全 文 ：217
杨瑞云1，管海波1，张 革1，蒙春燕1，吴星燕1，黄忠京2，李 俊3
( 1药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室，广西师范大学化学化工学院，广西桂林 541004;
2广西民族大学化学与生态工程学院，广西南宁 530006;
3广西师范大学环境与资源学院，广西桂林 541004)
摘 要:对当归藤中总黄酮提取工艺进行研究。采用正交设计实验，考察了乙醇浓度、液料比、提取时间、提取次数对
当归藤中总黄酮提取率的影响。结果表明，最佳提取工艺为 60%乙醇，液料比 12∶1，提取 3 次，每次 3h，此工艺条件下
总皂苷的提取率为 028%。
关键词:当归藤，总黄酮，正交实验，提取工艺
Study on the extraction condition of total flavonoids
from Embelia parviflora Wall
YANG Rui－yun1，GUAN Hai－bo1，ZHANG Ge1，MENG Chun－yan1，
WU Xing－yan1，HUANG Zhong－jing2，LI Jun3
( 1Key Laboratory for Chemistry and Molecular Engineering of Medincinal Resources，Ministry of Education of China，
School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi Normal University，Guilin 541004，China;
2School of Chemistry and Ecological Engineering，Guangxi University for Nationalities，Nanning 530006，China;
3School of Environment and Resources Science，Guangxi Normal University，Guilin 541004，China)
Abstract: The extraction techniques of the total flavonoids in Embelia parviflora Wall were studiedOrthogonal test
was carried out to investigate the effects of concentration of solvent，the radio liquid to material，time length of
extraction，and frequency of extraction on extraction results of total flavonoids from Embelia parviflora Wall The
optimum extraction technique was extracted Embelia parviflora Wall in 60% ethanol with the ratio of liquid to material
at 12∶1 for 3 times，with 3h for each timeUnder these conditions the extraction yield was 028% 
Key words: Embelia parviflora Wall; total flavonoids; orthogonal test; extraction techniques
中图分类号: TS2012 文献标识码: B 文 章 编 号: 1002－0306( 2011) 04－0217－03
收稿日期: 2010－03－22
作者简介:杨瑞云( 1978－ ) ，女，博士，副教授，主要从事天然有机化学
研究。
基金项目: 973 计划前期研究专项( 2007CB516805 ) ; 药用资源化学与
药物分子工程教育部重点实验室主任基金( 桂科能 0630006
－5D08) ; 广西科技厅应用基础研究( 桂科基 0731050 ) ; 广
西师范大学大学生创新实验计划项目。
当归藤 ( Embelia parviflora Wall) 系紫金牛科酸
藤子属植物，别名小花酸藤子、筛其蔃、大力王，主要
分布在广西、广东、云南、贵州等地。当归藤味苦、性
温，具有活血散瘀、补肾强腰之功效，常用于治疗贫
血、跌打损伤、骨折等多种病症［1］。黄酮类化合物广
泛存在于植物界，在抗菌、消炎、抗突变、抗氧化、抗
肿瘤、抗衰老［2－3］等方面具有很好的效果。随着现代
医药、食品工业的快速发展，黄酮类化合物以其活性
高、作用广泛等特点越来越受到人们的关注［4］。本课
题组在对当归藤化学成分的研究中，分离得到了大
量黄酮类化合物，而针对当归藤中总黄酮提取工艺
的研究尚未见报道。本文通过正交实验法对当归藤
总黄酮的提取工艺进行了研究，为开发和利用当归
藤中的黄酮类成分提供理论参考。
1 材料与方法
11 材料与仪器
当归藤 购自桂林市药材市场; 芦丁对照品
批号 Q8070812，购于成都曼斯特生物科技有限公司;
亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等试剂 均为分
析纯。
TU－1901 双光束紫外可见分光光度计 北京普
析通仪器有限公司; BS124S 型电子天平 赛多利斯
( 北京) 科学有限公司; R－1001 型旋转蒸发仪 郑州
长城科工贸有限公司; DZF－1B型真空干燥箱 上海
跃进医疗器械厂。
12 实验方法
121 当归藤总黄酮含量的测定［3］
1211 对照品溶液的制备 精密称取已干燥至恒
重的芦丁对照品 5mg，置于 50mL 容量瓶中，用 80%
甲醇稀释定容至刻度，摇匀，即得 010mg /mL 芦丁对
照品溶液。
1212 测定波长的选择 精密量取芦丁对照品液
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2011.04.041
218
20mL 于 10mL 具塞试管中，加 80% 甲醇溶液至
5mL，加 5% 亚硝酸钠溶液 03mL，摇匀，放置 6min
后，再加入 10%硝酸铝试液 03mL，摇匀，放置 6min，
加入 15mL 10%的氢氧化钠溶液，加 80%甲醇至刻
度，摇匀。放置 15min后，以不加芦丁对照品溶液做
参比，于紫外可见分光光度计 400～600nm 波长范围
内进行扫描，确定其测定波长为 500nm。
1213 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁对照品溶
液 0、05、10、20、30、40、50mL，分别置于 10mL 具
塞试管中，各加入 80% 甲醇溶液至 5mL，再加
03mL5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置 6min 后，加 10%
硝酸铝溶液 03mL，摇匀，放置 6min，加 10%氢氧化
钠溶液 15mL，用 80%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，以
相应试剂作空白，15min后在 500nm波长处测定吸光
度。以芦丁浓度( x) 为横坐标，吸光度( y) 为纵坐标，
绘制标准曲线，得回归方程: y = 71312x + 00573，相
关系数 R2 = 09995。
1214 样品液的制备和黄酮含量的测定 准确称
取 5g已干燥至恒重的当归藤粗粉，进行回流提取，
提取液过滤后减压浓缩，用 80%甲醇定容至 100mL。
精密量取样品液 01mL，按 1213 项操作的方法测定
吸光度，由回归方程计算样品总黄酮的含量。
122 单因素实验
1221 乙醇浓度的考察 称取当归藤药材 6 份，每
份 10g，分别以 10%、30%、50%、60%、70%、80%、
95%的乙醇回流提取，第一次用 10 倍量的液料比提
取 2h，第二次提取 1h，合并两次提取液，过滤，浓缩
得当归藤提取物浸膏，按照 1214 项操作，测定吸光
度，由回归方程计算总黄酮得率。
1222 液料比的考察 称取当归藤药材 5 份，每份
10g，分别用液料比为 8 ∶1、10 ∶1、12 ∶1、16 ∶1、20 ∶1 的
80%乙醇回流提取 2h，过滤，浓缩得浸膏，按照 1214
项操作，测定吸光度，由回归方程计算总黄酮得率。
1223 提取时间的考察 称取当归藤药材 5 份，每
份 10g，用 50mL 80%乙醇回流提取，提取时间分别为
05、10、15、20、25、30h，过滤，浓缩得浸膏，按照
1214 项操作，测定吸光度，由回归方程计算总黄酮
得率。
1224 提取次数的考察 称取当归藤药材 5 份，每
份 10g，用 50mL 80%乙醇回流提取 2h，提取次数分
别为 1、2、3、4、5 次，过滤，浓缩得浸膏，按照 1214
项操作，测定吸光度，由回归方程计算总黄酮得率。
123 正交实验 根据单因素实验结果，选取乙醇
浓度( A) 、液料比( B) 、提取时间( C) 、提取次数( D)
为考察因素，以测得的提取样品中总黄酮含量为考
察指标，采用 L9 ( 3
4 ) 正交表进行实验，因素与水平见
表 1。
表 1 因素水平表
水平
因素
A乙醇浓度
( % )
B液料比
( mL·g －1 )
C提取时间
( h)
D提取次数
( 次)
1 50 8∶1 20 2
2 60 10∶1 25 3
3 70 12∶1 30 4
2 结果与分析
21 单因素实验结果
211 乙醇浓度对当归藤总黄酮提取效果的影响
由图 1 可知，在较低乙醇浓度时，随着乙醇浓度的增
加，总黄酮得率也逐渐增加，但当乙醇浓度超过 60%
时，总黄酮得率随乙醇浓度的增加反而减少，可能是
随着乙醇浓度的增大，脂溶性杂质增多的原因。因
此，选择乙醇浓度 60%左右进行考察。
图 1 乙醇浓度对当归藤总黄酮提取的影响
212 液料比对当归藤总黄酮提取效果的影响 由
图 2 可知，随着液料比增加，总黄酮得率也在不断增
大。但当液料比大于 12∶1 时，总黄酮得率增加缓慢，
即当归藤中黄酮类化合物溶出量已趋向最大值。从
环境保护和节约溶剂的角度出发，选择液料比 12 ∶1
左右作为考察对象。
图 2 液料比对当归藤总黄酮提取的影响
213 提取时间对当归藤总黄酮提取效果的影响
由图 3 可知，提取时间越长，总黄酮得率越大，当提
取 25h后，总黄酮得率增长速度有所减缓。考虑到
提取时间过长，更多的杂质被溶出而影响检测，选择
25h为最佳提取时间。
图 3 提取时间对当归藤总黄酮提取的影响
214 提取次数对当归藤总黄酮提取效果的影响
由图 4 可知，随着提取次数增加，总黄酮得率也增
加。但提取 3 次后，总黄酮得率变化曲线已较为平
缓。考虑到生产工艺对时间的要求和溶剂的损耗
费，提取次数以 3 次为宜。
22 正交实验结果
正交实验结果见表 2，方差分析见表 3。根据表
219
图 4 提取次数对当归藤总黄酮提取的影响
2 中的极差 R值分析可知，影响当归藤总黄酮提取的
主次因素为 B > A > C > D，即液料比 >乙醇浓度 >提
取时间 >提取次数。从表 3 方差分析可知，B为显著
因素，其它三个为不显著因素。综合以上因素，在所
选因素水平范围内，最佳提取参数组合为 A2B3C3D2，
即 60% 乙醇、液料比 12 ∶ 1、提取时间 3h /次、提取
3 次。
表 2 正交实验结果
实验号 A B C D 总黄酮得率( % )
1 1 1 1 1 021
2 1 2 2 2 023
3 1 3 3 3 025
4 2 1 2 3 023
5 2 2 3 1 026
6 2 3 1 2 025
7 3 1 3 2 024
8 3 2 1 3 024
9 3 3 2 1 026
K1 0228 0227 0233 0240
K2 0248 0242 0240 0243
K3 0247 0254 0250 0240
R 0020 0027 0017 0003
23 最佳提取工艺条件的验证
按上述最佳提取工艺条件进行 3 次验证实验，
其结果见表 4。由验证结果可知，按最佳工艺条件得
表 3 方差分析结果
方差来源 自由度 离差平方和 方差 F
A 2 0000762 0000381 423
B 2 0001098 0000549 61
C 2 0000438 0000219 2433
D( 误差) 2 0000018 0000090 1
注: F0 05 ( 2，2) = 1900。
到的总黄酮含量为 028%，均高于其他各正交实验
值，RSD = 132% ( n = 3 ) ，说明此工艺条件稳定、
可行。
表 4 验证实验结果
实验号 总黄酮得率( % ) 平均得率( % ) RSD( % )
1 028
2 028 028 132
3 029
3 结论
通过正交实验法对当归藤总黄酮的提取工艺进
行了优化，得到最佳提取条件为 60%乙醇、液料比 12
∶1、每次提取 3h、提取 3 次; 当归藤总黄酮提取效果
影响最大的是液料比，其次是乙醇浓度和提取时间，
影响最小的是提取次数。因此，在进行当归藤总黄
酮的提取时，必须注意各工艺参数的调控。按此工
艺重复验证提取 3 次，总黄酮得率为 028%，说明此
工艺合理、简单、稳定性好。
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