全 文 ：　　［文章编号］　１６７１－５８７Ⅹ（２０１５）０２－０４２０－０５　 ＤＯＩ：１０．１３４８１／ｊ．１６７１－５８７ｘ．２０１５０２４３
［收稿日期］　２０１４－１１－０７
［基金项目］　国家重点基础研究发展计划 （９７３计划）项目资助课题 （２０１１ＣＢ９３５８００）；吉林省科技厅重点项目资助课题
（２００７０４２４）
［作者简介］　刘　阳 （１９９１－），女，吉林省四平市人，在读医学硕士，主要从事天然活性产物与健康方面的研究。
［通信作者］　牛凤兰，教授，博士研究生导师 （Ｔｅｌ：０４３１－８５６１９４４１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｌｕｎｉｕ＠１６３．ｃｏｍ）
东北菱粗多糖的提取和纯化方法的评价
刘　阳１，张　岩２，谢文兵３，伍翔群１，郭　建１，迪拉热·力迪甫１，牛凤兰１
（１．吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室，吉林 长春１３００２１；２．吉林大学第一医院耳鼻咽喉－头颈外科，
吉林 长春１３００２１；３．中国科学院长春应用化学研究所 国家电化学和光谱研究分析中心，吉林 长春１３００２１）
［摘　要］　目的：研究提取东北菱多糖的最佳溶剂，比较４种多糖纯化方法对东北菱粗多糖的纯化效果。
方法：将东北菱粗提物分为３份，分别用甲醇、乙醇和丙酮作为溶剂提取粗多糖。分别采用Ｓｅｖａｇ法、三氯乙酸
法、盐酸法和活性炭法对东北菱粗多糖进行脱蛋白处理。用比色法检测东北菱提取物中多糖水平和纯化后样品
中多糖水平和蛋白质水平，比较纯化效果。结果：３种提取物中，以丙酮为溶剂的东北菱提取物中多糖水平最
高，为３３．６９％ ，蛋白质水平为５．５１％。经Ｓｅｖａｇ法、三氯乙酸法、盐酸法和活性炭法处理后的溶液中多糖水
平分别为 ４６．５３％、４３．４４％、４１．２４％ 和 ３６．６６％；蛋白水平分别为 ５．６４％、５．４１％ 、５．４１％ 和 ５．５１％。
结论：丙酮为提取东北菱粗多糖的最佳溶剂。４种纯化方法各有优缺点，Ｓｅｖａｇ法对于多糖水平的提高效果明
显，适合东北菱粗多糖的提取。
［关键词］　东北菱；提取；纯化；多糖；蛋白质
［中图分类号］　Ｒ２８４．２　　 ［文献标志码］　Ａ
Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｗ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ
ＬＩＵ　Ｙａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｙａｎ２，ＸＩＥ　Ｗｅｎｂｉｎｇ３，ＷＵ　Ｘｉａｎｇｑｕｎ１，ＧＵＯ　Ｊｉａｎ１，ＤＩＬＡＲＥ·Ｌｉｄｉｆｕ１，ＮＩＵ　Ｆｅｎｇｌａｎ１
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００２１，
Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｔｏｒｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｈｅａｄ －Ｎｅｃｋ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｆｉｒｓｔ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００２１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００２１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ　ｓｅｌｅｃｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｗ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ，
ａｎｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　４ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｒａｗ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ｔｈｅ　ｒａｗ
ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｐａｒｔｓ．Ｔｈｅ　ｒａｗ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ
ｃｈｅｓｔｎｕｔ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈａｎｏｌ，ｅｔｈａｎｏｌ，ａｎｄ　ａｃｅｔｏｎｅ．Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ－ｃｈｅｓｔｎｕｔ　ｗａｓ
ｄｅｐｒｏｔｅｉｎｉｚｅｄ　ｂｙ　Ｓｅｖａｇ，ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ，ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ，ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ　 Ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ－ｃｈｅｓｔｎｕｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ａｃｅｔｏｎｅ　ａｓ　ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ；ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗａｓ　３３．６９％ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　５．５１％．Ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ
Ｓｅｖａｇ，ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ，ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ，ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ，ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　４６．５３％，
４３．４４％，４１．２４％，ａｎｄ　３６．６６％；ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｅｒｅ　５．６４％，５．４１％ ，５．４１％，ａｎｄ　５．５１％，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　 Ａｃｅｔｏｎｅ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｗ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｆ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ
０２４
第４１卷　第２期
２０１５年３月
吉　林　大　学　学　报　（医　学　版 ）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．４１ Ｎｏ．２　
Ｍａｒ．２０１５
ｃｈｅｓｔｎｕｔ．Ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｈａｖｅ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ａｎｄ　ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｌｅｖｅｌ　ｉｓ
ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｓｅｖａｇ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｉｔ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｗ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　ｗａｔｅｒ－ｃｈｅｓｔｎｕｔ；ｅｘｔｒａｃｔ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｐｒｏｔｅｉｎ
　　东北菱性味甘凉，清暑解热，益气健脾［１］，富
含蛋白质、维生素、氨基酸和多糖等多种活性成
分［２］，具有广泛的食用价值和药用价值［３］。比较国
外同类研究，东北菱提取物有更强的抑制肝癌细胞
和肺癌细胞生长的作用及更强的抗氧化能力［４－７］。
菱角粗多糖具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞
凋亡的作用及较强的清除自由基的能力［８－９］。这类
药食同用植物多糖无细胞毒性，已成为当前研究的
热点。本实验用甲醇、乙醇和丙酮３种溶剂对东北
菱进行提取，探讨最佳提取溶剂。在多糖提取液
中，蛋白质占的比例很大，如何去除粗多糖中的蛋
白质，一直是多糖分离纯化的一个难题。本实验采
用Ｓｅｖａｇ法、三氯乙酸法、盐酸法和活性炭法４种
传统方法［１０］对菱角粗多糖进行纯化，对纯化效果
进行比较，为菱角粗多糖活性的深入研究提供实验
依据。
１　材料与方法
１．１　主要试剂和仪器　
本研究所用东北菱采集于吉林省大安县，经吉
林农业大学樊绍钵教授鉴定是水生草本植物菱的果
实。东北菱粗提物由本实验室制备；苯酚 （吉林亚
泰生物药业有限公司，配置成５％苯酚溶液），活
性炭 （天津永大化学试剂开发中心），氯仿、正丁
醇、三氯乙酸、盐酸、标准葡萄糖、浓硫酸、磷
酸、甲醇、乙醇和丙酮 （均为分析纯，北京化工
厂），标准牛血清蛋白 （北京鼎同生物技术责任有
限公司），考马斯亮蓝Ｇ－２５０ （中国医药集团上海
化学试剂公司）。ＰＥ　Ｌａｍｂｄａ　９００紫外可见分光光
度计 （美国ＰＥ公司），电子天平 （赛多利斯科学
仪器有限公司），ＨＨ－１数显恒温水浴锅 （金坛市
江南仪器厂），ＤＺＦ－６０５０真空干燥箱 （上海一恒科
技有限公司），ＴＤＬ－４０Ｂ离心机 （上海安亭科学仪
器厂），超声波清洗机 （宁波新芝生物科技股份有
限公司），旋转蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂）。
１．２　东北菱粗多糖的提取　
１．２．１　东北菱甲醇、乙醇和丙酮提取物的制备　
精确称取东北菱粗提物２０．００ｇ置于５００ｍＬ锥形
瓶中，分别用７０％甲醇、乙醇和丙酮２００ｍＬ为提
取溶剂进行提取，４０℃加热回流提取４ｈ，提取液
过滤，旋转蒸发，冷冻干燥，低温低压条件下将所
得滤液置于１００ｍＬ容量瓶中，定容至刻度，即得
东北菱的甲醇、乙醇和丙酮提取物，４℃冰箱保存
待用。
１．２．２　苯酚－硫酸法测定多糖水平　精密称取
１００ｍｇ干燥至恒重的葡萄糖对照品置于１００ｍＬ容
量瓶中，蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。使用时
稀释１０倍，即得质量浓度为１００ｍｇ·Ｌ－１标准葡
萄糖对照溶液。精确吸取标准葡萄糖溶液 ０、
０．２０、０．４０、０．６０、０．８０和１．００ｍＬ置于１０ｍＬ
具塞试管中，加蒸馏水补充至２．００ｍＬ，依次加入
５％ 苯酚溶液１．６０ｍＬ，浓硫酸５ｍＬ，混合均匀，
恒温水浴箱中沸水浴３０ｍｉｎ，冷却后，在波长
４９０ｎｍ处测溶液吸光度 （Ａ）值，以标准葡萄糖
溶液质量浓度为横坐标，Ａ值为纵坐标，建立标准
曲线。见图１。
图１　葡萄糖标准曲线
Ｆｉｇ．１　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ
　　标准曲线符合线性关系，将测得的各样品Ａ值
代入回归方程Ｙ＝０．００４　９Ｘ－０．０５１　２，即可得样
品中多糖水平。
样品中多糖水平的测定：精密称取各东北菱提
取物１００ｍｇ置于１００ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水定
容至刻度，用时稀释 １０ 倍，得到质量浓度为
１００ｍｇ·Ｌ－１的提取物溶液，备用。精确吸取各提
取物溶液２ｍＬ，依次加入５％ 苯酚溶液１．６０ｍＬ，
浓硫酸５ｍＬ。摇匀，沸水浴３０ｍｉｎ，冷却后测溶
液的Ａ４９０值，计算多糖水平。多糖水平＝Ａ４９０值对
应多糖的水平／样品的质量×１００％。
１２４刘　阳，等 ．　东北菱粗多糖的提取和纯化方法的评价
１．２．３　加样回收法测样本回收率　精密称取已知
多糖水平的提取物样品溶液，吸取５份，每份
１．４８ｍＬ，分别加入０．２０、０．３０、０．４０和０．５０ｍＬ
标准葡萄糖对照品溶液，测定 Ａ４９０值，计算回收
率，考察方法的准确度。回收率＝ （测得Ａ４９０值－
样品中被测成分原本Ａ４９０值）／加入标准品Ａ４９０值×
１００％。
１．３　东北菱粗多糖纯化方法的比较　
将多糖水平最高的提取物用以下４种方法进行
纯化。
１．３．１　Ｓｅｖａｇ法　精确称取１．００ｇ东北菱提取物
样品，配制成质量浓度为２０ｇ·Ｌ－１的样品溶液。
按氯仿∶正丁醇＝４∶１的比例配制Ｓｅｖａｇ溶液
１０ｍＬ，与 ５０ ｍＬ 样 品 溶 液 混 合，充 分 震 荡
３０ｍｉｎ，置 于 分 液 漏 斗 内 静 止 １ ｈ，上 层 液
４　０００ｒ·ｍｉｎ－１ 离心１０ｍｉｎ，留取上清液，重复上
述步骤５次。
１．３．２　三氯乙酸法　精确称取１．００ｇ东北菱提取
物样品，配制成质量浓度为２０ｇ·Ｌ－１的样品溶
液。取５０ｍＬ 样品溶液，加入１０％ 三氯乙酸溶
液，调至ｐＨ＝３，充分混匀，静置过夜。次日将
溶液移入离心管内，４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，
弃去沉淀，保留上清液，以待测定。
１．３．３　盐酸法　精确称取１．００ｇ东北菱提取物样
品，配制成质量浓度为２０ｇ·Ｌ－１的样品溶液。取
５０ｍＬ样品溶液，缓慢加入一定体积２ｍｏｌ·Ｌ－１
盐酸，使溶液ｐＨ＝３。混合均匀，静置过夜，次
日４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，弃去沉淀，保留上
清液。
１．３．４　活性炭法　精确称取１．００ｇ东北菱粗多糖
样品，配制成质量浓度为２０ｇ·Ｌ－１的样品溶液。
取２０ｍＬ样品溶液加入１．００ｇ活性炭粉末，充分
混匀，５０℃恒温水浴２ｈ，４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心
１０ｍｉｎ。去除活性炭残渣，保留上清液。
１．３．５　多糖水平的测定 　经４种方法纯化后的多
糖溶液按照１．２．２方法测定多糖水平。
１．３．６　蛋白质水平的测定　考马斯亮蓝 Ｇ－２５０溶
液配制：精密称取考马斯亮蓝Ｇ－２５０　１０．００ｍｇ置
于１００ｍＬ 容量瓶中，依次加入９５％无水乙醇
５ｍＬ，８５％ 磷酸１０ｍＬ，混合均匀，加蒸馏水定
容至刻度，避光备用。标准曲线：精确称取牛血清
蛋白标准品１．００ｍｇ至容量瓶中，加蒸馏水定容
至１０ｍＬ，溶液质量浓度为１ｇ·Ｌ－１。精确量取
标准牛血清白蛋白溶液０．００、０．２０、０．４０、０．６０、
０．８０和１．００ｍＬ 置于具塞试管中，补蒸馏水至
１．００ｍＬ，加考马斯亮蓝 Ｇ－２５０溶液５ｍＬ，立即
混合均匀，于５９５ｎｍ波长处测定Ａ值。以牛血清
蛋白标准品质量浓度为横坐标，Ａ５９５值为纵坐标建
立标准曲线。见图２。
．
图２　牛血清蛋白标准曲线
Ｆｉｇ．２　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ
　　样品中蛋白质水平的测定：精密吸取上述４种
方法处理后得到的提取物溶液各１ｍＬ，分别加考
马斯亮蓝 Ｇ－２５０溶液５ｍＬ，以空白试剂为参比，
于５９５ｎｍ波长处分别测定 Ａ５９５值，依标准曲线计
算样品浓度及蛋白水平。蛋白水平＝Ａ５９５值对应的
蛋白水平／样品的质量×１００％。
２　结　果
２．１　东北菱提取物中多糖水平　
以甲醇、乙醇和丙酮为溶剂的东北菱提取物中
多糖水平分别为２９．６８％、１８．７７％和３３．６９％，以
丙酮为溶剂的东北菱提取物中多糖水平最高，故以
下实验均以该提取物为样品。对以丙酮为溶剂的东
北菱提取物进行回收率测定，结果见表１。
表１　东北菱粗多糖的回收率
Ｔａｂ．１　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｒａｗ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｆ　ｎｏｒｔｈｅａｓｔ
ｗａｔｅｒ　ｃｈｅｓｔｎｕｔ
Ｏｒｉｇｉｎａｌ
　ｖａｌｕｅ
（ｍ／μｇ）
Ｓｐｉｋｅｄ
ｖａｌｕｅ
（ｍ／μｇ）
Ｍｅａｓｕｒｅｄ
ｖａｌｕｅ
（ｍ／μｇ）
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ
（η／％）
Ａｖｅｒａｇｅ
ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ（η／％）
４９．８６　 ２０　 ７０．６９　 １０４．１５
４９．８６　 ３０　 ８０．０５　 １００．６３　 １０１．３６
４９．８６　 ４０　 ８９．９２　 １００．１５
４９．８６　 ５０　 １００．１２　 １００．５２
　　
２２４ 吉林大学学报 （医学版）　第４１卷　第２期　２０１５年３月
２．２　不同方法纯化后东北菱多糖水平　
经Ｓｅｖａｇ法、三氯乙酸法、盐酸法和活性炭法
处理后的东北菱提取物溶液中Ａ４９０值对应的多糖水
平 依 次 为 ９３．０５９、 ８６．８７５、 ８２．４８２ 和
７３．３１５ｍｇ·Ｌ－１，计算得各东北菱提取物溶液中
多糖 水 平 所 占 比 依 次 为 ４６．５３％、４３．４４％、
４１．２４％和３６．６６％。经４种方法处理后的溶液中
多糖水平均高于东北菱提取物溶液中多糖水平。这
４种方法对菱角粗多糖纯化均有较好的效果，其纯
化效果顺序为Ｓｅｖａｇ法＞三氯乙酸法＞盐酸法＞活
性炭法。
２．３　不同方法纯化后东北菱提取液中蛋白质水平
东北菱提取液中蛋白质水平为５．５１％，经
Ｓｅｖａｇ法、三氯乙酸法、盐酸法和活性炭法处理后
的东北菱提取物溶液中Ａ５９５值对应的蛋白质水平依
次为５６．３５３、５４．１２５、５４．０７１和５５．０６８ｍｇ·Ｌ－１，
计算得各东北菱提取物溶液中蛋白质水平占比依次
为５．６４％、５．４１％、５．４１％和５．５１％。经４种方
法处理后的东北菱提取溶液中平均蛋白质水平占比
均约为５％，总体变化不大。
３　讨　论
东北菱多糖为东北菱中的天然活性成分，为水
溶性。在醇、酮等极性强的溶剂中的溶解度较低，
因此向溶解了大量多糖的水溶液中加入醇溶剂可使
多糖沉淀［１１－１２］。
本实验用甲醇、乙醇和丙酮３种溶液作为溶剂
提取东北菱粗多糖，比较３种提取物中多糖水平，
结果显示：以丙酮为溶剂的提取物中多糖水平最
高，这与３种溶剂的极性强弱有关联。
多糖的测定方法有苯酚－硫酸法和蒽酮－硫酸
法［１３］。范传颖等［１４］对２种方法进行比较，发现苯
酚－硫酸法灵敏度高且不受蛋白质存在的影响，测
定结果更为准确合理。因此，本实验采用苯酚－硫
酸法检测东北菱提取物中多糖水平。
本研究比较了Ｓｅｖａｇ法、三氯乙酸法、盐酸法
和活性炭法４种传统方法的多糖纯化效果，结果显
示：４种方法对东北菱粗多糖的纯化均有较好效
果，顺序为Ｓｅｖａｇ法＞三氯乙酸法＞盐酸法＞活性
炭法。Ｓｅｖａｇ法操作条件温和，对糖链破坏较小，
且所用试剂常规、廉价，适合东北菱粗多糖的提
取；三氯乙酸法和盐酸法纯化粗多糖效果均不如
Ｓｅｖａｇ法；盐酸法中盐酸为强酸，若不严格控制实
验条件，经盐酸法脱蛋白后，会降解部分多糖，粗
多糖的提取过程中，容易发生氧化反应生成有色色
素，从而影响多糖性质；活性炭法是常用的脱色素
方法，同时也有吸附蛋白的作用。中草药中的多糖
因含有酚型化合物而颜色较深，其中的色素大多呈
负性离子，导致活性炭吸附剂脱色效果不明显，且
纯化过程中损失多糖较多。
郭育东等［１５－１７］对苦瓜多糖的脱蛋白质方法进行
比较结果显示：无论哪种脱蛋白质方法所得的多糖
制品中均存在一部分蛋白质不能被脱掉。
本研究结果显示：４种方法处理后样品中均有
约５％的蛋白质成分，与郭育东等［１５］的研究结果一
致，说明东北菱中蛋白质的存在形式可能是糖蛋白
或糖肽，单纯靠这４种传统方法不能使其脱除，如
果要获得更为纯化的多糖制品，还需要经过其他一
系列的精细分离纯化工艺。
从多糖的生物学功能与其结构的关系来看，东
北菱多糖的糖蛋白结构对生物体内的生物活性功能
发挥重要作用仍有待于深入研究。
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４２４ 吉林大学学报 （医学版）　第４１卷　第２期　２０１５年３月