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藏药材杉叶藻质量标准研究



全 文 :48 • 实验研究 • March 2011, Vol.9, No.7 Guide of China Medicine
藏药材杉叶藻质量标准研究
普 珍 王聚乐 袁瑞瑛*
(西藏大学医学院,西藏 拉萨 850002)
【摘要】目的 建立藏药材杉叶藻的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法与显微鉴别法。结果 采用薄层色谱法与显微鉴别法对不同产地的
藏药材杉叶藻进行定性鉴别,表明不同产地的藏药材杉叶藻特征一致,不同产地藏药材杉叶藻薄层色谱重现性好,专属性强。结论 所建
立的定性鉴别法可作为控制传统藏药材杉叶藻内在质量的标准。
【关键词】杉叶藻;薄层色谱法;显微鉴别法;质量标准
中图分类号:R931.5 文献标识码:B 文章编号:1671-8194(2011)07-0048-03
藏药是我国传统药学的一个重要组成部分,在青藏高原地区有着
雄厚的应用基础和悠久的历史。目前许多藏药材质量标准停留在经验
鉴别及简单的理化鉴别阶段,尤其是地方质量标准未能很好控制藏
药材质量标准。藏药材杉叶藻在藏医药典著《四部医典》、《晶珠本
草》中原药材的功能及形态叙述较为详实,即具有清热、舒肝利肺,
主治肺痨咳嗽、痨热骨热、肝痛、心痛[1,2]等的作用。该药材质量控制
方面仅有经验认别及外观鉴别法,没有系统的质量分析与鉴别法,不
能有效控制其质量。因此,为了更加完善藏药材杉叶藻的质量标准,
本文综合利用传统方法和现代分析技术(采用薄层色谱法与显微鉴别
法)对该药材进行定性鉴别,并建立了控制传统藏药材杉叶藻内在质
量的标准。
1 仪器与试药
1.1 仪器
FA2004B电子天平(上海精密科学仪器有限公司)、恒温水浴锅
(上海科析实验仪器厂)、KH-250DE数控超声波浸洗器(昆山禾创
超声仪器有限公司)、JP2FⅠ-Ⅱ型紫外分析仪(上海嘉明马科技有
限公司)、GND-硅胶G板(青岛高能达化工有限公司)。RE-52A旋
转蒸发器 (上海精科实验有限公司)、Leica HL1220烘干器、Leica
RM2135切片机、Leica HL1210展开器、OLYMPUS-BX51高级荧光显
微镜。
1.2 试药
乙醚(批号20060511,天津市博迪化工有限公司)、石油醚(批
号20040402,天津市化学试剂六厂三分厂)、甲醇(批号20080414,
天津市博迪化工有限公司)、无水乙醇(批号20060516,天津市博迪
化工有限公司)、乙酸乙酯(批号20041109,天津市德才工贸有限公
司)、甲酸(天津市化学试剂厂)、氯仿(批号20030327,天津市福
晨化学试剂厂)、二甲苯(天津市博迪化工有限公司)、冰醋酸(天
津市博迪化工有限公司)、氨水(荥阳市黄河化工试剂厂) 、梓醇苷
对照品(中国药品生物制品检定所)。杉叶藻全草,采自拉鲁湿地、
林芝和巴松措,并经西藏自治区藏医院专家鉴定为杉叶藻药材。
1.3 溶液的配制
0.1%茚三酮乙醇溶液(称0.1390g茚三酮加50mL乙醇),氨性硝
酸银溶液(称取硝酸银1.3504g+20mL水,滴加适量氨水)、甘油酒
精(50%甘油+50%酒精)、FAA固定液(50%酒精90mL+醋酸5mL+
福尔马林5mL)、番红染色剂(番红粉末1g溶于5%酒精100 mL)、
固绿染色剂(固绿粉末0.5g+95%酒精100mL)、5%香草醛硫酸溶液
(取香草醛0.506g+浓硫酸50mL),10%硫酸乙醇溶液(10mL硫酸
+90mL乙醇)。
2 方 法
2.1 性状鉴别[3-7]
据实物描写(颜色、外形、气味等)。
2.2 薄层色谱鉴别[8]
2.2.1 对照品溶液的制备
取适量梓醇苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对
照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
称取拉鲁湿地产杉叶藻粉末2.0100g,加乙醚20mL回流提取至
无色,滤过,残渣用乙醇20mL超声提取0.5h(温度35℃,超声频率
70Hz),滤过,制得供试品A。
称取林芝产杉叶藻粉末1.0620g,加甲醇20mL浸泡15h,过滤,蒸
干0.5h,加石油醚(60~90℃)1mL,作为供试品B。
称取巴松措杉产叶藻粉末1.0179g,加甲醇20mL超声处理20min
(温度35℃,超声频率50Hz),滤过,滤液蒸干,加石油醚1mL作为
供试品C。
照薄层色谱法[6]试验,吸取上述3种供试品溶液及对照品溶液各
5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)
为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热
至斑点显色清晰,置紫外灯(365nm)下检视。
2.3 理化鉴别法
取本品粉末0.4709g加10mL水浸泡,过夜,滤液浓缩至5mL,取2滴点
于圆形普通滤纸上,用甲醇展开,喷0.1%茚三酮乙醇溶液,观察颜色。
取本品粉末0.5490g加20mL水,水浴加热5min,滤过,吸取4mL
溶液加2mL氨性硝酸银溶液,在水浴上加热,并观察颜色。
取本品粗粉0.5594g加10mL甲醇水浴加热2~3min,滤过,滤液蒸
干后残留物加4mL冰醋酸,加热2min滤过、冷却后在滤液中缓缓加入
1mL浓硫酸,观察颜色。
2.4 显微鉴别法[9]
2.4.1 粉末鉴别
取微量杉叶藻粉末置于载玻片上,滴加2~3滴甘油酒精,混匀,
经水合氯醛透化,显微镜下观察拍照。
2.4.2 横切面鉴别
杉叶藻依次进行固定→脱水→透蜡→脱蜡→染色。将药材切成*通讯作者:E-mail:1yuan2yuan@163.com
DOI:10.15912/j.cnki.gocm.2011.07.020
• 实验研究 • 492011 年 3 月第 9 卷 第 7 期 中 国 医 药 指 南
1cm的小段在FAA固定液中固定24h;分别在70%、80%、90%酒精中
各浸泡1h,纯酒精Ⅰ,纯酒精Ⅱ中各浸泡脱水0.5h;分别用纯酒精-
二甲苯(1∶1)溶液浸泡1h,二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡0.5h,50℃
石蜡中浸泡过夜,使组织透蜡并包埋;石蜡固定药材→切片→展开→
烘干;分别在二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、纯酒精-二甲苯(1∶1)溶液、
无水乙醇、90%、80%、70%、50%、30%酒精及dH2O浸泡5min,以
组织脱蜡;1%番红染色1h,蒸馏水冲洗后分别用50%、70%、80%、
90%、95%酒精浸泡10min,1%固绿染色25min后依次在95%酒精、纯
酒精、纯酒精-二甲苯(1∶1)溶液二甲苯浸泡冲洗5min,显微镜下
观察拍照。
3 结 果
3.1 性状鉴别
本品为干燥全草。根茎圆柱形,根黄褐色,节上须根成簇,多
数,细弱。茎圆柱形,有细纵沟纹,直径1.5~5mm。节部膨大,节和节
间明显。质轻、松。茎和根茎折断面呈蜂窝状,具黄色的髓部。叶常
4~12枚轮生于茎节上,叶片皱缩成团,完整的叶片展开后呈条形,长
6~12mm。果实小,褐色,椭圆形,易脱落、气芳香,味甘(图1)。
3.2 薄层色谱鉴别
实验结果表明,供试品A经氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)展开,展
开得到的薄层色谱图分离度较好。将不同产地杉叶藻平行条件下进行
薄层色谱,结果如图2所示。
3.3 理化鉴别(图3)
3.3.1 取2滴杉叶藻水浸泡的滤液滴在滤纸上,用甲醇展开,喷0.1%茚
三酮溶液后显紫红色斑点,说明其含多糖。
3.3.2 杉叶藻水提物中加2滴氨性硝酸银溶液,水浴加热产生红褐色沉
淀,说明其含萜苷类。
3.3.3 杉叶藻甲醇提取物的滤液蒸干,加4mL冰醋酸溶液,再加1mL浓
硫酸,界面显棕褐色,说明其含梓果次苷。
3.3.4 原药材粉末水提液显深绿色(进行对照)。
3.4 显微鉴别
本品粉末暗绿色。纤维成束或散在,多碎断,直径13~31μm;螺
纹导管直径23~31μm;梯纹导管直径12~25μm;茎或根茎表皮细胞
表面观呈多角形,直径60~150μm;横断面近方形,直径60~90μm;
内皮层细胞凯氏带明显;髓薄壁细胞多角形,直径50~100μm。叶表
皮细胞长方形,气孔多见;偶见腺鳞,直径90~125μm。少见纤维状
长毛。结果见图4。
本品根茎横切面木质部茎表皮由1列近方形细胞组成,外壁增
厚。外皮层细胞2列, 方形,内含叶绿体。通气薄壁组织较发达,由
薄壁细胞相互联结,形成蜂窝状的通气管道、中柱鞘薄壁细胞呈椭圆
形,维管束呈外韧型,韧皮部成环状。髓部薄壁细胞为多角形。根茎
横切面外皮层细胞1列,类圆形,不含叶绿体;通气薄壁组织比茎的
发达;内皮层细胞凯氏点明显。结果见图5。
4 讨 论
通过对不同产地(拉鲁湿地、林芝、巴松措)藏药材杉叶藻进行
性状鉴别、薄层色谱鉴别、理化鉴别、显微鉴别,结果该药材的性
状、显微结构、理化鉴别都没有显著的区别。
杉叶藻的根、茎、叶的内部结构中均有发达的通气组织,这是适
图1 杉叶藻药材图
图2 薄层色谱图
1 2 3 4
图3 理化鉴别图
50 • 实验研究 • March 2011, Vol.9, No.7 Guide of China Medicine
应水中生存环境而形成的,水中缺少氧气,而发达的通气组织可贮存
光合作用放出的氧气和呼吸作用放出的二氧化碳,成了氧气和二氧化
图4 粉末鉴别图
碳的“贮库”。杉叶藻的表皮细胞结构很明显,叶片栅栏组织分化
弱,叶肉组织介于两面叶和等面叶之间。这些特征可作为杉叶藻的鉴
别特征。
杉叶藻中含有环烯醚萜苷,其中包括桃叶珊瑚苷,梓醇苷;另外
还含有马鞭草新苷。因其药用研究较少,拟以梓醇苷为对照品,建立
薄层色谱鉴别。对展开系统进行了考察:①以正丁醇-醋酸-水(8∶
2∶3)。②乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(20∶5∶1∶4)作为展开剂时,
由于展开剂的极性太强结果不太理想。③以石油醚—醋酸乙酯—乙酸
(9∶4∶0.5)。④二甲苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂时,A供试品
与B、C供试品斑点不在同一条线上,梓醇苷对照品斑点也不清晰。
⑤以氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)为展开剂,置紫外灯(365nm)下观
察供试品色谱,在与梓醇苷对照品相应的位置上显相同的荧光斑点,
说明氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)配比比较合理,展开得到的薄层色谱
图分离效果较为满意,专一性强、稳定性和重现性较好,能为杉叶藻
的质量控制提供依据。
参考文献
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189-190.
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[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典中药材薄层色谱彩色图
集[M].北京:人民出版社,2009.
[9] 国家药典委员会编著.中华人民共和国药典中药材显微鉴别彩
色图鉴[M].北京:人民出版社,2009.
图5 根茎横切面图
生精浓缩丸的质量标准研究
惠秋沙
(山东中医药大学,山东 济南 250355)
【摘要】目的 对生精浓缩丸进行质量标准研究。方法 采用薄层色谱法(TLC)对处方中的枸杞子、淫羊藿、骨碎补和补骨脂进行定性鉴别;
采用高效液相色谱法(HPLC)对补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素进行含量测定。结果 在薄层色谱中均可检出枸杞子、淫羊藿、骨碎补
和补骨脂的特征斑点;补骨脂素和异补骨脂素分别在 0.0240~0.2160μg(r=0.9998)和 0.0401~0.3208μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,
回收率分别为 97.44%(RSD=1.23%,n=6)和 98.24%(RSD=1.14%,n=6)。结论 本质控方法简便可行、重复性好,能有效控制该制剂的质量。
【关键词】生精浓缩丸;质量标准;补骨脂素;异补骨脂素;高效液相色谱法;TLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1671-8194(2011)07-0050-03
生精浓缩丸为本课题组开发的八类中药新药,由鹿茸、枸杞子、
人参、冬虫夏草、菟丝子、黄精、杜仲、补骨脂、沙苑子、淫羊藿、
何首乌、桑椹、骨碎补、仙茅、金樱子、覆盆子、大血藤、马鞭草和
银杏叶等19味中药加工而成,具有补肾益精,滋阴壮阳之功效。为有
效控制产品质量,充分保证其临床疗效,特对制剂的质量标准进行了
详细研究,采用TLC对枸杞子等4味进行定性鉴别,采用高效液相色
谱法(HPLC)对方中补骨脂素和异补骨脂素进行含量测定。
1 仪器与试药