全 文 ：藏药湿生扁蕾有效成份的研究
米　琴1 ,曹长年2 ,赵宙兴2 ,屠兰英2
(1.青海师范大学生物系 ,青海 西宁　810008;2.青海大学化工学院 应用化学系 ,青海西宁　810016)
摘　要:从藏药湿生扁蕾中首次提取分离出三种化合物单体 ,两种为 酮 ,一种为齐墩果酸.并进行了HO-8910细胞的细胞
毒作用实验.
关键词:湿生扁蕾; 酮;齐墩果酸;细胞毒
中图分类号:TQ460.72　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1001-7542(2005)02-0064-03
　　湿生扁蕾系龙胆科植物[ Gentianopsis paludosa (Munro)Ma] ,是青藏高原地区已用于临床的药用植
物.分布于青海省海北 ,黄南 ,玉树 ,四川北部及西藏等地区 ,具有消热 ,解毒 ,利湿消黄之功效.主治肝
炎 ,胆囊炎 ,热病发斑 ,泄泻 ,肠胃炎 ,疮疥肿毒等症.已被列入青海重要的开发藏草药项目[ 1] .
1　材料和方法
1.1　仪器和材料　X-4型微量毛细管熔点仪(温度计未经校正),APEX Ⅱ型傅立叶变换离子回旋共振
质谱仪 ,AM400L核磁共振仪(瑞士布鲁克公司),M-1730型傅立叶红外光谱仪(美国 PE 公司),UV-
254nm紫外分析仪(上海科艺光学仪器厂),UV-2510PC 紫外-可见光谱仪 ,玻璃层析柱 ,旋转蒸发仪 ,
层析硅胶(青岛海洋化工厂 150-200目)硅胶G(薄层层析用),层析聚酰胺(30目).湿生扁蕾全草采自
青海大通县红土乡 ,经青海师范大学生物系植物学李建民教授鉴定为 Gentianopsis paludosa(Munro)Ma.
1.2　提取　秤取 900g 湿生扁蕾细粉用索氏提取器分 10批提取;分别用乙醚 ,甲醇 ,水作提取剂 ,将甲
醇提取物在硅胶层析柱中进行分离 ,选用氯仿:丙酮:甲醇(90:5:5-80:5:15)为展开剂洗脱 ,分段收集 ,
收集液用硅胶 TLC 检查 , 分离出三种物质 , 用甲醇进行重结晶得到 Ⅰ(112mg), Ⅱ(546mg), Ⅲ
(1320mg).
1.3　结构鉴定　测定结果见表 1.
表 1　化合物Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ的产率 、熔点 、质谱 、紫外数据
Compounds
Molecule
Yield
(%)
m.p
(℃) Ms UV(λmax)
Ⅰ C16H14O6 12.4＊10-3 153-155 303.1(M++1 ,100), 288.1(10) 375.4 , 312.5 , 258.2 , 239.4
Ⅱ C15H12O6 60.6＊10-3 189-191 289.1(M++1 , 100), 137.1(8) 377.5 , 310.2 , 260.1 , 237.4
Ⅲ C30H48O3 146.7＊10-3 303-307 201.3 , 195.6
1.4　细胞毒性测定　取对数期的卵巢癌HO-8910细胞 ,按 2×105/mL 浓度加入 96孔培养板内 ,每孔
200uL 24h弃取原有细胞培养液 ,分别加入不同浓度的三种化合物溶液 ,每一浓度设两个平行孔 ,置于培
养箱中再培养 48h ,用MTT法分别测定三种化合物对 HO-8910细胞的细胞毒作用 ,并按下列公式计算
HO-8910细胞的杀伤率 ,取平均值.[ HO-8910细胞杀伤率=(对照孔 A值-实验孔 A值)/对照孔 A
值×100%] .
基金项目:2001年教育部科学研究重点项目.
收稿日期:2004-12-10
作者简介:米琴(1962-),女(回族),青海人 ,青海师范大学副教授.
2005年
第 2期 　　　 　　　　　
青海师范大学学报(自然科学版)
Journal of Qinghai Normal University(Natural Science)　　 　　　　　　
2005
No.2
DOI :10.16229/j.cnki.issn1001-7542.2005.02.023
表 2　化合物Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ的红外 、13C核磁谱数据
Comp-
ound
IR(CM-1KBr)
螯合 二芳环共 芳环 O-CH3 芳醚
-OH 轭>C=0 C=C (-CH3) C-O-C COOH
13CNMR(400Hz , CDCl3)
δ
Ⅰ 3380 1660 1605 2835 1200 55.74(C8-OCH3),57.16(C7-OCH3),61.76(C3-OCH3), 92.03(C4),96.83(
1585 1012 C2),104.03(C10),112.74(C5), 115.75(C13),120.46(C6),148.81(C8),
1495 149.26(C7), 151.01(C12),157.13(C11),163.85(C1),166.40(C3),181.
17(C=0)
Ⅱ 3350 1660 1610 2850 1210 55.77(C3-OCH3),62.77(C8-OCH3),92.05(C2),96.97(C4),104.04
1510 1160 (C10),113.64(C5), 114.69(C13),122.49(C6), 144.30(C8),145.52(C7)
1485 1065 ,150.67(C12),157.22(C11), 163.60(C1),166.49(C3),180.56(C=0)
Ⅲ 3450 (2950) 1700 15.31 ,15.53 ,17.14 ,18.29 ,22.91 ,23.39 ,23.57 ,25.92 ,27.17 ,27.68 ,2
6.09 ,29.70 ,30.67 ,32.44 ,32.61 ,33.06 ,33.79 ,37.09 ,38.39 ,38.75 ,39
.27 , 40.97 , 41.59 ,45.87 ,46.52 ,47.63 ,55.21 ,79.04 ,122.63 ,143.59
表 3　化合物Ⅰ , Ⅱ的红外 、1H 核磁谱数据
Compound
1HNMR(400Hz)
δ
Ⅰ 13.31(s ,1H ,1-OH),7.35(d ,1H , 2-H),7.27(s ,1H , 4-H), 7.13(d , 1H ,6-H), 6.31(d , 1H ,5-H),4.00(s ,3H ,8-OCH3),
3.99(s, 3H ,7-OCH3),3.88(s ,3H ,3-OCH3)
Ⅱ 13.14(s ,2H ,1 ,7-OH), 7.35(d ,1H ,2-H),7.13(d ,1H ,6-H),6.31(d ,1H , 5-H),5.99(s ,1H , 4-H),4.02(s ,3H ,8-OCH3),
3.87(s, 3H ,3-OCH3)
表 4　　 Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ对 HO-8910细胞的细胞毒作用
compound
HO-8910细胞的细胞毒作用(MTT 法测定)48小时
浓度 200ug/mL 100ug/mL 50ug/mL 25ug/ mL 12.5ug/mL 6.25ug/ mL
Ⅰ 存活率 0.568409 0.573594 0.589949 0.733574 0.815318 0.824093
致死率 0.431591 0.426404 0.410051 0.266453 0.184682 0.175907
Ⅱ 存活率 0.562588 0.547351 0.523910 0.759494 0.844273 0.871621
致死率 0.437412 0.452649 0.476090 0.240506 0.155727 0.128397
Ⅲ 存活率 0.461524 0.479275 0.594895 1.116388 1.178756 1.159087
致死率 0.538476 0.520725 0.405105 -0.11639 -0.17876 -0.15909
2　讨论
2.1　对化合物 Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ的波谱分析 ,可确定 Ⅰ为 1-羟基-3 ,7 , 8-三甲氧基 酮.Ⅱ为 1 , 7-二羟基
-3 ,8-二甲氧基 酮.Ⅲ为齐墩果酸.化合物Ⅰ Ⅱ , Ⅲ的结构式见表 5.
2.2　据有关的文献报道 , 酮类化合物对实验性肝损伤有促进恢复的作用.能增加肝细胞内的糖元和
核糖核酸 ,从而促进肝细胞再生 ,使坏死组织修复 ,同时减少脂肪堆积 ,是治疗肝炎的有效成分之一[ 2] .
已有在川西獐牙菜 ,远志 ,花锚 ,滇黄芩等植物中提取出 酮化合物的报道[ 4] [ 5] [ 6] .在高寒地区的藏药湿
65第2期　　　　　　米　琴 ,曹长年 ,赵宙兴 ,等:藏药湿生扁蕾有效成份的研究　　　　　　　
生扁蕾 Gentianopsis paludosa中提取出这几类化合物还是首次.
表 5　化合物Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ的结构式
2.3　齐墩果酸是抗肝炎药物藏茵陈(川西獐牙菜)的有效药物成分之一.对 Cd4 引起肝中毒所致 S -
GPT 的升高有明显的降低作用.具有护肝降酶 ,抗炎 ,强心 ,利尿和抑制 S -180肿瘤等的作用[ 2 ,3 ,4 , 5 ,6] .
本课题组也做了生物活性测定实验.表明具有抑菌抗菌 ,促进白细胞吞噬的功能[ 7 , 8] .
2.4　体外细胞毒性实验表明 ,1-羟基-3 ,7 ,8-三甲氧基 酮 、1 , 7-二羟基-3 , 8-二甲氧基 酮.齐
墩果酸对卵巢癌细胞 HO-8910有较强的细胞毒作用 ,随着化合物浓度的增加 ,对细胞的杀伤率增加有
较好的研究价值.
综上研究结果 ,藏药湿生扁蕾中存在较多量的 酮 ,齐墩果酸 ,具有很好的研究开发价值.
参考文献:
[ 1] 　中科院植物研究所.西藏常用中草药[ M] .拉萨:西藏人民出版社 ,1971.
[ 2] 　丁经业 ,孙洪发.藏茵陈抗肝炎有效成分的研究[ J] .中草药 , 1980 , 11(9):391.
[ 3] 　王立新 ,韩广轩 ,刘文庸 ,等.齐墩果酸的化学及药理研究[ J] .The Journal of Pharmaceunical PractiCe , 2001 ,19(2):104-107.
[ 4] 　姜勇 ,屠鹏飞.远志研究进展[ J] .中草药 , 200l , 32(8):759-761.
[ 5] 　纪兰菊 ,廖志新 ,孙洪发.青海龙胆科部分藏药植物化学成分研究进展[ J] .高原生物学集刊 , 2002 ,(12):243-299.
[ 6] 　罗湘宁 ,纪兰菊 ,孙洪发.多取代 酮及其糖甙 酮的1H 和13CNMR研究[ J] .波谱学杂志 , 1996 ,13 ,(6):557-565.
[ 7] 　米琴 ,曹长年 ,王慧春 ,等.湿生扁蕾有效成分抑菌活性测定[ J] .青海大学学报(自然科学版), 2004 ,4(2):84-85.
[ 8] 　米琴 ,曹长年 ,赵宙兴 ,等.湿生扁蕾有效成分对白细胞吞噬功能的影响[ J] .青海师范大学学报(自然科学版), 2004, 3(1):65-66.
Study on the effective composition of Gentianopsis
paludosa(Munro)Ma
MI Qin
1 ,CAO Chang-nian2 , ZHAO Zhou-xing2 , TU Lan-ying2
(1.Department of Biology in Qinghai Normal University ,Xining 810008 ,China;
2.Department of Applied Chemistry in Qinghai University ,Xining 810016 ,China)
Abstract:Three monmers of compound were isolated from Gentianopsis paludosa(Munro).Two of them are
Xanthone and the other is oleanolic acid.and vitro cytotoxicity on HO-8910 cell has been determined.
Key words:Gentianopsis paludosa;xanthone;oleanolic acid;cytotoxicity
66　　　　　　　　　　　　　　青海师范大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　2005年