全 文 ：　 　２０１１，Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．１２化学与生物工程
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
９２
基金项目：仲恺农业工程学院校级科研基金资助项目（Ｇ３１０００３２）
收稿日期：２０１１－０９－２２
作者简介：凌育赵（１９６７－），男，广东平远人，高级实验师，从事天然产物化学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｎｇｙｕｚｈａｏ＠ｚｈｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－５４２５．２０１１．１２．０２６
红外光谱法测定虎舌红提取物中的总黄酮
凌育赵１，刘经亮２
（１．仲恺农业工程学院化学化工学院，广东 广州５１０２２５；２．广东食品药品职业学院，广东 广州５１０５２０）
摘　要：采用索氏回流法及溶剂萃取法成功地提取了虎舌红中的总黄酮，并对其结构进行了鉴定，采用红外光谱法
对提取物中总黄酮的含量进行了测定。结果表明，虎舌红提取物中总黄酮含量为１９．４７ｍｇ·ｇ－１，与紫外可见分光光度
法测定结果基本一致；相对标准偏差（ＲＳＤ）为 ２．０９％（ｎ＝６），加标回收率为９３．５４％～１０４．３５％，平均回收率为
９８．７２％。
关键词：虎舌红；黄酮类化合物；红外光谱
中图分类号：Ｏ　６５７．３３　Ｒ　２８４．１　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－５４２５（２０１１）１２－００９２－０３
　　虎舌红（Ａｒｄｉｓｉａ　ｍａｍｉｌｌａｔａ），又名红毛毡、宝鼎
红、天仙红衣、毛凉伞、金丝红珠等，为紫金牛科紫金牛
属［１］，具有清热利湿、活血止血、去腐生肌等功效，对跌
打损伤、风湿骨痛、肺痨咳嗽、疳积肝炎等均有疗效［２］。
黄酮类化合物是紫金牛属植物的主要活性成分之
一［３］，用于防治皮肤疾病、增强免疫力和预防心血管疾
病等方面［４］，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血脂等广
泛的生物活性与功效［５］。
目前，国内对虎舌红活性成分的研究，主要集中在
挥发油、生物碱及多糖类［６～８］，而对虎舌红黄酮类成分
的研究尚未见相关报道。作者在前期研究的基础上，
采用索氏回流法及溶剂萃取法，成功地提取了虎舌红
中的总黄酮，并以芦丁为标准品，应用红外光谱仪对提
取物中总黄酮的含量进行了测定。
１　实验
１．１　材料、试剂与仪器
虎舌红全草由广东省农科院芳村花卉基地提供，
经仲恺农业工程学院植物研究室鉴定为紫金牛科
（Ｍｙｒｓｉｎａｃｅｓｅ）紫金牛属（Ａｒｄｉｓｉａ）虎舌红。
芦丁标准品，中国药品生物制品检定所；溴化钾、
盐酸、乙醇、石油醚、乙酸乙酯、镁粉等，均为分析纯。
ＩＲＰｒｅｓｔｉｇｅ２１型傅立叶变换红外光谱仪，美国
ＮＩＣＯＬＥＴ公司；７５２Ｃ型紫外可见分光光度计，上海
第三分析仪器厂；ＫＱ３２００ＤＥ型数控超声波清洗器，
苏州江东精密仪器有限公司；ＦＡ－１００４型电子天平，上
海精密科学仪器有限公司；ＲＥ－５２型旋转蒸发仪，上海
亚荣公司。
１．２　虎舌红总黄酮的提取与鉴定
１．２．１　虎舌红总黄酮的提取
称取粉碎过筛的虎舌红粉末２０．０ｇ，置于烧瓶中，
加入８ＢＶ　７５％（体积分数，下同）的乙醇，于８０℃下
索氏回流提取５次，每次２．５ｈ。抽滤，收集滤液，减压
回收乙醇溶剂，挥干，浓缩得浸膏０．４５ｇ。用适量热水
溶解浸膏，趁热过滤除去不溶物，然后加入１／３体积的
石油醚（脱脂，并除去部分色素），振荡静置分层；弃去
石油醚溶解物，在萃取后的水溶液中加入１／３体积的
乙酸乙酯萃取４次，收集乙酸乙酯相，旋转蒸发仪挥去
溶剂得总黄酮０．３８ｇ，收率１．９０％。
１．２．２　虎舌红总黄酮的鉴定
（１）ＨＣｌ－镁粉反应。取上述提取物少许，置于试
管中，加７５％乙醇２ｍＬ，在水浴中加热溶解，滴加浓
盐酸２滴，再加镁粉约０．５０ｇ，即发生剧烈反应，生成
的泡沫呈明显红色，溶液颜色逐渐由黄色变为橙红色。
据此鉴定提取物为黄酮类物质。
（２）红外光谱鉴定。取烘干后的芦丁少许，加入一
定量的溴化钾，制成固体压片，用傅立叶变换红外光谱
仪在扫描范围４０００～４００ｃｍ－１、分辨率４ｃｍ－１、扫描
次数为４的条件下绘制红外光谱图；同法绘制精制虎
舌红提取物的红外光谱图，对比鉴定。
凌育赵等：红外光谱法测定虎舌红提取物中的总黄酮／２０１１年第１２期 　９３　
２　结果与讨论
２．１　虎舌红总黄酮的红外光谱分析（图１）
Ａ．芦丁标准品　Ｂ．虎舌红提取物
图１　芦丁标准品和虎舌红提取物的红外光谱
Ｆｉｇ．１　ＩＲ　Ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍＡｒｄｉｓｉａ　ｍａｍｉｌｌａｔａ
由图１可知，芦丁标准品和虎舌红提取物的红外
光谱分别在３２９６．９０～３４２５．７８ｃｍ－１左右均出现宽而
强的吸收峰，是－ＯＨ的伸缩振动峰，表明存在酚羟基
或糖上的羟基，且数目较大；在２９７３．３４ｃｍ－１处出现
弱吸收峰，是碳氢键的伸缩振动峰，说明饱和碳上的氢
较少；在１６５５．８０ｃｍ－１、１６６２．１５ｃｍ－１处出现 Ｃ＝Ｏ
的伸缩振动中强峰，两者位置和峰型一样，说明提取物
是黄酮类物质；在１６１４．５０ｃｍ－１、１５０５．８１ｃｍ－１处出
现强吸收峰，是芳环中Ｃ＝Ｃ的伸缩振动吸收峰，也是
黄酮的特征吸收峰；在１０９３．２１ｃｍ－１左右出现较强吸
收峰，是 Ｃ－Ｏ 的伸缩振动峰；在１３５５．６０ｃｍ－１、
１１４３．２５ｃｍ－１处出现羟基的弯曲振动峰；在８０７．２８
ｃｍ－１处出现苯环邻位氢引起的吸收峰；在１０００～６００
ｃｍ－１处出现苯环上取代基位置引起的吸收峰，但峰位
置不同，说明提取物与芦丁的羟基取代位置不同；其它
位置的吸收峰基本一致。这些表明，提取物中含有羟
基、羰基、碳氧单键以及不同位置取代的苯环等官能
团，特征吸收峰一致。因此可确定提取物是黄酮类化
合物。
２．２　紫外可见分光光度法测定虎舌红中总黄酮含量
以芦丁为对照品，采用 ＮａＮＯ２－ＡｌＣｌ３比色法测定
总黄酮含量［６］。
２．２．１　标准曲线的绘制
准确移取４０μｇ·ｍＬ
－１芦丁标准溶液０．００ｍＬ、
２．００ｍＬ、４．００ｍＬ、６．００ｍＬ、８．００ｍＬ、１０．００ｍＬ于
５０ｍＬ容量瓶中，加入０．５０ｍｏｌ·Ｌ－１　ＮａＮＯ２溶液
１．００ｍＬ，摇匀，静置５ ｍｉｎ；加入０．３０ ｍｏｌ·Ｌ－１
ＡｌＣｌ３溶液 １．００ ｍＬ，摇匀；加入 １．００ ｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＯＨ溶液５．００ｍＬ、５０％乙醇定容至刻度，放置１５
ｍｉｎ，于４１０ｎｍ处测定吸光度。以吸光度（Ａ）对浓度
（ｃ）进行线性回归，得回归方程为 Ａ＝０．４２７５ｃ＋
０．０００３，Ｒ＝０．９９８７，芦丁在０．０８０～０．４００ｍｇ·ｍＬ－１
范围内呈良好线性关系。
２．２．２　含量测定
取适量样品溶液，按２．２．１方法测定吸光度，据回
归方程计算得总黄酮含量为１９．５４ｍｇ·ｇ－１。
２．３　红外光谱法测定虎舌红中总黄酮含量
２．３．１　标准曲线与检出限
黄酮类化合物４－位大多数有羰基，这是黄酮类化
合物分子结构特征。红外光谱图中，在 １６６２．１５～
１５０５．８１ｃｍ－１范围内羰基有较强的吸收，其吸收强度
与含量有关，且不易受其它峰的影响，因此选择羰基峰
为定量峰，红外定量峰面积由两侧的峰谷确定。
在定量程序中建立标准品的红外光谱图，以
１６６２．１５～１５０５．８１ｃｍ－１范围内吸光度（Ａ）的面积值
作为定量值，用傅立叶变换红外光谱仪的朗伯－比耳
定量程序建立标准曲线。以芦丁质量（Ｍ，ｍｇ）对峰面
积（Ｓ）进行线性回归，得到：Ｍ＝０．０３５９Ｓ－０．３５４７，相
关系数为０．９８０３。本方法的检出限为０．０４ｍｇ。
２．３．２　含量测定
准确称取样品溶液６份，称取相应的溴化钾使质
量总和在０．０８５０～０．０８６０ｇ之间。按２．３．１方法绘
制红外光谱图，应用朗伯－比耳定量程序计算，结果见
表１。
表１ 红外光谱测定提取物中总黄酮含量
Ｔａｂ．１ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｆｒｏｍＡ．ｍａｍｉｌｌａｔａｂｙ　ＩＲ
样品号
样品量
ｍｇ
测定值
ｍｇ
含量
ｍｇ·ｇ－１
平均含量
ｍｇ·ｇ－１
ＲＳＤ
％
１　 ０．２７　 ０．２３４９　 １９．４８
２　 ０．３１　 ０．２６８９　 １９．５２
３　 ０．２９　 ０．２４８５　 １９．２８
１９．４７　 １．８０
４　 ０．１９　 ０．１６３６　 １９．３７
５　 ０．２５　 ０．２１７０　 １９．５３
６　 ０．２３　 ０．２００７　 １９．６３
由表１可知，提取物中总黄酮的平均含量为
１９．４７ｍｇ·ｇ－１。与紫外可见分光光度法测定结果基
本一致。
２．３．３　吸光系数Ｋ
从红外光谱图上得到样品的吸光度，再根据固体
压片的厚度计算吸光系数Ｋ 为２．３７９×１０３　ｇ·ｃｍ－１。
２．４　加标回收率实验
采用测定标准品（芦丁）和试样加标回收实验方
　 凌育赵等：红外光谱法测定虎舌红提取物中的总黄酮／２０１１年第１２期９４　
法，进行加标回收率实验，结果见表２。
表２ 加标回收率实验结果
Ｔａｂ．２　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗｉｔｈ　ａｄｄｉｎｇ　ｓｔａｎｄａｒｄ
样品号
已知量
ｍｇ
加入量
ｍｇ
测得总量
ｍｇ
回收率
％
平均回收率
％
ＲＳＤ
％
１　 ０．２１５　 ０．１３８　 ０．３６８　 １０４．３５
２　 ０．２６６　 ０．１０６　 ０．３４８　 ９３．５４
３　 ０．２３５　 ０．１３７　 ０．３７６　 １０１．０２
９８．７２　 ２．０９
４　 ０．２５５　 ０．１５６　 ０．４０９　 ９９．６４
５　 ０．２８５　 ０．１４３　 ０．４１１　 ９５．９１
６　 ０．１９５　 ０．１２７　 ０．３０５　 ９７．８５
由表２可知，回收率在９３．５４％～１０４．３５％之间，
平均回收率为９８．７２％；其相对标准偏差（ＲＳＤ）为
２．０９％（ｎ＝６），说明方法精密度高。
３　结论
应用红外光谱法测得虎舌红中的总黄酮含量为
１９．４７ｍｇ·ｇ－１，与紫外可见分光光度法测定结果
（１９．５４ｍｇ·ｇ－１）基本一致。红外光谱法测定虎舌红
中总黄酮含量时吸光系数达到２．３７９×１０３　ｇ·ｃｍ－１，
吸光系数 Ｋ 较小，适合于常量分析，相对标准偏差
（ＲＳＤ）为２．０９％（ｎ＝６），加标回收率为９３．５４％～
１０４．３５％，平均回收率为９８．７２％。该法操作简便、结
果可靠，可用于黄酮类有效成分的质量监控。
参考文献：
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出版社，２０００：６２９．
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验室，２００７，２６（４）：９３－９６．
Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｅｘｔｒａｃｔ
ｏｆ　Ａｒｄｉｓｉａ　Ｍａｍｉｌｌａｔａ　ｂｙ　Ｉｎｆｒａｒｅｄ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ
ＬＩＮＧ　Ｙｕ－ｚｈａｏ１，ＬＩＵ　Ｊｉｎｇ－ｌｉａｎｇ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｏｎｇｋａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２２５，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａｒｄｉｓｉａ　ｍａｍｉｌｌａｔａ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ
Ｓｏｘｈｌｅｔ　ｒｅｆｌｕｘ　ａｎｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ａｒｄｉｓｉａ　ｍａｍｉｌｌａｔａ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＩＲ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　１９．４７ｍｇ·
ｇ－１　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ　ＲＳＤ（ｎ＝６）ｗａｓ　２．０９％，ｒｅ－
ｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗａｓ　９３．５４％～１０４．３５％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９８．７２％．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｒｄｉｓｉａ　ｍａｍｉｌｌａｔａ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＩＲ

）
（上接第９１页）
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｉｇｈ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｂｙ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
ＧＡＯ　Ｘｉａｏ－ｈｏｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｌｉｎ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｈｕａｘｉａ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｗｕｈａｎ　４３０２２３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈａｉｓｏ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｗｕｈａｎ　４３００７４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｗａｓ
ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｔｏ　ｆｏｒｍ　ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃ－
ｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　８．０ｍｇ·Ｌ－１　ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｔ　５７０ｎｍ．Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ　８．０～
１０．０ｍｇ·Ｌ－１ｔｈｅａｎｉｎｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　９．２ｍｇ·Ｌ－１ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｗａｓ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ
０．３％．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｃｒｅｄｉｂｌｅ，ｃｈｅａｐ，ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｔｏ　ａｖｏｉｄ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ｔｈｅ
ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｔｈｅａｎｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｈｅａｎｉｎｅ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ｔｅａ