全 文 ：　　 [文章编号 ]　 1671-587Ⅹ ( 2004) 04-0553-03
[收稿日期 ] 　 2003-07-18
[基金项目 ] 　吉林省科技厅资助课题 ( 20010560)
[作者简介 ] 　牛凤兰 ( 1951- ) , 女 , 吉林省长春市人 , 教授 , 主要从事药食同用植物与健康研究。
东北菱提取物对肝癌细胞的体内外抑制作用
牛凤兰 1 , 李晨旭 1 , 董威严 1 , 程　舸 1 , 曲　扬 2
( 1. 吉林大学公共卫生学院中心实验室 , 吉林 长春 130021; 2. 吉林大学图书馆 , 吉林 长春 130021)
[摘　要 ]　目的: 探索东北菱提取物对肝癌细胞体内外抑制作用。方法: 采用 3 H-TdR掺入法分别测定东北菱醇
提取物和水提取物对肝癌细胞的体外敏感性 ;对荷瘤小鼠进行体内实验 ,观察该提取物对肝癌细胞生长的抑制率。
结果: 体外实验当剂量达 225. 00 g· L- 1时 , 抑制率为 75. 49% ; 体内实验抑瘤率为 60%以上。结论: 东北菱不同
溶剂提取物均具有抑制肝癌细胞的作用。
[关键词 ] 　东北菱 ; 肝肿瘤 , 实验性 /药物疗法 ; 肝癌细胞
[中图分类号 ] 　 R979. 1　　 [文献标识码 ]　 A
Inhibitory ef fects of extracts fromTrapa manshurica Fler.
on liver cancer cells in vivo and in v itro
NIU Feng-lan1 , L I Ch en-xu1 , DONG Wei-yan1 , CHEN G Ge1 , QU Yang2
( 1. Depar tment of Centr al Labo rato ry , Schoo l o f Public Hea lth, Jilin Univ ersity ,
Changchun 130021, China; 2. The Librar y o f Jilin Univ er sity , Changchun 130021, China)
Abstract: Objective　 To explor e the inhibito ry effects o f ex t racts f rom Trapa manshurica Fle r. on liv er cancer
cells in vivo and in v itro. Methods　 The sensitiv ity of ex tract s from Trapa manshurica Fle r. to liv er cance r cells in
v itro w as dete rmined w ith 3 H-Td R inco rpor ation me thod. The inhibito ry rate and g rowth of the tumo r and the
w eigh t change o f the mice we re obse rv ed. Results　When th e do sage was 225. 00 g· L- 1 , th e inhibito r y rate of
tumo r was 75. 49% in v itro and the inhibito r y ra te o f tumo r wa s 60% in vivo. Conclusion　 The ex trac ts fr om
Trapa manshurica Fler. ha s the inhibito ry effects on tumo r.
Key words: T rapa manshurica Fle r. ; liv er neoplasms, expe rimental /drug therapy; liv er cancer cells
　　为观察东北菱 ( Trapa manshurica Fler. )提取
物在体内外对肿瘤细胞的抑制作用 , 本研究以体外
培养的人肝癌细胞为靶细胞 , 用 3H-TdR掺入法 [ 1]
观察不同浓度的东北菱提取物对癌细胞的抑制作
用 [2, 3 ] , 并对小鼠肝癌细胞 H22荷瘤小鼠进行体内实
验 , 观察提取物对荷瘤小鼠生长的影响及小鼠体重
的变化 , 为东北菱药用资源开发提供实验依据。
1　材料与方法
1. 1　受试药物　采用传统的提取方法 , 分别用水、
醇不同溶剂提取东北菱样品 , 由本室制备。
1. 2　瘤　株　小鼠肝癌细胞 H22 , 由吉林省肿瘤医
院提供。人肝癌细胞 QGY-7403,由吉林省肿瘤医院
提供。
1. 3　试剂和仪器　 RPM T1640培养粉 ( GIBCO,美
国 ) ; 3H-TdR由中国科学院原子能研究所提供 ; CO2
培养箱 ( PIKA-KOGYO,日本 ) ; 96孔培养板 ; PKI-
1002 CO2孵箱 ( PIK A-KOGYO,日本 ) ; LKB-1214
型 ReckBeta液体闪烁计数仪 (瑞典 )。
1. 4　动物及分组　昆明种小白鼠 70只 , 雄性 , 体
重 ( 22± 2) g , 由本校实验动物中心提供。 动物被
随机分为 7组 (每组 10只 )。 ①东北菱醇提取物样
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第 30卷　第 4期
2004年 7月
吉 林 大 学 学 报 (医 学 版 )
Journa l o f Jilin Univ er sity ( Medicine Edition)
Vol. 30 No. 4　
July 2004
DOI : 10. 13481 /j . 1671 -587x. 2004. 04. 026
品分为大剂量组 (灌胃给 24 g· kg- 1生药 ) 和小剂
量组 (灌胃给 12 g· kg- 1生药 ) ; ②东北菱水提取物
样品分为大剂量组 (灌胃给 52. 5 g· kg- 1生药 ) 和
中剂量组 (灌胃给 26. 25 g· kg- 1生药 )和小剂量组
(灌胃给 13. 125 g· kg- 1生药 ) ; ③阳性对照组腹腔
内注射 5-Fu ( 20 mg· kg- 1 ) , 阴性对照组 (灌胃给
等剂量的生理盐水 )。
1. 5　东北菱提取物对离体培养的肝癌细胞抑制作
用　常规复苏细胞 , 待细胞生长状态良好 , 调整肝
癌细胞为 1× 106· mL- 1 , 96孔平底培养板 ,每孔加
细胞悬液 180μL, 同时加入不同浓度东北菱提取物
各 20μL, 每一浓度均设三复孔 , 对照组每孔加
20μL培养液 , 置于 CO2孵箱中培养 2 h后每孔加
3 H-TdR 20μL, 再置于 CO2孵箱中培养 1. 5 h, 用
多头细胞收集器收集细胞 , 滤膜干后 , 用液体闪烁
计数仪测定 3H-TdR掺入量 ,结果以 cpm表示 ,计算
抑制百分率。 抑制百分率 (% ) = (对照孔细胞掺
入量 cpm-药物孔细胞掺入量 cpm ) /对照孔细胞掺
入量 cpm× 100。
1. 6　东北菱提取物对荷瘤小鼠生长影响　取接种
1周小鼠的肝癌 H22的腹水细胞悬液 , 稀释成
1× 108· mL- 1 ,取 0. 1 mL接种于小鼠左后肢皮下。
接种后的荷瘤小鼠随机分为 7组 , 每组 10只动物。
每组动物在接种后第 2天按剂量给药 , 连续给药
10 d,每 3天称体重 1次。在末次给药后次日处死全
部小鼠 , 取瘤称重。 肿瘤质量为接种瘤株小鼠的后
肢质量。
1. 7　统计分析方法　计算抑瘤率 ,以 t检验方法进
行统计学处理。抑瘤率 (% ) = ( 1-实验组平均瘤
重 /对照组平均瘤重 ) × 100。
2　结　果
2. 1　东北菱提取物对肝癌细胞的抑制作用　不同
浓度受试药物与抑瘤率存在量效关系 , 东北菱提取
物对肝癌细胞有较强的抑制作用 , 结果见表 1。
2. 2　东北菱提取物对小鼠肝癌 H22荷瘤小鼠的抑
制作用　东北菱不同溶剂提取物对肝癌细胞均有抑
制作用 , 抑瘤率接近 60% , 结果见表 2。
Tab. 1　 Inhibito ry effects o f ex tracts fr om Trapa manshurica Fler. on liv e r cance r cells in mice in v itro (n= 10)
Groups
Dose
(g· L- 1 ) Cell mix amoun t cpm(x± s)
Inhibi tory rate
(Z/% )
Con t rol 0 11428. 37± 1287. 05 0
Trapa manshur ica Fler. 3. 52 11355. 25± 643. 35 0. 64
7. 03 10951. 05± 118. 30 4. 17
14. 06 10521. 15± 626. 95 7. 94*
28. 13 8889. 18± 262. 41 22. 22*
56. 25 7952. 33± 399. 19 30. 42*
112. 50 6510. 20± 1025. 38 43. 03*
225. 00 2749. 19± 517. 82 75. 49* *
450. 00 138. 68± 46. 51 98. 79* *
　　* P < 0. 05,* * P < 0. 01 compared wi th cont rol g rou p
Tab. 2　 Inhibito r y effects of ex tr acts from Trapa manshurica Fler. on liv er cancer H22 in mice in vivo (n= 10)
Group
Dose
(g· L- 1 )
Number of mice
before /af ter
experimen t
Tumor w eigh t
(x± s )
(m /g)
Inhibi to ry
rate (Z/% )
Negative cont rol 0 10 /10 0. 50± 0. 12 0
Water ext ract s 24 10 /10 0. 22± 0. 05 56*
12 10 /10 0. 16± 0. 06 68*
Ethanol ext ract s 52. 5 10 /10 0. 18± 0. 08 64*
26. 25 10 /10 0. 19± 0. 07 62*
13. 125 10 /10 0. 25± 0. 05 50*
5-Fu 20. 0 10 /10 0. 14± 0. 03 72*
　　* P < 0. 001 compared w ith negative con trol group
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吉林大学学报 (医学版 )　第 30卷　第 4期　 2004年 7月
3　讨　论
随着我国中药研究的深入 ,中草药治疗肿瘤已
受到人们普遍的关注并取得了很大进展 ,寻找安全
有效的药物是肿瘤治疗或辅助治疗中的重要课题。
近年来 ,植物来源药物研究日益受到重视 [ 4] ,充分利
用我国药用植物资源 ,开发新的抗肿瘤药物已成为
药物研究领域的重要内容。 为了开发我省资源丰富
的中草药 ,本文作者进行了东北菱提取物对肝癌细
胞体内外实验 ,结果表明 ,剂量与抑瘤率存在量效关
系。体内实验表明 ,当剂量为 26. 25 g· kg- 1时 ,抑瘤
率达 60%以上。 比较国内同类研究 (菱果仁对小鼠
肝癌细胞抑瘤率为 36. 0% ) [5 ] ,本实验所用药物有
更强的抑制肿瘤细胞作用 ,说明东北菱提取物对肝
癌细胞有较理想的抑制作用。比较国外同类研究 [6 ] ,
该药物抗瘤谱广 ,抗瘤活性高。
本实验结果表明 ,小鼠体重变化小说明东北菱
提取物毒副作用小 ,符合祖国医学治疗肿瘤“扶正祛
邪”之原则。菱壳抗肿瘤作用的活性成分及机理有待
进一步探讨。
参考文献
[1 ] 李　凡 ,刘永茂 . 基础医学实验教程 [M ]. 北京:高等教育出版
社 , 2002: 78-79.
[ 2] 牛凤兰 ,李晨旭 ,董威严 ,等 . 东北菱中氨基酸和无机元素含量
分析 [ J] .食品科学 , 2001, 22( 3): 84-86.
[ 3] 牛凤兰 ,李晨旭 ,董威严 ,等 . 四种水生植物中无机元素和维生
素 C的研究 [ J] .食品科学 , 2001, 22( 1): 78-79.
[4 ] 牛凤兰 ,董威严 ,李晨旭 ,等 . 益胃颗粒的药效学研究 [ J] . 吉林
大学学报:医学版 , 1993, 8( 2): 194-197.
[5 ] 张延岭 ,桑立红 ,施　强 ,等 . 菱实抗癌活性的研究 [ J] . 山东医
科大学学报 , 1996, 34( 4): 354.
[ 6 ] Itok aw a H, Watanabe K, Mihara K, et al. Screening tes t for
anti tumor activi ty of crud e drugs Ⅱ [ J] . Sh oyakug ak u Zasshi ,
1982, 36( 2): 45-149.
非口腔专业医学生口腔保健知识及保健意识的调查分析
吉林大学口腔医院预防保健科　程　敏
吉林大学口腔医院放射线科　李青山
1　临床资料　
①调查对象: 吉林大学白求恩医学部非口腔专业 (临床医学系、药学系、预防医学系、医药信息系 ) 98级、 99级 (大四、大五 )
医学生。采用整体抽样的方法 ,共发出问卷 400份 ,收回 373份。②调查方法: 采用自行设计问卷 ,内容包括口腔保健意识、口腔
保健用品的选择、口腔保健态度 3方面 ,均为多项选择题 ,每题设 4～ 6个选项 ,事先不进行口腔健康教育或暗示 ,标准答案以
卞金有主编第 3版《口腔预防医学》为准。
2　结　果　
回收有效问卷 373份。 每天刷牙次 1次、 2次和 2次以上分别为 28. 4% 、 52. 3%和 19. 3% ,刷牙者中 75. 1%能采用竖刷
法 ;口腔保健用品选择: 保健牙刷、牙线的使用人数仅占 3. 8%和 12. 06% , 27. 35%的学生喜欢用大头软毛牙刷 ;口腔保健意
识: 42. 6%的医学生发现牙石能正确选择去医院洗牙 ,而牙龈出血者正确选择处置仅为 12. 26%。 40. 6%的人会选择定期进行
口腔检查。 74%的医学生认为开设口腔预防教育非常有必要 ,愿意接受口腔健康教育。
3　讨　论　
①口腔保健意识和行为: 大多数非口腔专业的高年级医学生能坚持每天刷牙 ,其中早晚各刷 1次为 195人 ( 52. 3% ) ,明显
低于牙医学院新生 ( 79. 6% ) ,说明非口腔专业医学生对口腔卫生和刷牙重要性的认识不够。 发现有牙石 , 42. 6%的人会选择
去医院洗牙 ,这一结果说明近年来维护牙周健康、去除牙石必要性的宣传愈来愈广泛 ,已逐渐为大家所认识和接受 ,同时也与
医学生自身素质、文化修养有关。 在选择防龋方法时 ,大部分人了解木糖醇口香糖可以预防龋齿。通过咀嚼口腔糖 ,增加唾液
流量 ,冲刷牙面 ,防止牙菌斑的沉积 ,间接起到了预防龋齿的作用。 但选择使用“饮水氟化”、“窝沟封闭”及“氟涂漆”预防龋齿
的人则寥寥无几 ,说明多数人对氟的用途及窝沟封闭并不了解。 有 273名 ( 73. 7% )医学生知道龋齿和牙周病可以引起身体其
他部位的疾病 ,但另外 26. 3%的人仍不太清楚。 ②口腔健康用品选择: 只有 3. 8%的人选小头软毛牙刷 ,相当一部分人选用大
头软毛牙刷 ,说明他们对口腔保健用品了解不够全面 ,只知道软毛却忽略了小头。牙线是清除邻面菌斑最好的清洁工具 ,只有
12. 06% 的人经常或偶尔使用牙线 ,而另有 135人 ( 36. 19% )想使用 ,但不知去什么地方购买 ,还有 185人 ( 49. 60% )根本不想
使用牙线 ,可见我国的口腔保健用品市场亟待开发 ,牙线的宣传力度不够 ,使用也尚未普及 ,更多的人选用牙签作为清洁牙齿
的工具 ,这是不正确的。③口腔保健态度: 调查中发现大多数的医学生有良好的口腔保健愿望 , 74%的人认为开设口腔健康教
育课很有必要并有极高的兴趣 ,希望能够得到最基本的口腔保健常识。 可以肯定 ,医学院的高年级医学生对口腔知识有最基
本的了解 ,不仅可以提高他们个人的口腔健康水平 ,同时会指导、服务、应用于社会 ,利于维护全民健康。
(吉林 长春 130052)
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牛凤兰 ,等 .　东北菱提取物对肝癌细胞的体内外抑制作用