全 文 ：虎舌红组织培养及快速繁殖技术体系研究
曾云英 ,孙英　(九江学院土木工程与城市建设院 , 江西九江 332005)
摘要　[目的] 寻找快速获得整齐一致的虎舌红苗木的方法 ,为虎舌红的产业化生产提供理论与技术支撑。[方法] 以虎舌红当年生枝
条和带芽茎段为外植体进行组织培养试验。[结果] 诱导虎舌红芽分化的最优激素组合是 TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AgNO3 3.0
mg/L,其平均诱导率达 94.56%;其次是 TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+AgNO3 5.0 mg/ L,其平均诱导率为 89.18%;2号和3号培养基上的
芽分化率最低 ,不到 35%。诱导虎舌红芽增殖的最佳激素组合是 6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/ L,其平均增殖系数为 5.14。 IBA对虎舌
红生根的影响比NAA大 ,培养基 1/2 MS+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L诱导虎舌红生根的效果较好 ,生根率达 75.8%。虎舌红组培幼
苗的移栽成活率达 87.6%。[结论] 诱导虎舌红芽分化的最佳培养基为 1/2MS+TDZ 0.5mg/L+NAA 0.2 mg/L+AgNO33.0mg/ L,最佳增殖培养基为 1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/ L,最佳生根培养基为 1/ 2MS+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。
关键词　虎舌红;组织培养;快速繁殖
中图分类号　S 603.6　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)13-05875-02
Study on the Technique System of Tissue Culture and Rapid Propagation of Ardisia mamillata
ZENG Yun-ying et al　(College of Civil Engineering and Urban Construction , Jiujiang University, Jiujiang , Jiangxi 332005)
Abstract 　[Objective] The aim of the study was to find a method of getting uniform Ardisia mamillata seedlings rapidly and provide theoretical and
technical support for its industrial production.[Method] With current-year branches and stem sections with buds of A.mamillata as explants , the ex-
periment on its tissue culture was performed.[ Result] The optimum hormone combination for inducing the bud differentiation of A.mamillata was TDZ
0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AgNO3 3.0 mg/L and its average induction ratewas up to 94.56%;TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+AgNO3 5.0 mg/
L was secondary and its average induction rate was 89.18%.The bud differentiation rate was lowest on media 2 and 3, which was less than 35%.The
optimum hormone combination for inducing the bud multiplication of A.mamillata was 6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L and its average multiplication
coefficient was 5.14.The effect of IAA on the rooting of A.mamillata was greater than that of NAA.The effect on inducing the rooting of A.mamillata
of medium 1/2MS+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L was better and its rooting rate was up to 75.8%.The survival rate of transplanted A.mamillata
seedlings from tissue culture was up to 87.6%.[ Conclusion] The optimum medium for inducing the bud differentiation of A.mamillata was 1/2 MS+
TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AgNO33.0 mg/L , that for inducing its bud multiplication was 1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/ L and that
for inducing its rooting was 1/ 2MS+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L.
Key words　 Ardisia mamillata;Tissue culture;Rapid propagation
基金项目　江西省教育厅科技项目(GJJ09603)。
作者简介　曾云英(1976-),女 ,重庆长寿人 ,硕士 ,讲师 ,从事园艺植
物方面的研究。
收稿日期　2009-02-20
　　虎舌红(Ardisia mamillata Hance)是紫金牛科紫金牛属多
年生常绿小灌木。虎舌红叶花果并美 ,是一种罕见的观赏药
用植物 ,全草有清热利湿 、活血 、止血止痛 、祛腐生肌等功效。
虎舌红属世界濒危植物 ,其自然分布区比较狭小 ,在自然界
存在的数量不多 ,多为散生分布 ,且长势较弱 ,少有挂果 ,如
不加以保护和扩大栽培数量 ,将难以避免绝种的厄运[ 1-4] 。
因此 ,笔者进行试验研究虎舌红的快速繁殖 ,以期可以快速
获得整齐一致的苗木 ,为虎舌红的产业化生产提供理论与技
术支撑。
1　材料与方法
1.1　外植体　选当年生枝条和萌蘖条上的带芽茎段作为外
植体。
1.2　材料处理　用去污剂(肥皂水或洗衣粉水)浸泡并刷洗
后流水冲洗 1～ 2 h ,用浓度为 75%的酒精表面消毒 45 s ,无菌
水冲洗 3次 ,放入 0.1%升汞中灭菌 8 ～ 10 min并不停振荡 ,
再用无菌水冲洗 5 ～ 8次后 ,接种到诱导分化培养基上。
1.3　培养条件　培养温度为(26±2)℃,光照强度为 2 000
lx ,每天光照 12 h。试验用的基本培养基为 1/2MS ,生长调节
物质为TDZ 、NAA 、AgNO3 、6-BA 、IBA ,培养基中加 0.5%琼脂
粉 ,3%蔗糖 ,pH值调至 5.8。
2　结果与分析
2.1　外植体的诱导分化　将消毒好的外植体接种到诱导分
化培养基上 ,先进行为期 2周的暗培养 ,再转入光下培养。
观察其生长状况并进行统计。接种的外植体一个月左右腋
芽开始萌动 ,抽出新芽 。从表 1可以看出 ,所列组合均能诱导
芽分化 ,只是分化程度和效果不同而已 。4号和 5号培养基
的芽启动分化早 ,平均诱导率较高。TDZ 0.5mg/L+NAA 0.2
mg/L+AgNO3 3.0mg/L为诱导芽分化的最优激素组合 ,平均
诱导分化率达 94.56%。其次是 TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.4
mg/L+AgNO3 5.0mg/L ,芽平均诱导率为 89.18%,而 2号和 3
号培养基上的分化率最低 ,不到 35%。
表 1　不同浓度激素及配比对诱导芽分化的影响
Table 1　Effects of different concentration and types of hormones on the in-
duction of bud differentiation
试验号
Trea-
tment
No.
激素种类和浓度
Hormone type and
concentration ∥mg/ L
TDZ NAA AgNO3
平均诱导分化率∥%
Average induction
differentiation rate
备注
Remarks
1 0.2 0.2 1.0 45.00 cC 分化迟 ,基部有少量愈伤组织　
2 0.2 0.4 3.0 34.05 cC 分化迟 ,基部愈伤组织块较大　
3 0.2 0.8 5.0 33.02 cC 分化迟 ,基部愈伤组织块较大　
4 0.5 0.2 3.0 94.56 aA 分化早 ,基部有少量愈伤组织　
5 0.5 0.4 5.0 89.18 aA 分化早 ,基部有少量愈伤组织　
6 0.5 0.8 1.0 36.18 cC 分化迟 ,基部愈伤组织块较大　
7 1.0 0.2 5.0 72.09 bB 分化较早 ,基部有少量愈伤组织
8 1.0 0.4 1.0 47.18 cC 分化迟 ,基部有少量愈伤组织　
9 1.0 0.8 3.0 50.00 cC 分化迟 ,基部有少量愈伤组织　
　注:各处理芽分化率进行 LSD 检验 ,数字后不同小写字母表示在 0.05水平
有显著差异 ,不同大写字母表示在 0.01水平有极显著差异 ,字母相同
表示差异不显著。
　Note:LSD testwas made on the bud differentiation rate under different treatrnents;
Different small letters behind the bud differentiation rate under different treat-
mentsmean significant difference at 0.05 level and different capital letters
mean extremely significant difference at 0.01 level;The same letters mean no
significant difference.
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2009 ,37(13):5875-5876　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　王淼　责任校对　傅真治
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.13.088
2.2　芽增殖培养基的筛选　当芽苗伸长到 1.0 ～ 1.5 cm时 ,
将其取出进行增殖培养 ,研究不同激素配比对芽苗增殖的影
响。30 d后统计其增殖情况 ,并观察芽苗的生长状况。从表
2中可以看出 ,试验中所列激素组合下 ,芽苗均能增殖 2 ～ 5
倍。在增殖培养过程中 ,各个处理也能使芽苗增殖 ,但芽苗
生长状况不一样。试验中 ,6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L为
诱导芽增殖的最佳激素浓度配比 ,平均增殖系数为 5.14 ,芽
苗生长健壮 ,丛生芽多。
表2　不同浓度激素及配比对芽增殖倍数的影响
Table 2　Effects of different concentration and types of hormones on the
multiplicationmultiple of buds
试验号
Treatment
No.
激素种类和浓度
Hormone type and
concentration ∥mg/ L
6-BA NAA
平均增殖倍数
Average multip-
licationmultiple
植株生长状态
Growth status
of palnts
1 1.0 0.2 2.69 芽苗矮壮
2 1.0 0.5 3.73 芽苗矮壮
3 1.0 0.8 2.54 芽苗纤细 ,叶柄细长
4 1.5 0.2 4.89 芽纤细 ,丛生芽多
5 1.5 0.5 5.14 芽粗壮 ,丛生芽多
6 1.5 0.8 4.14 芽纤细
7 2.0 0.2 4.52 芽节间短缩
8 2.0 0.5 2.45 芽苗纤细
9 2.0 0.8 3.90 芽苗纤细
2.3　生根培养　待苗长到 2.0～ 2.5 cm时 ,选健壮苗转入生
根培养基中诱导生根 ,在诱导试管苗生根过程中 ,用 1/2 MS
为基本培养基 ,附加 IBA 、NAA。10 d以后观察并统计结果。
从整体上看 ,生根情况都不怎么好 ,根系纤弱 ,且须根少。从
表 3中可以看出 , IBA对虎舌红生根影响比 NAA 大 , 1/2 MS
+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5mg/L诱导生根效果较好 ,生根率
达 75.8%。待根长到 0.5 cm左右时 ,将一部分生根苗转移到
不含任何激素的 1/2MS培养基上进行培养 ,以促进根的生
长和根数的增加并有利于移栽成活率的提高。
2.4　试管苗移栽　当试管苗长有 3～ 4条根时 ,将根苗健壮
的植株打开瓶口在培养条件下炼苗 3 d ,然后转入自然光下
验苗 1周后 ,移栽到已消毒的营养土(珍珠岩∶蛭石=1∶1)中
培养 。保持小苗的生长的温度(18 ～ 25 ℃)和湿度(相对湿度
80%以上),移栽成活率达 87.6%。
表 3　不同浓度激素及配比对生根的影响
Table 3　Effects of different concentration and types of hormones on the
rooting
培养基
编号
Treatment
No.
激素种类和浓度
Hormone type and
concentration ∥mg/ L
IBA NAA
生根率
Rooting
rate%
根系生长状况
Growth status
of roots
1 0 0.8 41.3 根短 ,平均根数为 2～ 3,
少数基部愈伤组织化
2 0.3 0.5 75.8 平均根数为3 ～ 4,根长
3 0.8 0 58.9 平均根数为3 ～ 4,根较长
3　结论
研究表明 ,用当年生带芽茎段作为外植体比较容易诱导
成苗 ,试验中 ,1/2 MS+TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Ag-
NO3 3.0 mg/L为诱导芽分化的最佳培养基 ,最佳的增殖培养
基为 1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L ,在生根培养
中 , 1/2 MS+IBA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L诱导生根效果
较好 。
参考文献
[ 1] 张月娇.虎舌红组织培养的试验研究[ J] .林业科技开发, 2003,17(S1):
10-11.
[ 2] 江香梅 ,邓小梅.虎舌红的组织培养和植株再生[ J] .江西林业科技 ,
2001(6):3-11.
[ 3] 康美玲.虎舌红组织培养技术体系研究[ D] .雅安:四川农业大学, 2003.
[ 4] 杨妙贤.虎舌红野生资源的开发利用[ J] .中国野生植物资源 , 2004 , 23(6):27-32.
[ 5] LIU HM ,LINGHU K Y ,FANG X B.The study on induction and proliferation of
tube bulbsin Lilium brownii[ J] .Agricultural Science&Technology ,2008, 9(1):
18-20 ,53.
[ 6] 巢建国 ,谈献和,张瑜,等.白花蛇舌草组织培养研究[ J] .南京中医药
大学学报:自然科学版 , 2005, 21(6):369-370.
[ 7] JIANG Q ,DONG L , NING Z Y , et al.Establishment of somatic cell clones in
Thesium chinense Turcz and its in vitro rooting technique[ J] .Agricultural Sci-
ence &Technology , 2008 ,9(5):47-49,52.
(上接第 5853页)
水中也可以筛到产岩藻多糖酶的菌株 ,避免了在工业生产
中配制海水培养基的问题 ,为工业化生产酶制剂提供了技
术支持 ,为低分子量岩藻多糖的生产提供了先决条件 。不
过要进行工业化生产 ,还需要进一步筛选到高酶活力的
菌株。
参考文献
[ 1] KITAMURA K.Enzymic degradation of fucoidan by fucoidanase from the
epatopancreas of patinopecten yessoensis[ J] .Biosci Biotech Biochem, 1992, 56
(3):490-494.
[ 2] KURIMURA Y, TSUJI Y ,YAMAMOTO K , et al.Efficient production and purifi-
cationof extracellular 1, 2-α-L-fucosidase of Bacillus sp.K40T[ J] .Biosci
Biotech and Biochem ,1995, 59(4):589-594.
[ 3] FURUKAWA S , KOGA D.Purification and some properties of exo-type fu-
coidanases from Vibrio sp.N-5[ J] .Biosci Biotech Biochem, 1992, 56(11):1829
-1834.
[ 4] 张惟杰.糖复合物生化研究技术[M] .杭州:浙江大学出版社 , 1994:
14-15.[ 5] BAKUNINA I Y ,NEDASHKOVSKAYA O I ,ALEKSEEVA S A , et al.Degrada-
tion of fucoidan by the marine proteobacterium Pseudoaltevomonas citrea[ J] .
Microbiology ,2002, 71(1):41-47.
[ 6] 吴克,刘斌 ,吴茜茜,等.海洋真菌Dendryphiella arenaria TM94产岩藻多
糖酶发酵及酶学性质[ J] .生物学杂志 ,2003, 20(2):14-16.
[ 7] 陈惠源 ,蔡俊鹏,刘江涛.岩藻多糖降解酶产生菌的筛选及鉴定[ J] .现
代食品科技 , 2005, 21(3):42-44.
[ 8] TAKESHI S ,TAKASHI K , IKUNOSHIN K.Isolation and characterization of a
fucoidan-degrading marine bacterial strain and its fucoidanase japan[ J] .Mar
Biotechnol ,2004, 6:335-346.
[ 9] BAILLEYM J , BIELY P , POUTANEN K.Interaboratory testing of methods for
assay of xylanase activity[ J] .Biotech Chnol ,1992, 23:257-270.
[ 9] 张信旭 ,高海波.3 5-二硝基水杨酸测定古尼虫草中多糖含量方法[ J] .贵州化工, , 2002(3):29-35.
[ 10] CHIPLONKAR J M ,GANGODKAR S V ,WAGH U V , et al.Applications of al-
kaline protease from Conidiobolus in animal cell culture[ J] .Biotechnol Lett ,
1985,7:665-668.
[ 11] 严杰 ,罗海波 ,陆德源.现代微生物学试验技术及其应用[M] .北京:人
民卫生出版社 ,1997:261-268.
5876 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年