全 文 ：香荚兰豆的TLC鉴别及香兰素、
对羟基苯甲醛的含量测定
李肖爽，卢金清*，戴艺，梁欢，李雨玲，黎强
（湖北中医药大学湖北省药用植物研发中心，湖北武汉 430065）
摘 要：采用薄层色谱法（TLC）对香荚兰豆原料进行了定性鉴别，并用高效液相色谱法（HPLC）同时测定香荚兰豆药材
中香兰素和对羟基苯甲醛的含量。TLC法：采用正丁醇-无水乙醇-浓氨水（7 ∶ 2 ∶ 1）为展开剂，置紫外灯（254 nm）下检
视。HPLC法：采用 Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；以甲醇-水为流动相梯度洗脱；体积流量
1.0 mg/mL；检测波长分别为275 nm；柱温 25℃。TLC中斑点清晰可见。香兰素线性范围为 0.408 μg~0.816 μg（r=0.999 8），
平均回收率为 100.13%，RSD为 1.75%；对羟基苯甲醛线性范围为 0.004μg~0.020μg（r=0.9999），平均回收率为 99.56%，
RSD为 1.20 %。所测香荚兰豆中，香兰素和对羟基苯甲醛的平均含量分别为 7.26 %、0.37 %。以上方法可靠、准确、重复
性好，适用于马达加斯加香荚兰豆的鉴别及其香兰素及对羟基苯甲酸及含量测定。
关键词：香荚兰豆；薄层色谱法；高效液相色谱法；香兰素；对羟基苯甲醛
Identification of Vanillae Fructus by TLC and Determination of Vanillin and P-Hydroxybenzaldehyde
LI Xiao-shuang，LU Jin-qing*，DAI Yi，LIANG Huan，LI Yu-ling，LI Qiang
（Hubei University of Chinese Medicine/Medicinal Plant Research and Development Center of Hubei
Province，Wuhan 430065，Hubei，China）
Abstract：Thin-layer chromatography was introduced as quality identification for Vanillae Fructus raw material
and an HPLC method was established for the content determination of Vanillin and P-Hydroxybenzaldehyde．
TLC： The mobile phase was butyl alcohol-absolute alcohol-ammonia liquor （7 ∶ 2 ∶ 1），the ultraviolet detection
was carried out at 254 nm. HPLC： The separation was performed on Agilent ZORBAX SB-C18 （250 mm×
4.6 mm，5 μm） with the mobile phases of methanol -water. The flow rate was 1.0 mg/mL， the detection
wavelengths were set at 275 nm and the column temperature was maintained at 25 ℃. Spots in TLC were visible.
The linear ranges of Vanillin was in a range of 0.408 μg-0.816 μg （r=0.999 8）， the average recoveries were
100.13 % with a RSD of 1.75 %. The linear ranges of Hydroxyben- zaldehyde was in a range of 0.004 μg-0.020 μg
（r=0.999 9）， the average recoveries were 99.56 % with a RSD of 1.20 %.The average contents of Vanillin and p-
Hydroxyben - zaldehyde were 7.26 % and 0.37 % respectively． The method is simple， reliable with a good
reproducibility and is applicable for the determination of Vanillin and P -Hydroxybenzaldehyde in Vanillae
Fructus raw material.
Key words：vanillae fructus； TLC； HPLC； vanillin； p-hydroxybenzaldehyde
作者简介：李肖爽（1990—），女（汉），硕士研究生，主要从事中药及
其天然产物活性成分的研究。
*通信作者：卢金清（1955—），男（汉），教授，本科，主要从事中药及
其天然产物活性成分的研究。
食品研究与开发
Food Research And Development
2014年 12月
第 35卷第 23期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.026
香荚兰豆为兰科香荚兰属植物香荚兰 Vanilla
planifoli Andrews的成熟果实，具有息风止痉、镇静抗
惊等功效。绿色的香荚兰鲜豆荚经发酵生香等工艺
后，形成和谐、优雅的特有芳香气味[1]。香荚兰豆主要
有效成分为醛类，其中香兰素及对羟基苯甲醛作为其
活性成分，是医药、香料工业等众多领域的重要中间
体，香荚兰豆及制成品正适应了人们的需求，因为它
不仅含有多种香气成分，而且它还富含人体所需的氨
检测分析
97
基酸[2]。杨鹿佳[3]等将一定浓度的香荚兰豆酊剂添加到
各种卷烟中，并进行了加香评吸验证。目前香兰素在
国内食品工业中的消费占香兰素总消费的 55 %，是食
品添加剂行业中不可缺少的重要原料。
已有文献报道，采用同时蒸馏法对云南香荚兰挥
发性成分进行研究，在鉴定出的化合物中含有醛类，
酯类，酚类，醇类等[4]；采用反相高效液相色谱法测定
云南西双版纳香荚兰商品中香荚兰醛等化合物的含
量[5]，但国内外均无有关马达加斯加原产地香荚兰豆
化学成分的研究报道。故本文采用 TLC法对香荚兰豆
原料进行了定性鉴别，并用 HPLC法选择合适的色谱
条件对马达加斯加原产地香荚兰豆的特征性成分香兰
素、对羟基苯甲醛等进行了系统的含量测定研究，以期
为今后香荚兰豆原料的质量控制提供科学的依据。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
DIONEX-ULTIMATE 3000高效液相色谱仪，Agi－
lent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；
UP5200H超声波清洗器：熊猫集团南京电子计量有限
公司；Sartorius CP225D电子分析天平：d=0.01 mg，北京
赛多利斯天平有限公司。
1.2 试剂
香荚兰豆：马达加斯加阿诺那香荚兰公司，经湖
北中医药大学生药学教研室鉴定为兰科香荚兰属植
物香荚兰 Vanilla planifolia Andrews的成熟果实；对羟
基苯甲醛对照品：中国食品药品检定研究院提供，批
号为 100719-200806；香兰素对照品：中国食品药品
检定研究院提供，批号为 100491-200901；对羟基苯
甲酸对照品：中国食品药品检定研究院提供，批号
为 100278-201103；香草酸对照品：中国食品药品检
定研究院提供，批号为 110776-200402；甲醇为色谱
纯：美国天地公司；其他所用试剂均为分析纯；水为
蒸馏水。
2 薄层鉴别
2.1 香兰素的薄层鉴别
取本品 1 g，剪碎，加乙醚 20 mL，置锥形瓶中密
塞，超声处理 20 min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯
定容至 5 mL，作为供试品溶液，按此法制得 3批样品，
批号分别为 120415、120417、120426。另取香兰素对照
品，加甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对照品溶
液。照中国药典 2010版薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，
吸取 3批供试品溶液各 4 μL，对照品溶液 3 μL分别
点于同一硅胶 GF254薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-
浓氨水（7 ∶ 2 ∶ 1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯
（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应
的位置上，显相同颜色的斑点，如图 1。
2.2 对羟基苯甲醛的薄层鉴别
取本品 1 g，剪碎，加乙醚 20 mL，置锥形瓶中密
塞，超声处理 20 min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯
定容至 2 mL，作为供试品溶液，按此法制得 3批样品，
批号分别为 120503、120504、120509。另取对羟基苯甲
醛对照品，加甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对
照品溶液。照中国药典 2010版薄层色谱法（附录Ⅵ B）
试验，吸取 3批供试品溶液各 15 μL，对照品溶液 3 μL
分别点于同一硅胶 GF254薄层板上，以正丁醇-无水乙
醇-浓氨水（7 ∶ 2 ∶ 1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫
外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱
相应的位置上，显相同颜色的斑点，如图 2。
图 1 香荚兰豆中香兰素的薄层色谱图
Fig.1 Vanillae Fructus VanillinTLC
1.香荚兰豆 120415批次供试品 4μL；2.香荚兰豆 120417批次供试品
4μL；3.香荚兰豆 120426批次供试品 4μL；4.香兰素对照品 3 μL。
图 2 香荚兰豆中对羟基苯甲醛薄层色谱图
Fig.2 Vanillae Fructus Hygroxybenzaldehyde TLC
1.香荚兰豆 120503批次供试品 15 μL；2.香荚兰豆 120504批次供
试品 15 μL；3.香荚兰豆 120509批次供试品 15 μL；4.对羟基苯甲醛
对照品 3 μL。
检测分析李肖爽，等：香荚兰豆的TLC鉴别及香兰素、对羟基苯甲醛的含量测定
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3 含量测定方法与结果
3.1 色谱条件
色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，
5μm），以甲醇-水为流动相梯度洗脱；流速为 0.8mL/min；
柱温为 30℃；检测波长为 275 nm；进样量 10 μL。梯度
洗脱程序见表 1。
3.2 对照品溶液的制备
取香兰素对照品适量，精密称定，加 75 %乙醇溶
液制成每 1 mL含香兰素 50 μg的溶液，即得香兰素对
照品溶液。
取对羟基苯甲醛对照品适量，精密称定，加 75 %
乙醇溶液制成每 1 mL含对羟基苯甲醛 2 μg的溶液，
即得对羟基苯甲醛对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
取香荚兰豆原料约 1 g，剪碎，精密称定，精密加
入 8倍量的 75 %乙醇溶液，闭塞，称定重量，超声提
取，再称定重量，用 75 %乙醇补足减失的重量，摇匀，
滤过，取续滤液 0.25 mL至 100 mL量瓶中，加 75 %乙
醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得
供试品溶液。
3.4 系统适用性试验
取上述对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂，按照
3.1中色谱条件各进样 10 μL，得色谱图（见图 3）。
表 1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution procedure
时间/min 流动相 A甲醇/% 流动相 B 水/%
0~5 20 80
5~7 20→35 80→65
7~30 35 65
30~45 20 80
图 3 香荚兰豆（A）、对羟基苯甲醛对照品（B）、香兰素对照品（C）、空白溶液（D）
Fig.3 The HPLC chromatogram of vanillae fructus（A），hygroxybenzaldehyde reference substance（B），vanillin reference substance（C），
blank solution（D）
75.0
50.0
25.0
0.0 2.0 45.0
时间/min
4.0 6.0
-5.0
8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 26.0 28.0 30.0 32.0 34.0 36.0 38.0 40.0 42.0
mV 275 nm
A
75.0
50.0
25.0
0.0 2.0 45.0
时间/min
4.0 6.0
-5.0
8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 26.0 28.0 30.0 32.0 34.0 36.0 38.0 40.0 42.0
mV 275 nm
B
60.0
40.0
20.0
0.0 2.0 45.0
时间/min
4.0 6.0
-5.0
8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 26.0 28.0 30.0 32.0 34.0 36.0 38.0 40.0 42.0
mV 275 nmC
60.0
40.0
20.0
0.0 2.0 45.0
时间/min
4.0 6.0
-5.0
8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 26.0 28.0 30.0 32.0 34.0 36.0 38.0 40.0 42.0
mV 275 nm
D
检测分析 李肖爽，等：香荚兰豆的TLC鉴别及香兰素、对羟基苯甲醛的含量测定
99
表 2 加样回收试验结果
Table 2 Recovery test results
从图中可以看出在该条件下，香兰素、对羟基苯
甲醛与相邻的峰基线分离度大于 1.5，分离度良好，且
样品中其它组分无干扰。
3.5 方法学考察
3.5.1 线性关系考察
精密吸取 3.2 中香兰素对照品溶液 8.00、10.00、
12.00、14.00、16.00 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱
条件进样，测定峰面积。以香兰素对照品的进样量（μg）
为横坐标，以其峰面积为纵坐标（mAU*min），绘制标准
曲线，并计算线性回归方程：Y=34.435 0X+0.324 1，r =
0.999 8。结果表明：香兰素在 0.408 μg~0.816 μg范围
内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
精密吸取 3.2中对羟基苯甲醛对照品溶液 2.00、
4.00、6.00、8.00、10.00 μL，注入液相色谱仪，按上述色
谱条件进样，测定峰面积。以对羟基苯甲醛对照品的
进样量（μg） 为横坐标，以其峰面积为纵坐标
（mAU*min），绘制标准曲线，并计算线性回归方程：Y=
290.982 5X-0.030 55，r=0.999 9。结果表明：对羟基苯
甲醛在 0.004 μg~0.020 μg范围内进样量与峰面积呈
良好的线性关系。
3.5.2 精密度试验
精密吸取 2.2中对照品溶液 10 μL，连续进样 5次，
测定其峰面积，香兰素与对羟基苯甲醛峰面积的 RSD
分别为 1.83 %、0.89 %，表明仪器精密度良好。
3.5.3 稳定性研究
取同一香荚兰豆供试品溶液按上述色谱条件，分
别在 0、4、8、12、24 h测定其峰面积，计算供试品溶液中
香兰素与对羟基苯甲醛峰面积的 RSD分别为 1.77 %
和 2.46 %，说明样品在 24 h内稳定性良好。
3.5.4 重现性试验
取同一批香荚兰豆原料样品 5份，每份约 1 g，精
密称定，按“供试品溶液制备”方法项下操作，按上述
色谱条件，分别进样 10 μL进行测定，并计算含量，香兰
素及对羟基苯甲醛含量的 RSD分别为 2.15 %和 2.25
%，说明重现性良好。
3.5.5 加样回收试验
取 0.01 g本品粉末 9份，每份，精密称定，加入一
定量的香兰素对照品、对羟基苯甲醛对照品，按“供试
品溶液的制备”项下制备，并按上述色谱条件进行测
定，计算其回收率。香兰素加样回收率为 100.13 %，
RSD%为 1.75 %，对羟基苯甲醛加样回收率为 99.56 %，
RSD %为 1.20 %，结果见表 2。
结果表明，该方法加样回收率介于 95 %~105 %之
间，准确度良好。
3.6 样品的含量测定
取 5批香荚兰豆原料，按拟定的含量测定方法，
分别制备供试品溶液，每批平行测定 3次。并按上述
方法注入液相色谱仪，测定含量。结果马达加斯加香
荚兰豆原料中香兰素的平均含量为 7.26 %，对羟基苯
甲醛的平均含量为 0.37 %。
4 小结与讨论
1）制样方法的选择
由于香兰素在香荚兰豆原料中以醛类的形式存
在，因此对供试品溶液的制备条件中乙醇浓度、乙醇
用量、超声时间进行考察，通过正交设计实验最终确
定最佳提取制备工艺为：加入 8倍量 75 %乙醇，超声
提取 20 min，相对提取完全，方便可靠。
2）流动相的选择
甲醇、乙腈、水（用磷酸、冰醋酸调节流动相 pH）
为用高效液相色谱法分析时常常采用的流动相。采用
甲醇-水、甲醇-乙腈-冰醋酸、乙腈-0.02 %磷酸作为流
动相，在香兰素含量测定的试验中采用控制变量法，
在其他色谱条件相同的情况下，观察各流动相下的色
谱图，比较其图谱的分离度、出峰个数、理论塔板数等，
并综合实际各项因素最终选取甲醇-水作为原料含量
测定的流动相。
成分
取样量/
mg
加入量/
mg
检测量/
mg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/%
香兰素 9.75 0.18 0.89 97.40 100.13 1.75
10.15 0.17 0.92 103.53
10.05 0.17 0.91 101.96
10.01 0.37 1.10 98.99
9.94 0.36 1.09 100.39
9.99 0.36 1.09 99.37
9.81 0.92 1.64 100.10
10.11 0.92 1.66 99.88
10.15 0.94 1.68 99.58
对羟基
苯甲醛
502.33 0.46 2.32 100.30 99.56 1.20
497.26 0.48 2.32 100.03
495.49 0.49 2.31 97.28
502.62. 0.93 2.79 100.03
500.68 0.93 2.78 99.73
502.19 0.92 2.77 99.12
493.31 1.42 3.23 98.93
506.34 1.38 3.24 99.02
496.71 1.37 3.23 101.62
检测分析李肖爽，等：香荚兰豆的TLC鉴别及香兰素、对羟基苯甲醛的含量测定
100
3）在对香荚兰豆原料中主要成分香兰素、对羟基
苯甲醛进行含量测定的同时，对其他未知成分也进
行了定性分析。在同一分析条件下，确定保留时间
为 13.86、15.03 min的化合物分别为对羟基苯甲酸、香
草酸。由于检测出的化合物对应的峰面积较小，含量
偏低，故只对这 2个化合物进行定性分析，未进行含量
测定研究。
本实验建立的 TLC及 HPLC方法可同时测定香
荚兰豆中香兰素与对羟基苯甲醛成分含量，针对两个
指标成分进行分析，专属性强，简便可靠，可全面地对
该药材进行质量控制，为建立香荚兰豆原药材质量标
准提供了科学依据。
参考文献：
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其应用[J].香精香料化妆品,2006,12(6):33-37
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国药房,1996,7(5):229-230
收稿日期：2013-05-08
ICP-AES法测定大豆膳食纤维咀嚼片中
金属元素的含量
蒋志勤
（天津师范大学化学学院，天津 300387）
摘 要：通过对大豆膳食纤维咀嚼片样品消化方法进行研究，确定了实验的最佳消化方法是：混酸HNO3和 HClO4比例
为 4 ∶ 1，消化温度为 140℃，消化时间为 80 min；同时采用电感耦合等离子体原子发射光谱（ICP-AES）法测定大豆膳食
纤维咀嚼片中钠、钙、镁、钾、锰、铁、铜、锌的含量。这种检测方法具有快速、简便、消解完全等特点，且测定结果准确，为
建立大豆膳食纤维咀嚼片质量标准建立了科学的检测方法。
关键词：大豆膳食纤维咀嚼片；金属元素；湿法消化；ICP-AES法
Determination of Metal Elements by ICP-AES in Soybean Dietary Fiber Chewing Tablet
JIANG Zhi-qin
（Chemistry College，Tianjin Normal University，Tianjin 300387，China）
Abstract：Soybean dietary fiber chewing tablets were digested by the methods of wet digesting and the suitable
conditions of digesting of metal elements was confirmed. It was determined that the proportion of mixed acids for
digesting samples was HNO3 ∶ HClO4 = 4 ∶ 1， and digesting temperature and time were 140 ℃ and 80 min.
Meanwhile， the contents of Na， Ca， Mg， K， Mn， Fe， Cu， Zn in Soybean dietary fiber chewing tablets were
determined by ICP-AES， and the results were satisfactory. The above digesting and determining method was a
fast， simple， convenient， and accurate determining method for the establishment of quality standard of soybean
dietary fiber chewing tablets.
Key words：soybean dietary fiber chewing tablets； metal elements； wet digesting； ICP-AES
作者简介：蒋志勤（1965—），女（汉），高级工程师，工程硕士，主要从事保健食品的工艺研究及教学工作。
食品研究与开发
Food Research And Development
2014年 12月
第 35卷第 23期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.027
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检测分析
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