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湿生扁蕾对小鼠抗炎镇痛作用研究



全 文 :6 Ikekawa T,Nakanishi M,Uehara N,et al. Antitumor action of some Ba-
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Studies in the protective effect of alcohol extracts from Phellinus lonicerinus (Bond.)Bond. et sing
on breast precancerous lesions in rats
Luo Youcheng1,Wang Junzhi1,Can Dan1,Zhu Shu2,Tu Xuan1,Wu Fangfang1,Luo Huajun1,Deng Zhangshuang1
(1 Hubei Key Laboratory of Natural Products Research and Development(China Three Gorges University)/Hubei Institute of Tujia
Medical Research,Yichang 443002;2 Toyama University and Chinese Medicine Pharmaceutical Science Research Institute,Toyama Japan)
Objective:To investigate the effects of alcohol extracts from phellinus lonicerinus (Bond.)Bond. et sing (AEP)on the breast precan-
cerous lesions in rats,and provide scientific basis for prevention and treatment of breast cancer. Methods:female SD rats were prepared as
the breast precancerous lesions model. After administered in lavage for 4 weeks,the rats'general situation were observated,the radioimmuno-
assay was used to detect the levels of serum estradiol (E2) ,progesterone (P) ,prolactin (PRL) ,luteinizing hormone (LH)and follicle-
stimulating hormone (FSH) ,HE staining,and estrogen receptor α (ERα) ,estrogen receptor beta (ERβ)and progesterone receptor (PR)
in breast tissue immunohistochemistry staining were used. Results:AEP 600mg /kg could improve the general situation of rats,decrease the
E2 level,elevate P and PRL content (p < 0. 05 or p < 0. 01) ,but influences on LH and FSH were not obvious;AEP (150 300 and 600mg /
kg)might reduce ovaries and uterus mass indexes,improve the pathological change of breast tissue (P < 0. 05 or P < 0. 01) ,reverse breast
tissue ERα,ERβ and PR abnormal expressions (P < 0. 05 or P < 0. 01) ,especially AEP 600mg /kg group. Conclusion:AEP can regulate
the sex hormone level it the breast precancerous lesions rats,avoid the breast tissue bad stimulation of hormonal abnormalities;Accordingly,
improve the pathological change of breast tissue,effectively prevent breast precancerous lesions occurrence and development.
Key words Phellinus lonicerinus (Bond.)Bond. et sing(忍冬木层孔菌) ;breast precancerous lesions;xex hormone;breast tissue;estro-
gen receptor
湿生扁蕾对小鼠抗炎镇痛作用研究
*
罗小文1,李佳川1,谭 睿2,顾 健1**
(1 西南民族大学民族医药研究院,成都 610041;2 西南交通大学生命科学与工程学院,成都 610031)
摘 要 目的:研究和比较湿生扁蕾水提取物和醇提取物对小鼠抗炎镇痛的作用。方法:小鼠分别灌胃 6. 6g生药 /kg﹑ 3. 3g
生药 /kg﹑ 2. 2g生药 /kg的湿生扁蕾和乙醇提取物,采用小鼠耳肿胀法、琼脂肉芽肿法及测定角叉菜胶致小鼠炎症渗出物中 PGE2
含量来观察比较抗炎作用;采用小鼠扭体法,福尔马林致痛法观察比较镇痛作用。结果:湿生扁蕾醇提 6. 6g生药 /kg﹑ 3. 3g生药 /
kg均能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀;醇提 6. 6g生药 /kg能明显抑制琼脂致小鼠肉芽肿,并可拮抗角叉菜胶致小鼠炎足炎性渗出物中
的 PGE2 含量增高;湿生扁蕾醇提 6. 6g生药 /kg﹑ 3. 3g生药 /kg剂量均能抑制冰醋酸引起的小鼠扭体反应,减少小鼠的扭体次数,
并延长扭体反应潜伏期;湿生扁蕾水提 6. 6g生药 /kg及醇提 6. 6g生药 /kg﹑ 3. 3g生药 /kg剂量均能一定程度抑制福尔马林引起的
小鼠疼痛,醇提取物抑制作用更强。结论:湿生扁蕾具有明显的抗炎镇痛作用,其主要活性成分存在于乙醇提取部位。
关键词 湿生扁蕾;水提物;醇提物;抗炎;镇痛;比较研究
湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物湿生扁蕾 Gentianopsis palu-
dosa (Mum.)Ma的干燥全草,产于西藏、青海、四川等地。具有
解毒、利湿消黄之功效,主治热病发斑、高血压、疮疥肿毒肝炎、
胆囊炎及多种炎症,藏医用全草治疗流行性感冒及胆病引起的
79中药药理与临床 2013;29(1)
* 项目资助: 2011 年度外国文教专家资助项目( 2011 - 03) ;西南民族大学 2012 年研究生创新型科研资助项目( CX2011SZ02) **通讯作者
发烧[1,2],且是青海重要的开发藏草药项目。目前,湿生扁蕾药
理作用研究较少,抗炎镇痛文献报道也较少,景明[3]等人研究
了以抗炎镇痛活性为指标评价湿生扁蕾的提取工艺,本实验以
其水提取物及乙醇提取物为对象,采用四种模型研究湿生扁蕾
的抗炎镇痛活性,可为进一步开发其药用价值提供一定的依
据。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 湿生扁蕾购于青海省海西州蒙藏医院,经西
南民族大学顾健教授鉴定为龙胆科扁蕾属植物湿生扁蕾 Gen-
tianopsis paludosa (Mum.)Ma 的干燥全草。取药材粉末适量,
加 8 倍量的 80%乙醇加热回流两次,每次 2h,滤过,合并滤液,
浓缩成 1g /ml生药浓度药液;另取药材粉末适量,加 8 倍量水,
加热回流两次,每次 2h,滤过,合并滤液,浓缩成 1g /ml 生药药
液。阿司匹林为山东新华制药股份有限公司,国药准字
H37020354。
1. 2 动物 KM小鼠,雌雄兼备,体重 18 ~ 22g,由四川省实验
动物专委会养殖场提供,动物合格证号:SCXK[川]2008-0014。
1. 3 试剂 福尔马林(成都市科龙化工试剂厂,批号:
20110401) ,冰醋酸(成都市科龙化工试剂厂,批号:20110923) ,
角叉菜胶(sigma公司) ,二甲苯(成都市科龙化工试剂厂,批号:
20100821)。
1. 4 方法
1. 4. 1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 KM 种雄性小鼠 80
只,按表 1 分组及给药,每日一次,连续 5d,末次给药后 30min,
在每只小鼠右耳前后两面分别涂抹二甲苯 10μl,30min 后将小
鼠脱颈椎处死,沿耳廓剪下两耳,在相同部位用直径为 9. 00mm
的打孔器,分别凿下相等面积的耳片,称重,以左右耳片重量差
值为肿胀度,并计算肿胀抑制率,抑制率 =(模型对照组肿胀度
-给药组肿胀度)/模型对照组肿胀度 × 100%。
1. 4. 2 对琼脂致小鼠肉芽肿的影响 KM 种雄性小鼠 80 只,
按表 2 设计分组及给药,所有小鼠均在背部皮下注射 2%琼脂
0. 3ml /只,并于第二天开始连续用药 7 天,第 8 天将小鼠脱颈椎
处死,剥离琼脂肉芽块,并称湿重,并计算肿胀抑制率,抑制率 =
(模型对照组琼脂肉芽重量 -给药组琼脂肉芽重量)/模型对照
组琼脂肉芽重量 × 100%。
1. 4. 3 对小鼠炎症渗出物中 PGE2 含量的影响
[4] KM 种雄
性小鼠 80 只,按表 3 设计分组及给药,连续 7d,末次给药后
30min,在小鼠的右后足皮下注射 1%角叉菜胶 0. 03ml,4h 后剪
下炎足称其质量,充分剪碎,于 2ml生理盐水中浸泡 1h后离心,
取上清液 0. 25ml,加入 0. 5mol /L 的氢氧化钾甲醇溶液 2ml,
50℃水浴 20min加 5ml甲醇稀释,于 278nm处测吸光度,以吸光
度(A)与足重(g)比值作为 PGE2 含量。
1. 4. 4 对小鼠扭体反应的影响 KM种小鼠 80 只,雌雄各半,
按表 4 设计分组及给药,每日一次,连续 7d,末次给药后 1h,每
组小鼠腹腔注射 0. 8%冰醋酸 0. 2ml /只,并立即计时,记录小鼠
出现扭体反应的潜伏期时间,并计数各小鼠在 15min 内的扭体
次数,并计算药物对小鼠扭体反应的抑制率,抑制率 =(模型对
照组扭体次数 - 给药组扭体次数)/模型对照组扭体次数 ×
100%。
1. 4. 5 对福尔马林致小鼠疼痛的影响[5] KM 种小鼠 80 只,
雌雄各半,按表 5 设计分组及计量给药,每日一次,连续 5d。末
次给药后 1h,每只小鼠右后足跖皮下注射 2%的福尔马林 20μl
后,立即置于直径为 20cm玻璃缸内,在注射后 0 ~ 5min 内记录
累积舔右后足时间,并进行评分,评分标准:舔、咬或抖足 3 分,
提足 2 分,跛行、不动时足撑地 1 分,走动自如 0 分,并进行组
间比较。
2 结果
2. 1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 醇提高、中剂量组的耳
肿胀度均明显低于正常组的耳肿胀度,结果见表 1。
表 1 湿生扁蕾提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(珋x ± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g生药 /kg)
肿胀度
(mg)
抑制率
(%)
正常对照 10 10. 26 ± 2. 13
阿司匹林 10 0. 1 7. 06 ± 1. 23 31. 2
湿生扁蕾水提物 10 6. 6 9. 46 ± 2. 92 7. 8
湿生扁蕾水提物 10 3. 3 9. 59 ± 3. 02 6. 5
湿生扁蕾水提物 10 2. 2 8. 93 ± 1. 34* 13. 0
湿生扁蕾醇提物 10 6. 6 8. 76 ± 1. 27** 14. 6
湿生扁蕾醇提物 10 3. 3 8. 91 ± 1. 45* 13. 2
湿生扁蕾醇提物 10 2. 2 9. 40 ± 0. 82 8. 4
与正常组比较 * P﹤ 0. 05,** P﹤ 0. 01(下同)
2. 2 对琼脂致小鼠肉芽肿的影响 醇提高剂量组的琼脂肉芽
重低于正常组的耳肿胀度,结果见表 2。
表 2 湿生扁蕾提取物对琼脂所致小鼠肉芽肿的影响(珋x ± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g生药 /kg)
琼脂肉芽重
(g)
抑制率
(%)
正常对照 10 0. 344 ± 0. 038
阿司匹林 10 0. 1 0. 228 ± 0. 026 33. 7
湿生扁蕾水提物 10 6. 6 0. 317 ± 0. 040 7. 8
湿生扁蕾水提物 10 3. 3 0. 320 ± 0. 028 7. 0
湿生扁蕾水提物 10 2. 2 0. 301 ± 0. 031 12. 5
湿生扁蕾醇提物 10 6. 6 0. 295 ± 0. 026* 14. 2
湿生扁蕾醇提物 10 3. 3 0. 303 ± 0. 019 11. 9
湿生扁蕾醇提物 10 2. 2 0. 304 ± 0. 038 11. 6
2. 3 对小鼠炎症渗出物中 PGE2 含量的影响 醇提高、中剂
量组小鼠足炎性渗出物中 PGE2 含量与正常组比较具有显著降
低,结果见表 3。
表 3 湿生扁蕾提取物对小鼠炎症渗出物中 PGE2 含量的影响(珋x
± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g生药 /kg)
PGE2
(A /g)
正常对照 10 0. 95 ± 0. 20
阿司匹林 10 0. 1 0. 56 ± 0. 16
湿生扁蕾水提物 10 6. 6 0. 82 ± 0. 14
湿生扁蕾水提物 10 3. 3 0. 89 ± 0. 17
湿生扁蕾水提物 10 2. 2 0. 90 ± 0. 23
湿生扁蕾醇提物 10 6. 6 0. 74 ± 0. 16**
湿生扁蕾醇提物 10 3. 3 0. 77 ± 0. 11**
湿生扁蕾醇提物 10 2. 2 0. 80 ± 0. 10
2. 4 对小鼠扭体反应的影响 醇提高、中剂量组扭体反应潜
伏期与正常组比较均有一定的延长,且扭体次数有明显减少,结
果见表 4。
89 中药药理与临床 2013;29(1)
表 4 湿生扁蕾提取物对小鼠扭体反应的影响(珋x ± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g生药 /kg)
扭体反应潜伏期
(min)
扭体次数
抑制率
(%)
正常对照 10 4. 58 ± 0. 97 29. 30 ± 7. 12
阿司匹林 10 0. 1 7. 49 ± 2. 21 11. 10 ± 7. 82 62. 1
湿生扁蕾水提物 10 6. 6 5. 40 ± 1. 71 22. 40 ± 6. 19* 23. 5
湿生扁蕾水提物 10 3. 3 5. 31 ± 2. 01 23. 56 ± 5. 28* 19. 6
湿生扁蕾水提物 10 2. 2 5. 27 ± 2. 48 24. 30 ± 10. 07 17. 1
湿生扁蕾醇提物 10 6. 6 5. 56 ± 1. 32* 21. 10 ± 4. 56** 28. 0
湿生扁蕾醇提物 10 3. 3 5. 43 ± 2. 02* 23. 43 ± 3. 25* 20. 0
湿生扁蕾醇提物 10 2. 2 4. 32 ± 0. 96 23. 70 ± 8. 85 19. 1
2. 5 对福尔马林致小鼠疼痛的影响 水提高剂量组、醇提
高、中剂量组小鼠舔足时间与正常组比较具有明显减低,结果
见表 5。
表 5 湿生扁蕾提取物对福尔马林致小鼠疼痛的影响(珋x ± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g生药 /kg)
累计舔足时间
(s)
累计评分
正常对照 10 62. 29 ± 12. 01 2. 86 ± 0. 38
阿司匹林 10 0. 1 25. 00 ± 9. 23 1. 60 ± 0. 75
湿生扁蕾水提物 10 6. 6 32. 43 ± 9. 81* 2. 10 ± 0. 69
湿生扁蕾水提物 10 3. 3 40. 58 ± 10. 22 2. 41 ± 0. 52
湿生扁蕾水提物 10 2. 2 51. 86 ± 26. 18 2. 40 ± 0. 53
湿生扁蕾醇提物 10 6. 6 30. 86 ± 9. 21** 1. 80 ± 0. 90*
湿生扁蕾醇提物 10 3. 3 31. 20 ± 6. 39** 1. 94 ± 0. 45*
湿生扁蕾醇提物 10 2. 2 38. 86 ± 6. 74 2. 00 ± 0. 82
3 讨论
本实验采用两种炎症模型,两种疼痛模型,较全面分析比
较研究了湿生扁蕾水提取物与醇提取物的抗炎镇痛作用。二
甲苯致小鼠耳肿胀模型均是急性炎症模型,琼脂肉芽肿模型是
亚急性(慢性)炎症模型,实验结果表明湿生扁蕾对小鼠急性,
慢性炎症均有抑制作用,醇提取物作用比水提取物作用更较为
明显;本实验镇痛模型采用的是醋酸致扭体模型及福尔马林致
痛模型,小鼠扭体反应是通过化学物质刺激导致小鼠腹膜发生
炎症产生疼痛而表现歪扭反应,醋酸扭体法比较适合外周镇痛
作用机制药物的筛选,本实验结果表明湿生扁蕾对小鼠扭体反
应具有抑制作用,水提取物及醇高剂量作用均较强,说明湿生
扁蕾对腹腔注射化学刺激物质引发的小鼠痛疼具有镇痛作用。
PGE2 是一类活性较强的炎症介质,并在炎症组织中与其他
炎症介质起协调作用,可加剧炎症反应。本实验研究表明湿生
扁蕾醇提取物能显著拮抗角叉菜胶致小鼠炎症炎性组织中
PGE2 含量的增高,提示其抗炎机制可能与抑制 PGE2 合成或释
放有关;而福尔马林致痛模型是目前国际公认的一种较好的研
究药物镇痛作用的模型,其疼痛反应分为 2 个时相,分别代表
不同类型的疼痛,第 I 时相为直接刺激疼痛神经末梢所致痛
疼,第Ⅱ时相为炎症介质产生及释放所引起痛疼,本实验观察
了第 I时相痛疼反应,实验结果表明湿生扁蕾对直接刺激疼痛
神经末梢引起的痛疼也具有镇痛作用,醇提取物比水提取物抑
制作用更强。本实验研究表明藏药湿生扁蕾具有良好的抗炎
镇痛作用,以乙醇提取部位最好,其具体发挥药效的物质成分
及其机制有待进一步深入研究。
参考文献
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拟黑多刺蚁乙醇提取物石油醚部位抗痛风作用及物质基础研究
*
韦桂宁1,苏启表2,曾宪彪1,牙启康1,何 飞1,吕纪华1,苏 华1,卢文杰1,何开家1,韦宝伟1
(1广西中医药研究院,南宁 530022;2广东药学院健康学院,广州 510006)
摘 要 目的:研究拟黑多刺蚁乙醇提物石油醚部位( 简称石油醚部位 ) 抗痛风作用及其物质基础研究。方法:给小鼠腹
腔注射次黄嘌呤复制高尿酸血症模型,观察石油醚部位对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响;给大鼠足跖注射微晶型尿酸钠结晶,复
制痛风性炎症模型,观察石油醚部位对痛风性炎症的影响,二甲苯耳廓肿胀法观察石油醚部位的抗炎作用;热板法、扭体法观察石
油醚部位的镇痛作用; GC-MS分析石油醚部位的主要化学成分。结果:与模型对照组相比,石油醚部位在高剂量和中剂量时( 8g 药
材 /kg、4g药材 /kg) 可以显著降低高尿酸血症小鼠的血液尿酸水平; 在高剂量时可显著抑制微晶型尿酸钠引起大鼠足跖肿胀,可显
著抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀; 在高剂量时可提高小鼠热板痛阈值及减少由醋酸引起的扭体反应次数;石油醚部位的主要
成分为十八碳烯酸等不饱和脂肪酸。结论:拟黑多刺蚁乙醇提取物石油醚部位能降低高尿酸血症小鼠尿酸水平,具抗痛风性炎症、
镇痛作用,其主要成分为不饱和脂肪酸。
关键词 拟黑多刺蚁;痛风;尿酸;痛风性炎症;镇痛
99中药药理与临床 2013;29(1)
* 基金项目:广西科学基金( 2011GXNSFA018258) ; 广西卫生厅重点项目( 重 2011049)