法进行快速繁
殖，一年之内都能繁殖出数万株试管苗，这完全能
满足栽培和资源保护对种苗的需求。
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｌｏｎｅ　ｆｏｒ　Ｇｉｅｃｈｏｍａ　ｌｏｎｇｉｔｕｂａ
ＺＨＡＮＧ　Ｙｕ，ＢＡＩ　Ｙａｎ－ｓｈｅｎ，ＳＵＮ　Ｊｉｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＮＩＮＧ　Ｓｈｕ－ｘｉａｎｇ，ＪＩＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｙａｎｇ
（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　１１６０２９）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｗｉｌｄ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｒｅａｌｉｚｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｔｏ　ｄｏ
ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｕｂｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｉｓｓｕｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｆｉｎａｌｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｃｌｏｎｅ　ｏｆ　Ｇｉｅｃｈｏｍａ　ｌｏｎｇｉｔｕｂａ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｅｄｉｕｍ
ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＫＴ　０．４ｍｇ·Ｌ－１　Ｌ＋２，４－Ｄ　１．８ｍｇ·Ｌ－１　ａｎｄ　１／２ＭＳ＋ＡｇＮＯ３
０．７ｍｇ·Ｌ－１＋ＺＴ　０．２ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｆｔｅｒ　ｄｅａｌｔ　ｗｉｔｈ　ＡＢＴ　２（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
２．０ｍｇ·Ｌ－１）ｆｏｒ　４８ｈ，ｔｈｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｎ６＋ＩＡＡ０．２ｍｇ·Ｌ－１．
Ｔｈｅ　ｉｄｅａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｗａｓ　Ｎ６＋ＡＢＴ　２　０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ　０．４ｍｇ·Ｌ－１．Ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎ－
ｔｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｕｂｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｗａｓ　９６．３％ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ　ｐｌａｎｔｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９８．２％．Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ　ｆｏｒ　ａｌ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｔｒａｉｔｓ　ｏｆ　Ｇｉｅｃｈｏｍａ　ｌｏｎｇｉｔｕｂａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｉｅｃｈｏｍａ　ｌｏｎｇｉｔｕｂａ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
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殏
殏殏
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