全 文 ：虎舌红多糖的分离纯化与性质研究
凌育赵 1 , 曾满枝2
(1.仲恺农业技术学院化学化工系 , 广州 510225;2.华南农业大学理学院应用化学系 , 广州 510642)
摘　要:采用水提醇沉法提取虎舌红多糖 , 经 DEAE-C32柱层析分离 , Sephadex
G-200进一步纯化 , 得到 AⅠ和 AⅡ二种虎舌红多糖 , Sephadex G-200凝胶过
滤法表明 , AⅠ组分为均一组分 , 其相对分子质量为 2.76×104 , 借助气相色谱
技术 , 研究了粗多糖和A Ⅰ组分的单糖组成。
关键词:虎舌红多糖;分离纯化;组成分析
中图分类号:O652.6　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-0720(2007)04-093-04
　　虎舌红(Ardisia mamillata), 又名红毛毡 、宝鼎
红 、天仙红衣 、毛凉伞 、金丝红珠等 , 为紫金牛科
紫金牛属。原产我国 , 分布于福建 、广西 、广东 、
云南 、四川 、贵州 、江西等地 。虎舌红叶片紫红
色 , 果实鲜红色 , 叶果并美 , 是室内观叶植物的首
选佳品[ 1] 。《云南中草药选》中记载虎舌红全草可
入药 , 有清热利湿 、活血止血 、去腐去肌等功效 ,
对跌打损伤 、风湿骨痛 、肺痨咳嗽 、疳积肝炎均有
疗效[ 2] 。目前对虎舌红化学成分的研究 , 主要为挥
发油[ 3] , 而对多糖成分的研究至今未见有报道 。
大量的药理和临床研究表明 ,多糖类化合物是
一种免疫调节剂 ,它能激活免疫细胞 ,提高机体的
免疫功能 。目前从天然药用植物中提取了 100多
种具有免疫促进作用的多糖类化合物 , 多糖化合
物已成为当今新药的发展方向之一[ 4] 。本文对虎
舌红多糖进行了分离纯化 , 并对得到的多糖组分
进行了初步的研究。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
虎舌红全草(Ardisia mamillata)采自封开森林
保护区 , 经生物学鉴定 , 阴干 、粉碎(粒度为0.351
mm);透析袋(截流相对分子质量为 8000);DEAE
-C32纤维素(上海恒信试剂有限公司);蓝色葡聚
糖及标准系列葡聚糖 Dextran(Phannacia 公司)。交
联葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)、已知相对分子
质量的标准Dextran 、蓝色葡聚糖和标准单糖(包括
鼠李糖 、果糖 、山梨糖 、阿拉伯糖 、木糖 、甘露糖 、
葡萄糖和半乳糖)购于上海医药集团 , 三氟乙酸
(TFA)、盐酸羟胺 、吡啶 、硼氢化钠等为分析纯。
GC123型气相色谱仪(上海分析仪器厂);754
紫外 -可见分光光度计(上海分析仪器厂);
760CRT 紫外光谱仪;HH-6电热恒温水浴槽;LXJ
-11离心沉淀机;SHB-111循环水式多用真空
泵。
1.2　虎舌红多糖的提取
称取虎舌红粗粉 200 g , 用甲醇回流脱去表面
脂肪 , 过滤 , 药渣用 95%乙醇回流除去小分子糖 、
生物碱等杂质 , 过滤 , 药渣再以水作溶剂 , 在 80
℃下加热回流提取得水提液 。减压浓缩水提液至
小体积时 , 加入无水乙醇使乙醇体积分数为 75%,
静置 24 h后 , 析出沉淀 , 分别用 95%乙醇 、丙酮
洗涤沉淀 3 次 , 真空干燥 , 得灰白色多糖粗品 A
为 7.3 g 。重量法计算得多糖质量分数为 3.7%。
1.3　多糖的分离纯化
将粗多糖溶于少量蒸馏水 , 离心 , 上清液用
DEAE-C32层析柱分离(2.6 cm i.d.×32 cm), 先
用蒸馏水洗脱 , 再用 0.5 mol L NaCI溶液洗脱 , 流
速 0.6 mL min , 利用自动部分收集器以每管 5 mL
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收稿日期:2006-05-25;修订日期:2006-08-10
基金项目:仲恺农业技术学院科研基金(G3052727)项目资助
作者简介:凌育赵(1967-), 男 , 实验师
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2007.0112
分部收集 , 苯酚 -H2SO4 法显色 , 于 490 nm 处检
测糖峰部分 , 合并单一含糖峰位 , 得到二种主要
组分 Ⅰ水和 Ⅱ盐。各洗脱级分再经 SephadexG-
200 凝胶柱(2 cm i.d.×75 cm)层析 , 以 0.5 mol L
NaCl溶液为洗脱液 , 流速为 12 mL h , 每管 5 mL ,
同上法检测 , 分别收集各主峰级分 , 经透析 、浓
缩 、醇沉 、洗涤 、真空干燥 , 得到二种精制多糖
AⅠ和A Ⅱ。本文主要对AⅠ作详细分析。
1.4　凝胶过滤法测相对分子质量[ 5]
Sephadex G-200层析柱(1.35 cm i.d.×23 cm)
0.5 mol L NaCl溶液按 20 mL h 恒定流速平衡 2 h 。
蓝色葡聚糖(相对分子质量为 200万)和各标准糖
的上柱量都为 5 mg , 先用蓝色葡聚糖洗脱测得外
水体积 V0 , 再用相对分子质量分别为 T500 、 T70 、
T40 、T10的标准品依次上柱 , 分部收集流出液(5
mL 管), 苯酚-H2SO4 法显色 , 于 490 nm 处检测
糖峰 , 分别求得它们的洗脱体积 Ve 。以相对分子
质量MT 的对数 lg MT 为纵坐标 , Ve V0 为横坐标
作图 , 绘制标准曲线 , 各样品糖按上述条件上柱 ,
求得它们的 Ve , 根据 Ve V0 值求得对应的相对分
子质量。
2　结果与讨论
2.1　虎舌红多糖的分离纯化结果
经DEAE-C32纤维素柱分离得到 Ⅰ水 31.3 mg 、
Ⅱ盐 351.1 mg , 收率分别为 3.8%、 43.6%。柱层
析结果见图 1 、图 2。二种级分再经过 SephadexG-
200 进一步 纯化 , 分 别得到 A Ⅰ 23.8 mg 、
AⅡ 302.5 mg , 与上样量比 , 收率分别为 76.5%、
86.4%。
图 1　虎舌红多糖 DEAE-C32层析分离图(蒸馏水洗脱)
Fig.1 　Elution curve of aysaccharide on DEAE-C32 column
using distilled water as eluent
2.2　AⅠ多糖的纯度鉴定[ 6]
使用 SephadexG-200凝胶层析柱 , 取 3 mg多糖
纯品 AⅠ溶于 1 mL 0.5 mol L NaCl溶液中 , 以 0.5
mol L NaCl溶液洗脱 , 流速 12 mL h , 每 3 mL 收集
一管 , 其洗脱曲线呈单一对称峰(见图 3), 表明
A Ⅰ是均一性多糖 。
图2　虎舌红多糖 DEAE-C32层析分离图(0.5 moL NaCl洗脱)
Fig.2　Elution curve of aysaccharide on DEAE-C32 column
using 0.5 mol NaCl as eluent
图 3　多糖 AⅠ的 SephadexG-200 纯化图谱
Fig.3 　Elution curve of polysaccharide AI on DEAE-C32
column
2.3　AⅠ多糖的相对分子质量测定结果
蓝色葡聚糖洗脱外水体积 V0 为 41.9 mL , 标
准葡聚糖 T500 、 T70 、 T40 、 T10的洗脱体积 Ve 分
别为 58.5 、76.7 、 85.4 、99.2 mL。回归方程为 Y =
-1.6832X +8.0392 , R =-0.9973 (Y 代表 lgM ,
X 代表 Ve V0)。样品 AⅠ洗脱体积 Ve 为 88.7 mL ,
由此计算得A Ⅰ表观分子量为 2.76×104 , 见图4。
2.4　气相色谱对多糖组成的分析
2.4.1　多糖的水解及衍生物的制备　分别称取 5
mg 的粗多糖和A Ⅰ纯品溶解在 4.0 mL 2 mol L 的
三氟乙酸中 , 充氮封管 , 100 ℃水浴加热水解 , 除
尽水解液(TFA)。然后在多糖水解样中加入 0.5
mL NaOH (0.05mol L)和 5 mg NaBH4 , 室温放置过
夜进行还原 , 用乙酸中和后 , 加甲醇除去过量的
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NaBH4
[ 6] , 残渣在P2O 5存在下真空干燥 4 h;加入
0.5 mL 乙酸酐和 0.5 mL 吡啶 , 在 100 ℃反应 30
min;冷至室温后用氮气除去过量的乙酸酐和吡
啶 , 加 0.5 mL二氯甲烷溶解衍生物 , 收集通过微
型过滤器的二氯甲烷液 , 浓缩至所需体积进行 GC
分析 。
图 4　标准分子量葡聚糖的标准曲线及检测结果
Fig.4　Standard curve and determination results of standard
molecular weight of polysaccharide
2.4.2　GC分析条件　GC条件:OV-225石英毛细
管柱(0.32 mm×25 m), 柱温从 160 ℃程序升温(5
℃ min)至 220 ℃, 检测器和进样器温度均为 250
℃, 进样量 1μL。载气为氢气 , 线速度为 48 cm s。
2.4.3　实验结果分析　图 5 ～图 7分别给出了混
合标准单糖 、粗多糖和 A Ⅰ纯品的糖醇乙酸酯衍
生物的气相色谱图。由对照图可知 , 粗多糖为杂多
图 5　标准单糖衍生物的 GC 图谱
Fig.5　Gas chromatograms of standard simple sugar deriva-
tives
1-鼠李糖;2-阿拉伯糖;3-木糖;4-果糖;5-山梨糖;
6-甘露糖;7-半乳糖;8-葡萄糖
图 6　粗多糖衍生物的GC 图谱
Fig.6　Gas chromatogram of crude amylose derivatives
图 7　AⅠ多糖衍生物的 GC 图谱
Fig.7　Gas chromatogram of AⅠ amylose derivatives
糖 , 主要由阿拉伯糖 、木糖 、甘露糖 、半乳糖和葡
萄糖组成 , 由面积归一化法测得其摩尔比是 1.13∶
1.35∶1.87∶1.00∶1.29。A Ⅰ主要由葡萄糖和半乳糖
组成 , 摩尔比为 1.54∶1.00;这说明虎舌红粗多糖
与精制多糖不仅在摩尔比上存在量的差异 , 在单
糖组成上也有质的区别 。
参考文献
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[ 2] 　赵　亚 , 刘合刚.中草药 , 1999 , 30(3):228
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[ 6] 　方积年.药学通报 , 1984 , 19(10):46
Isolation , purification and property study of aysaccharide from ardisia mamillata
LINGYu-zhao＊1 and ZENG Man-zhi 2(1.Department of Chemistry and Chemical engineeting ,Zhongkai Agrotechnical
Collage , Guangzhou 510225;2.Department of Applied Chemistry , South China Agricultural University , Guangzhou
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2007 年 4月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.26.No.42007-4
510642), Fenxi Shiyanshi , 2007 , 26(4):93 ～ 96
Abstract:Ardisia mamillata Aysaccharide was extracted by water and precipitated by ethanol.It was isolated and pu-
rified by chromatography of DEAE-cellulose and sephadexG-200 columns.Two kinds of polysaccharide (A Ⅰ and
AⅡ)were obtained.The results of Sephadex G-200 column chromatography showed that A Ⅰ was uniform.and the
molecular weight of AⅠ is 2.6×104.The compositions of crude amylose and AⅠ were determined and quantified by
GC.
Keywords:Ardisia mamillata aysaccharide;Isolation and purification;Composition analysis
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