全 文 ：收稿日期:2007-11-01;　修订日期:2008-02-28
基金项目:河北省科学技术与社会发展指导计划课题(No.052761690)
作者简介:晁怀宇(1964-),男(汉族),河北张北人 ,现任廊坊市人民医院
胸外科副主任医师 ,学士学位 ,主要从事胸外科的临床与科研工作.
夏至草醇提物干预实验性弥散性血管内凝血
大鼠肺损伤的实验研究
晁怀宇 1 , 张玉平2 , 刘正泉 2 , 雷　慧 3 , 杜舒婷2 , 姜　华 2
(1.河北省廊坊市人民医院　065000;
2.河北北方学院微循环研究所 ,河北 张家口　075029;　3.张家口教育学院 ,河北 张家口 075000)
摘要:目的 观察夏至草醇提物对高分子右旋糖酐(Dextran500)致弥散性血管内凝血(DIC)大鼠肺损伤的干预作用。方
法 Wistar雄性大鼠 20只 , 随机分为夏至草组(n=8)、模型组(n=6)和对照组(n=6)。静脉推注 10%Dextran500(10
ml/kg·体重)复制 DIC模型(对照组以等量生理盐水代替)。 6 min后 ,夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物(5 g/
ml, 6 g/kg·体重), 其它两组以等量生理盐水代替。 40 min后 , 制备肺组织匀浆 , 观察肺匀浆自由基指标 MDA含量及
SOD活性 、NO含量及 NOS活性的变化。结果 与对照组相比 , 模型组肺组织匀浆 MDA、NO含量及 NOS活性显著升高 ,
SOD活性降低;夏至草组肺组织匀浆 MDA、NO含量及 NOS活性显著低于模型组 , SOD活性升高 ,各指标与对照组比较无
统计学意义。结论 夏至草醇提物减轻 Dextran500致 DIC大鼠肺损伤的机制与降低自由基损伤 、降低 NO的生成与释放
有关。
关键词:夏至草;　弥散性血管内凝血;　肺损伤;　自由基;　一氧化氮
中图分类号:R364.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1652-02
ExperimentalResearchofEthanolExtractfromMrrubiumincisumagainsttheLungInju-
ryinExperimentalDICRats
CHAOHuai-yu1 , ZHANGYu-ping2 , LIUZheng-quan2 , LEIHui3 , DUShu-ting2 , JIANGHua2
(1.PeoplesHospitalofLangfang, Langfang, Hebei065000, China;2.InstituteofMicrocirculation, Hebei
NorthUniversity, Zhangjiakou, Hebei075029 , China;3.ZhangjiakouEducationalColege, Zhangjiakou, He-bei075000, China)
Abstract:ObjectiveToobservetheeffectsofethanolextractfromMrrubiumincisumagainstlunginjuryofdisseminatedintra-
vascuclarcoagulation(DIC)ratsinducedbyDextran500.Methods 20 maleWistarratswererandomlydividedintothree
groups:Mrrubiumincisumgroup(n=8), modelgroup(n=6)andcontrolgroup(n=6).TheDICmodelwasestablishedby
intravenousinjectionofDextran500 (10 ml/kg· bw), andDextran500 wasreplacedbyequivalentnormalsalineincontrol
group.6minuteslater, ethanolextractfromMrrubiumincisumwasinfused(5g/ml, 6g/kg· bw);inothergroupsethanolextract
fromMrrubiumincisumwasreplacedbynormalsaline.After40 min, thelungwastakenout, the10% tissuehomogenatewas
prepared, andthefreeradicalindexesofMDAcontentandSODactivity, NOcontentandNOSactivityweredetermined.Results
ThecontentsofMDAandNOandNOSactivityoflunghomogenateinmodelgroupweresignificantlyincreased, andSODactivity
weresignificantlylowerthanthatincontrolgroup.ThecontentsofMDAandNOandNOSactivityoflunghomogenateinMrrubi-
umincisumgroupweresignificantlylowered, andSODactivityweresignificantlyincreasedascomparedwithmodelgroup.There
wasnostatisticaldiferencebetweenMrrubiumincisumgroupandcontrolgroup.ConclusionEthanolextractfromMrubiuminci-
sumcanmarkedlyabatelunginjuryofDICratsbyDextran500anditsmechanismmayberelatedtoscavengingfreeradicaland
decreasingNOrelease.
Keywords:Mrrubiumincisum;　Disseminatedintravascuclarcoagulation(DIC);　Dextran500;　Lunginjury;　Freeradi-
cal;　Nitricoxide
　　弥散性血管内凝血(disseminatedintravascuclarcoagulation,
DIC)是临床常见的危重病理过程 , 在此病理过程中所形成的微
血栓 、以及出血后引起的低血容量 、微循环障碍等因素 ,是导致危
重患者出现肺损伤甚至多个器官功能障碍的主要因素之一。因
此 , 寻求合理的治疗措施防止 DIC引起的肺损伤成为临床研究
的重点内容。研究表明 , 高分子右旋糖酐(Dextran500)在导致大
鼠 DIC及血液流变性异常的同时 , 可引起大鼠肝 、肾 、肺等多个
器官组织形态学损伤 ,组织学观察可见红细胞淤滞 、微血栓及细
胞坏死等 [ 1];夏至草可明显改善血淤大鼠的血液和淋巴微循环
障碍 [ 2, 3] , 从而维持机体自稳态。为了进一步阐明夏至草醇提物
干预 DIC大鼠重要器官肺损伤的机制 , 本研究观察夏至草醇提
物对 Dextran500致大鼠 DIC肺组织自由基及一氧化氮(NO)的
影响 , 为临床 DIC致肺损伤的防治提供实验依据。
1　器材与方法
1.1　动物与分组 Wistar大鼠 20只 , 体重 240 ～ 300 g(中国医科
院实验动物繁育中心提供), 随机分为夏至草组(n=8)、模型组
(n=6)和对照组(n=6)。前两组复制 DIC模型。
1.2　药品与仪器 唇形科夏至草属植物夏至草 mrrubiumincisum
Benth的全草(内蒙驻张家口医药站提供 , 经河北北方学院中医
系姜希强教授鉴定),按文献 [ 4]报道方法 , 制备夏至草醇提物 , 经
水煎醇沉 ,再经活性炭脱色 、灭菌制成原生药含量为 5g/ml的注
射液(pH、澄清度 、溶血试验检测均为合格);戊巴比妥钠(北京化
学试剂厂生产 ,批号 20000919);肝素钠(北京奥博星生物技术责
任有限公司生产 , 批号 001218);高分子右旋糖酐(Dextran500,
瑞典 PharmaciaBiotech)。 WZF-50F2双道微量注射泵(浙江大
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7　
学医学仪器有限公司);FJ-200型高速分散均质机(上海标本模
具厂)。
1.3　DIC模型的复制及标本制备 所有大鼠均以 2%戊巴比妥钠
溶液(50mg/kg·体重)肌注麻醉后 , 行颈部正中手术切口 , 剥离
左颈静脉和右颈总动脉 , 插管 , 备注射 、输液及放血用。稳定 15
min后 ,夏至草组及模型组大鼠 ,以 10%的 Dextran500(10 ml/kg
·体重)经左颈静脉缓慢匀速推注 , 1min注完 , 复制急性微循环
模型 [ 5, 6] 。 6 min后 , 夏至草组经微量注射泵由颈静脉缓慢推注
夏至草醇提物(6 g/kg· 体重 , 以等量生理盐水稀释);模型组输
入与夏至草醇提物等量的生理盐水;输液时间为 5 min。对照组
以等量生理盐水代替 Dextran500和夏至草醇提物。 经夏至草醇
提物治疗或相当于治疗 40min后 ,分别处死动物。选择固定肺组
织 0.8 ～ 1.0g, 加 9倍的 4℃无菌生理盐水 ,应用高速分散均质机
低温制备 10%组织匀浆 , 应用高速低温离心机以 2 500 r/min离
心 10min,取上清液置于冰箱内 -80℃冷冻备测。
1.4　指标检测 应用改良硫代巴比妥酸(TBA)微量法测定肺组
织匀浆丙二醛(MDA)水平 、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化
酶(SOD)活性 , 应用硝酸还原酶法 、化学显色法分别检测各组动
物肺匀浆 NO2— /NO3—含量及 NOS活性 , 严格按照试剂盒说明书
要求进行操作(试剂盒购自南京建成生物工程研究所);匀浆蛋
白以考马斯亮蓝法进行定量。
1.5　统计学处理 所有数据以 x±s表示 ,经 SPSS11.0统计软件
包进行单因素方差分析。两组间比较用两样本均数 t检验 , P<
0.05为具有显著性差异。
2　结果
2.1　夏至草醇提物对 DIC大鼠肺组织自由基损伤的影响 给予
Dextran500后 ,模型组肺匀浆 MDA含量均显著高于夏至草组和
对照组(P<0.01), 而夏至草组与对照组比较无统计学意义(P>
0.05);模型组肺匀浆 SOD活性均显著低于对照组及夏至草组(P
<0.01 ～ 0.05)。见表 1。
表 1　夏至草醇提物对 DIC大鼠肺匀浆
MDA含量及 SOD活性的影响( x±s)
组别 n MDA/μmol·g-1 SOD/U· mg-1
对照 6 1.45±0.27 13.71±2.93
模型 6 2.35±0.60＊ 9.57±0.68＊
夏至草醇提物 8 1.10±0.31△△ 12.71±2.72△
　　与对照组比较 , ＊P<0.01;与模型组比较, △P<0.05, △△P<0.01
2.2　夏至草醇提物对 DIC大鼠肺匀浆 NO及其合酶的影响 给
予 Dextran500后 ,模型组肺匀浆 NO2 -/NO3 -及 NOS活性均显著
高于夏至草组和对照组(P<0.01), 夏至草组肺匀浆 NO2 -/
NO3 -含量及 NOS活性与对照组比较均无统计学意义(P>
0.05)。见表 2。
表 2　夏至草醇提物对 DIC大鼠肺匀浆 NO及其合酶的影响( x±s)
组别 n NO2 -/NO3 -/μmol· g-1 NOS/U·g-1
对照 6 1.50±0.20 0.61±0.11
模型 6 2.30±0.40＊ 1.05±0.25＊
夏至草醇提物 8 1.58±0.38△ 0.66±0.28△
　　与对照组比较 , ＊P<0.01;与模型组比较, △P<0.01
3　讨论
高分子右旋糖酐所导致的微循环障碍以及凝血功能紊乱 ,是
引起心 、肺 、肾 、肝等多个器官功能障碍 、诱发多器官功能障碍综
合征(multipleorgandysfunctionsyndrome, MODS)甚至衰竭的主
要因素之一 [ 1] 。临床上由于血液凝固性增强引起微血栓形成 、
进一步诱发肺内栓塞是导致肺损伤的主要原因 ,也是危重患者的
致命因素之一。鉴于夏至草具有利水消肿 、活血化淤作用 [ 7] ,微
循环障碍导致的缺血 、缺氧是组织细胞损伤的重要因素 , 应用夏
至草醇提物可明显改善大鼠的淋巴微循环障碍 [ 8] , 为此 , 本研究
从自由基损伤及一氧化氮等方面观察夏至草醇提物对 DIC大鼠
肺损伤的干预作用 ,在阐明夏至草药理学作用的同时 , 为临床防
治 DIC以及引起的肺损伤提供实验依据。
研究结果表明 ,给予 Dextran500后 , 模型组肺匀浆自由基的
代谢产物 MDA含量显著升高 ,具有清除自由基功能的 SOD活性
降低 , 结果提示 Dextran500在引起大鼠 DIC的同时 , 加重了肺组
织细胞的缺氧以及酸性产物潴留 , 加之炎症反应增强 , 加速了自
由基的生成 ,这是引起自由基产生和释放的重要原因 [ 9] 。过多
的氧自由基进一步激活补体系统 ,补体活化产物刺激巨噬细胞和
中性粒细胞释放细胞因子和氧自由基 ,后者进一步通过膜脂质过
氧化作用攻击内皮细胞而加重损伤 ,形成自由基致细胞损伤的恶
性循环 , 也证明自由基损伤在细胞损伤乃至器官功能障碍的发病
学中具有重要作用 [ 10] 。输入夏至草醇提物后 , 肺匀浆 MDA的含
量显著低于模型组 , SOD活性升高 , 结果提示输入夏至草醇提物
有效地减轻了抑制肺组织细胞自由基的生成。 NO在参与调节
血管和气管平滑肌舒张 、机体免疫防御 、细胞溶解等诸多方面发
挥重要作用 [ 11] ,降低 NO的生成释放可改善内毒素休克的低血
压 [ 12] 。研究结果也表明 , 给予 Dextran500后 , 模型组肺匀浆的
NOS活性及 NO含量增高 ,其机制可能为Dextran500在引起大鼠
急性微循环障碍的同时 ,加重了细胞缺氧 , 刺激 iNOS活性表达增
强 , NOS活性增高 , 诱导内皮细胞 、巨噬细胞 、中性粒细胞形成大
量的NO, 从而引起NO的释放增多;大量的 NO发挥其损伤作用 ,
加重炎症反应 , 通过刺激中性粒细胞产生呼吸爆发及脱颗粒 , 释
放氧自由基和蛋白水解酶 , 作用于内皮细胞 ,进一步导致肺组织
细胞损伤。输入夏至草醇提物后 ,肺匀浆 NO含量及 NOS活性均
显著低于模型组 ,结果提示输入夏至草有效地抑制了 NOS活性
表达 , 从而减少 NO的产生和释放 。
综上所述 ,夏至草醇提物对 Dextran500致 DIC大鼠肺损伤具
有较好的干预作用 ,其机制与夏至草醇提物具有良好的改善微循
环流态 [ 3] 、改善细胞缺氧状态, 从而减轻组织细胞的自由基损伤有
关;同时 ,也抑制 NO产生 ,减轻了 NO所引起的炎症反应 ,降低 NO
对组织细胞的损伤 ,最终达到了保护细胞完整性的作用。研究结
果为深入研究夏至草醇提物的药理学作用以及为临床 DIC诱发肺
损伤的防治提供了实验依据, 具有较高的临床应用前景。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期