全 文 ：现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2012, Vol.28, No.7
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云南野生香薷油对子代小鼠学习记忆功能的影响

张丽娟 1，尚建华 2，殷建忠 3，吴少雄 3，王琦 3，赵云丽 4，张雪辉 3，徐芳 3，杨解顺 1
（1.昆明医学院，云南昆明 650500）（2.云南省药物研究所，云南昆明 650111）
（3.昆明医学院营养与食品研究所，云南昆明 650500）（4.中国科学院植物研究所，云南昆明 650204）
摘要：本研究旨在探讨云南野生香薷油对子代小鼠学习记忆功能的影响。将昆明种小鼠从受孕第 1 d 开始分为空白对照、阳性
对照、低、中、高剂量 5 个组，用云南野生香薷油灌胃至断乳，断乳♂小鼠按孕鼠剂量灌胃至出生 49 d 后做 Morris 水迷宫实验，之
后测定小鼠脑组织神经递质和肝、脑组织的脂肪酸。结果表明，与空白对照组比较，定位航行实验的第 5 d 各组均有统计学意义
（P<0.01）。空间探索实验的阳性对照组有统计学意义（P<0.05）。脑神经递质 TPro、NO、AchE：阳性、中、高剂量组均有统计学意
义（P<0.05）。肝脂肪酸结果中阳性和高剂量组的 ALA 有统计学意义（P<0.05）；脑组织脂肪酸结果：高剂量组的油酸和 ALA 有统计
学意义（P<0.05）。可见，富含-亚麻酸的香薷油具有部分改善子代小鼠学习记忆的功能，其作用可能与喂养此香薷油使脑组织的 TPro
升高，NO、AchE 降低；肝和脑组织的-亚麻酸升高有关。
关键词：香薷油；-亚麻酸；子代小鼠；学习记忆
文章篇号：1673-9078(2012)7-733-736
Effect of Yunnan wild Elsholtzia Oil on Learning and
Memory in Offspring Mice
ZHANG Li-juan1, SHANG Jian-hua2, YIN Jian-zhong3 ,WU Shao-xiong3,WANG Qi3, ZHAO Yun-li4, ZHANG
Xue-hui3,XU Fang3, YANG Jie-shun1
(1.Kunming Medical College, Kunming 650500, China) (2.Yunnan Insititute of Materia Medica, Kunming 650111,
China) (3.Research Institute of Nutrition and Food Science, Kunming Medical College, Kunming 650500, China)
(4.Kunming Institute of Botany, Chinses Academy of Sciences,Kunming, 650204, China)
Abstract: This study aimed to investigate the effect of Yunnan wild elsholtzia oil on learning and memory function of mouse offspring .
From the first day of pregnancy, Kunming mice were divided into five groups: blank control group, positive control group, low-dose,
medium-dose and high-dose groups and were intragastrically administrated with the elsholtzia oil gavage till being weaned. According to
intragastic administration dose for the pregnant rats, the weanedmale mouse was intragastically administrated till 49 days after birth and then
tested for the Morris water maze test. The fatty acid contents of the liver and brain organization were detected. Compared to the blank control
group, navigation test showed that each group were statistically significant (p<0.01) in the 5 th day. Space exploration experiment showed that
only the positive control group was statistically significant (p<0.05). By analysis of TPro, NO, AchE , it was found that he positive control group,
medium-dose and high-dose groups were statistically significant (P<0.05). The contents of the fatty acids in liver of the positive control group
and the high-dose group were statistically significant (p<0.05). Contents of oleic acid and ALA in high-dose group were statistically significant
(p<0.05) in brain tissue. ALA-riched eElsholtzia oil can partly enhance the learning and memory in mouse offspring mouse., due to the hihger
TPro and ALA contents but lower NO and AchE contents by feeding ALA-riched elsholtzia oil.
Key words: elsholtzia oil; -linolenic acid; offspring mice; learning and memory

学习记忆是人类大脑的重要功能之一，并且是十
分复杂的生物现象。学习记忆从人类出生就开始并伴
收稿日期：2012-04-06
基金项目：云南省教育厅基金项目（5Y0281C、08Y0239）
作者简介：张丽娟（1978-），女，硕士，研究方向：食品化学与营养学
通讯作者：殷建忠（1970-），男，教授，硕士生导师，研究方向：云南特有
食物资源研究与开发
随至终老，因此学习、积累和应用各种知识经验与学
习记忆能力是密不可分的。当代社会人们生活质量越
来越高，对记忆能力的要求也相应提高。学习记忆能
力的高低至关重要，它既关系着个人的发展又关系着
社会的进步；因此，人们对学习记忆的研究也从未间
断。
-亚麻酸（-Linolenic Acid，ALA）为人体必需
DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2012.07.003
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脂肪酸，是广泛存在于植物油中的不饱和脂肪酸。云
南野生香薷油富含 ALA，含量占不饱和脂肪的
56.28%[1]。关于 ALA 促进学习记忆能力报道较多[2~4]，
但对子代记忆功能的影响研究较少。本研究用云南野
生香薷油对小鼠进行两代喂养，通过对子代小鼠的水
迷宫实验评价香薷油对子代小鼠学习记忆功能的影
响，为香薷的开发和综合利用提供科学参考依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 样品
香薷油，云南野生香薷籽经筛选、清洗、破碎、
软化、扎胚、压榨、沉淀、过滤得到香薷油，4 ℃冰
箱保存。
1.1.2 动物
昆明种小鼠，♀160 只，♂80 只，昆明医学院实
验动物中心提供，许可证号：SCXK（滇）2005-0008；
等级：SPF 级。
1.1.3 主要试剂
吡拉西坦片（东北制药总厂，批号：200908113）；
考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、一氧化氮试剂盒、乙酰
胆碱酯酶测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；棕
榈酸甲酯化标准品、硬脂酸甲酯化标准品、油酸甲酯
化标准品、亚油酸甲酯化标准品、-亚麻酸甲酯化标
准品（美国 Sigma 公司）；无水碳酸钾分析纯（天津
市风船化学试剂有限公司）；正己烷分析纯（津市化学
试剂三厂）；甲醇分析纯（汕头市西陇化工厂有限公
司）；2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）、优级纯乙酰氯分
析纯（Aladdin Chemistry Co., Ltd）。
1.2 主要实验仪器及设备
Centrifuge 5810R 高速冷冻离心机、Morris 水迷
宫、CP-3800 气相色谱仪。
1.3 实验方法
1.3.1 子代小鼠分组及灌胃剂量
表1 实验小鼠分组及灌胃剂量
Table 1 The groups and intragastric dose of mouse
组别 配制 灌胃剂量/(mL/kg·bw) 相当人推荐剂量(倍)
空白对照组 纯水 11 -
低剂量组 香薷油 2.8 5
中剂量组 香薷油 5.6 10
高剂量组 香薷油 11 20
每天21:00~22:00将一代♀、♂鼠按2:1进行合笼，
于次晨 8:00♀、♂鼠分笼并检查♀鼠阴栓情况，有明
显阴栓者即认定为受孕第 1 d，按表 1 分组喂养。子代
21 d♂小鼠各组均按孕鼠剂量继续灌胃 4 周后做下列
实验。
1.3.2 Morris 水迷宫实验
Morris 水迷宫实验：正式实验前 1 d 让子代♂小
鼠在水中游泳 2 min，以适应环境。各组小鼠在 5 d 定
位航行实验后，第 6 d 将平台撤出做空间探索实验。
实验动物每天灌胃，灌胃 1 h 后进行 Morris 水迷
宫实验。每天实验时间 9:00~16:00，每组动物每天上、
下午各一半做本实验。
1.3.3 脑神经递质
将做完行为学实验的子代♂小鼠脱臼处死后，低
温取肝和脑组织称重；称脑组织 200 mg（各脑组织尽
量取同一部位），加生理盐水 1.8 mL，手动匀浆。匀
浆液 3000 r/min 4 ℃下低温离心 10 min 后，上清液待
测 TPro、NO、AchE（方法见试剂盒说明）。
1.3.4 肝脑脂肪酸
样品的甲酯化：各组子代♂小鼠脱臼处死后，低
温取肝和脑组织称重；肝、脑组织各称 200 mg（各组
尽量取同一部位），加 NS 1.8 mL，手动匀浆。匀浆液
3000 r/min，低温离心 10 min，取上清液 100 µL。上
清液中加入甲醇：氯乙酰（10:1）的混合溶液 2 mL，
20 mmol/L BHT 溶液 2 µL；沸水水浴 1 h。水浴后加
入 60 g/L 的碳酸钾溶液 5 mL 和正己烷 150 µL，充分
振荡混匀，3000 r/min，低温离心 10 min 后取上层用
于测定。
标准曲线的建立：CP-3800 气相色谱仪：FID 检
测器，hp-innowax 石英毛细管细谱柱（30 m×0.320
mm×0.50 µm），进样口温度 260 ℃，检测温度 280 ℃；
柱温采用程序升温，初始温度 170 ℃，保持 0.5 min，
以 5 ℃/min 的升温速率升到至 200 ℃，然后以 15 ℃
/min 的升温速率升至 240 ℃保持时间 3.83 min；载气：
N2，柱头压 60 kPa，氢气：32 mL/min；空气：320
mL/min；柱流 1.5 mL/min；分别将标准品配置不同浓
度做标准曲线，进样量 1 µL。
1.4 统计学处理
应用 SPSS 13.0 软件包进行数据的统计分析。数
据以均数±标准差（ x±S）表示，用方差分析 Morris
水迷宫及生化指标结果在各组间的差异，以 P＜0.05
为差异有统计学意义。
2 结果与讨论
2.1 Morris 水迷宫实验
子代♂小鼠香薷油喂养 49 d 后，定位航行实验结
果显示：与空白对照组比较，第 1 d 低剂量组有统计
学意义（P<0.01）；第 2 d 均无统计学意义；第 3 d 阳
性对照组、低、中剂量组有统计学意义（P<0.01），高
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剂量组有统计学意义（P<0.05）；第 4 d 阳性对照组有
统计学意义（P<0.01），中、高剂量组有统计学意义
P<0.05；第 5 d 各组均有统计学差异（P<0.01），见表
2。空间探索实验各组与空白对照组比较均无统计学意
义（P<0.05），见表 3。香薷油喂养 49 d 的子代小鼠，
定位航行实验差异明显，在同一天，各组小鼠的潜伏
期均低于空白对照组，尤其是第 5 d 有统计学意义
(P<0.01）；并且在第 5 d，中剂量组的潜伏期小于阳
性对照组。实验结果表明，从第一代♀鼠受孕开始喂
养香薷油，直至子代成年小鼠，香薷油能够改善子代
小鼠的学习和记忆的获取能力，此效果甚至不亚于阳
性对照药物。空间探索实验，用于测量小鼠学会寻找
平台后，对平台空间位置记忆的保持能力。本研究中，
各组潜伏期均高于空白对照组，但只有阳性对照组有
统计学意义。实验结果提示，香薷油对子代小鼠的空
间位置记忆的保持能力并没有改善作用。结果分析，
富含-亚麻酸的香薷油具有改善子代小鼠学习记忆的
功能，尤其是在学习记忆的获取方面。
表2 定位航行实验潜伏期结果 (s)
Table 2 The incubation period of navigation test of offspring of male mouse
组别 n 第 1 d 第 2 d 第 3 d 第 4 d 第 5 d
空白对照组 18 47.9±10.9 30.4±14.7 31.8±13.6 25.7±14.3 24.9±15.8
阳性对照组 20 43.2±13.8 26.8±11.1 18.6±11.7** 12.1±9.9** 11.4±7.9**
低剂量组 17 40.2±11.9* 29.2±15.5 16.9±8.5** 19.1±12.1 14.7±10.1**
中剂量组 18 41.0±11.0 24.0±11.1 19.2±12.5** 15.4±6.0** 10.4±6.0**
高剂量组 21 45.7±8.7 26.2±11.8 21.3±9.8* 18.0±7.9** 13.3±9.5**
注：重复测量方差分析：与同一时间点上的空白对照组比较，*P<0.05；**P≤0.01。
表3 子代♂小鼠空间探索实验结果
Table 3 The results of space exploration test of offspring of male
mouse
组别 n 时间/s
空白对照组 18 18.6±5.8
阳性对照组 20 23.0±6.5*
低剂量组 17 21.3±8.9
中剂量组 18 24.5±7.7
高剂量组 21 20.3±8.9
注：各组与空白对照组比较：*为 P<0.05。
2.2 脑神经递质测定
子代♂小鼠香薷油喂养 56 d 后，脑神经递质检测
结果：相对于空白对照组比较，TPro 阳性对照组、中、
高剂量组有统计学差异（P<0.01）；NO，阳性对照组、
低、中、高剂量组有统计学差异（P<0.01）；AchE，
阳性对照组、中、高剂量组有统计学差异（P<0.01），
低剂量组有统计学差异（P<0.05），见表 4。
表4 子代♂小鼠脑组织神经递质结果
Table 4 The neurotransmitter of offspring of male mouse
组别 n
TPro
/(g/L)
NO
/(μmol/g prot)
AchE 活力
/(U/mg prot)
空白对照组 10 1.93±0.23 6.71±0.80 2.39±0.40
阳性对照组 10 2.44±0.15** 2.42±0.63** 0.49±0.20**
低剂量组 9 2.25±0.35 5.28±0.92** 1.67±0.32*
中剂量组 10 2.43±0.25** 3.08±0.44** 0.53±0.13**
高剂量组 10 2.40±0.15** 3.33±0.50** 0.46±0.19**
注：与空白对照组比较：**为 P<0.01；*为 P<0.05。
学习记忆时蛋白质合成增加并有新的蛋白质或肽
产生，蛋白质水平影响子代脑发育和功能[5]。记忆的
获得依赖于蛋白合成[3]，因此，脑总蛋白的多少在一
定程度上反应记忆功能。本研究表明，相对于空白对
照组，阳性对照、中剂量和高剂量组总蛋白量增多，
结合行为学实验结果，提示香薷油对子代小鼠脑组织
蛋白的影响反表现为会随喂养的时间和剂量改变，既
有时效性也有量效性，小鼠脑总蛋白的含量与小鼠的
学习记忆能力呈正相关。
NO 与海马长时程增强的形成有关[6]，并且释放适
量的 NO 可促进学习能力[7]。本研究中阳性对照、低、
中、高剂量组的 NO 含量均低于空白对照组，结合行
为学实验结果可推测，低水平的 NO 对小鼠的空间学
习记忆能力有促进作用。
大脑皮层和海马乙酰胆碱(Ach)升高能改善学习
和记忆功能[8]。而 AchE 能降解 Ach，故 AchE 水平的
降低有利于学习记忆。AchE 活力阳性对照、中、高
剂量组有降低，结合行为学实验结果说明，香薷油的
长期喂养与 AchE 水平降低可能对记忆功能有促进作
用。
由此可推测富含ALA 的香薷油可通过胎盘对子
代小鼠的记忆功能产生影响，与小鼠脑组织的二十二
碳六烯酸（C22:6, Docosahexaenoic acid, DHA）主要是
在孕 7~21 d 累积的相关报道并不冲突[9]；脑组织的总
蛋白含量水平增高、NO 和 AchE 水平的降低有可能促
进小鼠的学习记忆能力。
2.3 肝脑脂肪酸测定
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子代♂小鼠香薷油喂养 56 d 后，与空白对照组比
较，肝组织中，高剂量组的棕榈酸有统计学意义
（P<0.01）；阳性对照组和高剂量组的 ALA 有统计学
差异（P<0.05），见表 5。
子代雄性小鼠香薷油喂养 56 d 后，与空白对照组
比较，脑组织中，高剂量组的油酸和 ALA 有统计学
意义（P<0.05），见表 6。
n-3 多不饱和脂肪酸和 n-6 多不饱和脂肪酸是人
体必需脂肪酸，在脑发育和脑功能正常发挥过程中起
重要的作用[10]。大量研究报导 n-3 系多不饱和脂肪酸
（Poly Unsaturated Fatty Acid, PUFA）中二十碳五烯酸
（C20:5, Eicosapentenoic acid, EPA）和 DHA 对记忆功
能的影响[11,12]。实验结果显示，小鼠从受孕至出生后
56d 一直喂养 ALA 含量高的香薷油，对小鼠肝和脑组
织的 ALA 水平的升高有影响。相关研究证实补充 n-3
PUFA 能明显提升脑中 DHA 水平[13]，但本研究显示
补充香薷油能提升脑组织 ALA 的水平，而 ALA 最终
主要转化成 EPA 和 DHA 来发挥作用。因此，香薷油
对小鼠记忆功能的影响还需对其做更进一步研究。
表5 子代♂小鼠肝组织脂肪酸检测结果
Table 5 The results of liver tissue fatty acid of offspring of male mouse
组别
棕榈酸
/(μg/mL)
亚油酸
/(μg/mL)
油酸
/(μg/mL)
α-亚麻酸
/(μg/mL)
硬脂酸
/(μg/mL) n-3/n-6
空白对照组 7.93±4.17 12.87±7.20 4.64±3.39 2.25±1.06 2.43±1.32 0.20±0.09
阳性对照组 10.20±5.30 16.45±6.39 8.83±5.54 4.29±2.74* 2.57±1.67 0.27±0.17
中剂量组 11.83±4.72 15.21±4.52 8.78±4.75 3.24±1.15 3.54±1.53 0.22±0.14
高剂量组 17.10±7.85** 17.89±6.40 7.69±2.77 4.33±1.03* 4.48±3.07 0.23±0.05
注：与空白组比较：*P<0.01,**P<0.05。
表6 子代♂小鼠脑组织脂肪酸检测结果
Table 6 The results of brain tissue fatty acid of offspring of male mouse
组别
棕榈酸
/(μg/mL)
亚油酸
/(μg/mL)
油酸
/(μg/mL)
α-亚麻酸
/(μg/mL)
硬脂酸
/(μg/mL) n-3/n-6
空白对照组 29.31±10.60 30.49±13.72 8.52±3.23 4.91±2.41 3.10±1.50 0.18±0.08
阳性对照组 28.89±11.73 25.78±10.96 10.91±5.06 8.62±3.00* 3.12±1.37 0.36±0.16*
中剂量组 24.17±12.27 30.90±15.19 12.91±8.74 6.03±2.40 3.88±1.52 0.22±0.11
高剂量组 33.67±10.85 39.00±12.53 22.9±15.62* 8.73±3.31* 3.99±3.00 0.23±0.09
注：与空白组比较：* P<0.01,**P<0.05。
3 结论
3.1 记忆是人类从事思维和语言等高级心理活动的
基础。关于记忆功能的改善一直以来受到研究人员的
广泛关注，但多集中的治疗方面，对预防方面研究较
少。本研究主要采用基于条件反射原理的学习记忆行
为学实验，采用保健食品评价程序推荐使用的方法，
评价香薷油改善学习记忆的作用[14]。
3.2 《中国居民膳食指南（2007）》推荐每人每天烹
调油用量不超过 25 g~30 g，据此，野生香薷油以每人
每日摄入 30 g，体重 60 kg 计，则成人的推荐摄入量
为 0.504 g/kg·bw·d。本研究设计的动物低、中、高剂
量组喂养剂量分别相当于人类推荐摄入量的 5、10、
20 倍（香薷油比重为 0.9 g/mL）。实验过程中采用的
阳性对照药物“吡拉西坦片”是一种适用于记忆减退
及轻、中度脑功能障碍和儿童智能发育迟缓的有
效治疗药物，用其作为阳性对照的目的是便于对
实验结果做出合理分析。
3.3 综合分析实验结果认为，香薷油具有部分改善子
代小鼠记忆功能的作用；可能与小鼠脑组织的 TPro
水平升高，NO 和 AchE 水平降低，肝和脑组织的 ALA
水平有升高有关，但具体作用机制及相关性有待于更
深入研究。
参考文献
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（下转第732页）

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2012, Vol.28, No.7
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乳酸菌、假单胞菌、热死环丝菌和交替单胞菌各 1 株。
16S rDNA 菌群分析腐败冰鲜鸭的菌落结构显示：腐
败冰鲜鸭中鉴定出假单胞菌属、气单胞菌属、乳酸菌
属、肠杆菌属、节杆菌属、紫色杆菌属，还有检测到
属于未知类群的克隆子。样品中假单胞菌占绝对优势，
达到 54%。气单胞菌、肠杆菌中的沙雷氏菌是仅次于
假单胞菌的第二个类群，都分别占 15%。乳酸菌、节
杆菌、紫色杆菌以及一株未鉴定的属都分别占了 4%。
4.2 传统分离培养鉴定出来的细菌菌属与应用16S
rDNA 菌群分析的鉴定结果都表明冰鲜鸭的腐败微生
物包括：假单胞菌、气单胞菌、乳酸菌、肠杆菌 、节
杆菌。二者不一致的地方有，传统方法初步鉴定出了
热死环丝菌和葡萄球菌，而在16S rDNA 菌群分析中
没有鉴别出来，以及16S rDNA 菌群分析法鉴定出了
紫色杆菌而传统方法没有。分析不一致结果的原因：
传统方法较为繁琐，如果想要得到较为准确的鉴定结
果，需要做的鉴定试验比较多，且存在人为操作误差，
因此只是得到了初步的鉴定结果。而16S rDNA 菌群
分析法也有它的局限性，可鉴定出菌群类型有限，并
且由于检测的费用控制，挑选测序的克隆子数量有限，
检测结果只能大概表示主要的优势菌群结构，不排除
有漏检的可能性。综合两者的试验结果才可得到一个
较为准确全面的判断。
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