全 文 ：收稿日期:2012-02-17 接受日期:2012-05-17
基金项目:“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAD27B09)
* 通讯作者 Tel:86-27-87283201;E-mail:sunzhida@mail． hzau． edu． cn
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012，24:61-63，73
文章编号:1001-6880(2012)Suppl-0061-04
糯米香茶中角鲨烯含量的 RP-HPLC测定
杨 婷，孙智达* ，谢笔钧，胡崇琳
华中农业大学食品科学技术学院，武汉 430070
摘 要:建立测定糯米香茶中角鲨烯含量的 RP-HPLC分析方法。采用 DiamonsilTMC18色谱柱，流动相为甲醇 /乙
腈(60 /40，v /v) ，流速 1． 2 mL /min，柱温 40 ℃，检测波长 203 nm。在该条件下角鲨烯标准品和糯米香茶中角鲨
烯分离效果均良好，在 0． 4144 ～ 2． 0720 ug 范围内呈良好线性关系(R2 = 0． 9999)。该方法精密度试验结果
RSD为 1． 146%，角鲨烯平均回收率为 100． 97%，RSD为 2． 32%，供试液稳定性良好，符合 2005 版《中国药典》
要求。
关键词:反相高效液相色谱(RP-HPLC) ;角鲨烯;糯米香茶;含量测定
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
Determination of Squalene of Strobilanthes tonkinesis Lindau by
Reverse-phase High Performance Liquid Chromatography
YANG Ting，SUN Zhi-da* ，XIE Bi-jun，HU Chong-lin
College of Food Science ＆ Technology of Huazhong Agricultrual University，Wuhan 430070，China
Abstract:A high performance liquid chromatography (HPLC)method for determining squalene of Strobilanthes tonkine-
sis Lindau has been studied． The chromatographic condition included a DiamonsilTM C18 column (200 × 4． 6 mm，5 um
particle size)and the mobile phase consisting of methanol /acetonitrile (60 /40，v /v) ，at a flow rate of 1． 2 mL /min，the
ultraviolet detector was set at 203 nm and the column temperature was kept 40 ℃ ． The separation effect of both squalene
standard and squalene of Strobilanthes tonkinesis Lindau is great． The linear range was of 0． 4144-2． 0720 ug (r =
0. 9999)． The RSD of the accuracy test result is 1． 146%，the average recovery rate of squalene is 100． 97% and RSD is
2. 32%，the stability of supply liquid is well． The method is satisfied for quality control．
Key words:high performance liquid chromatography;squalene;Strobilanthes tonkinesis Lindau;quantitative determination
糯米香茶(Strobilanthes tonkinesis Lindau) ，为爵
床科马蓝属多年生草本植物［1］。因其具有独特的
糯米清香而得名，它含有丰富的芳香成分和对人体
有益的氨基酸，具有清热解毒、养颜抗衰、补肾健胃
的功效，被誉为“美容茶”［2］。近年来研究人员发现
糯米香茶中含有丰富的生物活性物质角鲨烯，使得
糯米香茶成为提取角鲨烯的潜在植物资源，有待进
一步开发利用。
角鲨烯是一种高度不饱和的直链三萜类化合
物，化学名称为 2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，
14，18，22-二十四碳六烯酸，具有抗氧化、抗辐射、抗
疲劳、增强免疫调节及新陈代谢等作用［3］。角鲨烯
最早发现于深海鲨鱼肝脏中，后研究人员从植物中
提取得到不同含量的角鲨烯，其中谭乐和等人发现
糯米香茶中角鲨烯含量较为丰富［4］，但尚未建立准
确测定糯米香茶中角鲨烯含量的检测方法。本文在
前人的基础上建立一种反相高效液相色谱(RP-
HPLC)准确测定糯米香茶中角鲨烯含量的方法，为
进一步的研究工作奠定基础。
1 实验部分
1． 1 仪器与试剂
仪器:waters e2695 高效液相色谱仪，PAD 检测
器，色谱柱:DiamonsilTM C18;X-1001 型旋转蒸发
器;SH2-III型循环水真空泵;Fuhe HH-4 数显恒温
水浴锅;
试剂:甲醇、乙腈均为色谱纯(Tedia，美国) ;石
油醚(30 ～ 60 ℃)为分析纯(中国医药集团上海化
学试剂有限公司) ;角鲨烯标准品(Sigma，美国) ，纯
度 99%;
DOI:10.16333/j.1001-6880.2012.s1.014
1． 2 实验材料来源
糯米香茶原种采自云南景洪一农家茶园，种植
在华中农业大学温室。取成熟叶片，阴干后用于提
取角鲨烯。
1． 3 色谱条件
C18色谱柱(200 × 4． 6 mm，5 um) (迪马，美国) ，
流动相甲醇 /乙腈体积比为 60 /40 (v /v) ，采用等度
洗脱，流速为 1． 2 mL /min，检测波长设定为 210
nm［5-7］。
1． 4 样品制备
采用索氏提取法提取糯米香茶角鲨烯:称取
20． 0020 g 糯米香茶干燥粉末(40 目)并用滤纸包裹
装入索氏提取器中，控制水浴温度恒为 60 ℃，加入
500 mL含有 0． 5% BHT 的石油醚(30 ～ 60 ℃)回流
提取 10 h 后浸泡 8 h，收集石油醚提取液并用旋转
蒸发仪除去石油醚，得到深绿色脂溶物，用甲醇定容
至 50 mL容量瓶中［3，8-10］。
1． 5 标准溶液的制备
精密称取角鲨烯标准品 25． 9 mg，用无水甲醇
定容至 25 mL容量瓶中，超声波辅助溶解，得到浓度
为 1． 036 mg /mL 的标准溶液，稀释 10 倍得到
0. 1036 mg /L的标准溶液。
2 方法与结果
2． 1 流动相的选择
角鲨烯为不饱和的烃类化合物，采用反相色谱
检测提取液中角鲨烯含量，调整甲醇 /乙腈的比例进
行测试，得出在甲醇 ∶ 乙腈 = 60 ∶ 40(v /v)时有较好
的分离效果，色谱图如图 1 所示。并设定检测波长
为 210 nm，总流速为 1． 2 mL /min，柱温控制在 40
℃。在此色谱条件下标准溶液和样品色谱得到充分
分离，标品角鲨烯保留时间为 18． 970 min，样品中角
图 1 标准溶液色谱图
Fig. 1 Chromatogram of the standards
图 2 样品色谱图
Fig. 2 Chromatogram of the sample
鲨烯保留时间为 18． 989 min，两者保留时间基本一
致［5-6，11-14］。
2． 2 检测波长的确定
角鲨烯标准品(Rt = 18． 970 min)的紫外波长
图谱显示角鲨烯最大吸收波长为 203． 6 nm，索氏提
取法提取的糯米香茶中角鲨烯(Rt = 18． 989 min)的
紫外波长图谱与标准品相符，最大吸收波长亦为
203． 6 nm。认为在该色谱条件下角鲨烯的最大吸收
波长即为 203． 6 nm。如图 3，4 所示。
2． 3 标准曲线绘制
准确吸取标准溶液，依次进样 4，8，12，16，20
uL，按 2． 3 色谱条件测定峰面积，以峰面积对进样量
进行回归分析，得角鲨烯的回归方程为 Y =
344. 04X – 21． 677，R2 = 0． 9999 ，结果表明角鲨烯
在 0. 4144 ～ 2． 0720 ug范围内线性关系良好［5，6］。
26 天然产物研究与开发 Vol. 24
表 1 标准曲线测定结果
Table 1 The standard curve
标准溶液进样量
The injected volume of
the standard solution(uL)
进样质量
The injected quantity
(× 10-3mg)
X
峰面积
Peak area (v·s)
Y
4 0． 4144 1343． 768
8 0． 8288 2718． 259
12 1． 2432 4363． 308
16 1． 6576 5503． 173
20 2． 0720 6864． 674
2． 4 进样精密度试验
以 0． 1036 mg /L的标准品溶液连续进样 6 次，
每次进样体积为 20 uL，按照 2． 3 HPLC 色谱条件测
定峰面积，结果如表 2，相对标准偏差 RSD = 0． 56%
(n = 6)。
表 2 角鲨烯精密度试验结果
Table 2 The result of accuracy test(n = 6)
进样次数
Times of
injection
峰面积
Peak area
(v·s)
平均值
mean value RSD (%)
1 6864674
2 6766755
3 6788178 678942 0． 56
4 6774405
5 6775098
6 6766941
2． 5 回收率试验
采用加样回收法，精确称量 20． 0000 g 糯米香
茶粉末，采用 1． 4 索氏提取法提取样品溶液，精确量
取 3． 0 mL的样品溶液三份至洁净的带塞试管中，分
别加入 1． 0、2． 0、3． 0 mL 浓度为 0． 1036 mg /mL 的
标准品溶液，超声助溶 10 min，进行 HPLC法定量分
析，结果如表 3 所示。符合《中国药典》2005 版第 I
部 95% ～ 105%的规定［7，15，16］。
表 3 回收率试验结果
Table 3 The result of recovery experiment
标品加入量
Recruitment
(mL)
回收率
recovery rate
(%)
平均回收率
average recovery
rate(%)
RSD(%)
1． 0 98． 28%
2． 0 102． 53% 100． 97% 2． 32
3． 0 102． 11%
2． 6 供试液稳定性试验
精密称取糯米香茶干燥粉末样品 20． 0000 g，按
照 1． 4 提取方法制成供试液，每隔 40 min 进样 1
次，按 1． 3 HPLC 色谱条件测定峰面积并计算出角
鲨烯含量，结果见表 4。
经计算得到峰面积平均值为 4049． 527 v·s，
RSD 为 1． 41%，符合《中国药典》2005 年版 I 部
RSD ＜ 2% 的要求，表明采用索氏提取法提取得到
的供试液稳定性较好。
表 4 供试液稳定性试验结果
Table 4 The result of sample stability test
时间
Time(min) 0 40 80 120 160
峰面积
Peak area(v·s)4123． 419 4016． 413 4037． 021 4089． 939 3980． 844
平均偏差
Average Deviation 45． 721
2． 7 样品测定
精确吸取样品溶液 4 uL进样，采用外标法计算
样品中角鲨烯含量，计算得出 20 g 糯米香茶粉末中
角鲨烯平均含量约为 14． 79 mg，即 0． 0739% 。
3 结论
建立测定糯米香茶中角鲨烯含量的高效液相色
谱法，证实糯米香茶中含有丰富的生物活性物质角
鲨烯，其含量约为 72． 71 mg /100 g 糯米香茶干燥粉
末。
实验确定高效液相色谱条件为:DiamonsilTM
C18色谱柱，流动相为甲醇 /乙腈 = 60 /40，检测波长
为 203 nm，流速为 1． 2 mL /min，柱温 40 ℃。在此条
件下角鲨烯标准品及糯米香茶中角鲨烯分离效果均
良好，HPLC测定方法经检验其线性关系、精密度、
回收率、供试液稳定性等均符合分析要求。该方法
适用于糯米香茶中角鲨烯含量的测定。
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(下转第 73 页)
36Vol. 24 杨 婷等:糯米香茶中角鲨烯含量的 RP-HPLC测定
的方法分离度高，重现性好，简便，可用于婆婆纳的
质量控制。
1-婆婆纳对照药材 2-第一批样品 3-第二批样品 4-第三批样
品 5-第四批样品 6-第五批样品 7-第六批样品 8-第七批样
品 9-第八批样品 10-第九批样品 11-第十批样品
图 3 10 批婆婆纳药材薄层色谱图
Fig. 3 TLC of Veronica cciliata Fiseh
3 讨论
目前，对婆婆纳的研究较少，其有效部位尚不明
确，在以后的工作中将进一步研究婆婆纳的有效部
位，为其质量控制提供依据。本研究以对照药材为
对照，对照药材主要优点是斑点多，反应的信息多。
藏药现行标准为《藏药部颁》1995 年版，很多药
材和制剂，没有“鉴别”项，或者“鉴别”项下没有薄
层鉴别，仅有理化鉴别或显微鉴别，不能更好的控制
的质量。因而，呼吁有关部门应重视民族药质量标
准的提高，使民族药这一非物质文化能得以长久流
传。
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