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不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素含量的比较研究



全 文 :Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2016 Vol.29 No.3
中国科技 核心期刊
方 药·质量分析
蒙古扁桃叶是蔷薇科扁桃属蒙古扁桃
(Amygdalus mongolica Maxim.)的干燥叶,蒙古扁
桃又称山樱桃、土豆子,蒙古名为乌兰 - 布依勒
斯,多年生木本植物。主要分布于内蒙古、宁夏部
分地区荒漠草原区的山地、丘陵、石质坡地等。现
为国家三级保护植物。蒙古扁桃为重要的木本油
料树种之一,种仁含油率约为 40%,其油可供食
用。种仁可代“郁李仁”入药,蒙古扁桃能润肠、利
尿、主治大便燥结、水肿、脚气等[1]。
槲皮素作为重要的黄酮类化合物,具有保肝
利胆、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种
药理学作用[2-3]。槲皮素是蒙古扁桃的重要活性成
分之一,本实验采用高效液相色谱法对蒙古扁桃
叶中的槲皮素的含量进行测定,并对内蒙古、宁夏
等地蒙古扁桃药材中该成分的含量进行比较。本
研究可为药材质量的客观评价提供方法,并为蒙
古扁桃资源的合理开发奠定科学可靠的实验基
础。
1 材料
1.1 仪器与试药JY1201型电子天平(上海民桥
精密科学仪器有限公司);高效液相色谱仪(紫外
检测器,二极管阵检测器 PDA-2000,岛津国际贸
易上海有限公司);色谱柱[Hypersil ODS2-C18
(4.6mm×250mm,5μm)柱号:E2414777];色谱工作
站:LC-solution,DS-2510DT型超声清洗机(天津
奥特赛恩斯仪器有限公司),数显鼓风干燥箱(上
海博讯实业有限公司医疗设备厂),TDZ4-WS低速自
动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。
不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素含量的比较研究 *
白万富,石松利△,郑倩男,吴培赛
内蒙古科技大学包头医学院药学院,内蒙古 包头 014040
[摘 要]目的:建立蒙古扁桃叶中槲皮素含量测定的方法,对不同产地蒙古扁桃叶中槲皮素的含量进行
比较。方法:采用 HPLC 法,Shim-Pack VP-ODS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇 -0.2%磷酸
(50∶50);柱温30℃;流速1.0mL/min;检测波长360nm;进样量20μL。结果:线性关系良好,r=0.9999,回归方
程为 Y=86130X-6471.9,线性范围为2.5~50μg/mL,平均加样回收率为100.5%,RSD为1.9%(n=6)。不同产地
蒙古扁桃叶中槲皮素的含量存在差异,内蒙古固阳地区的含量最高,贺兰山哈拉乌沟地区的含量最低。结论:
本实验首次测定了蒙古扁桃叶中槲皮素的含量并对不同出产地进行比较,方法准确、可靠,可作为蒙古扁桃药
材质量评价的指标及资源开发的依据。
[关键词]蒙古扁桃;槲皮素;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号]R917[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2016)03-0030-03
Comparisons of the Contents of Quercetin
in Mongolian Almond Leaf from Different Producing Areas
BAI Wanfu, SHI Songli△, ZHENG Qiannan, WU Peisai
Pharmacy School of Baotou Medical College of Inner Mongolia University of Science & Technology,
Baotou 014040, China
Abstract Objective: To compare the contents of quercetin contained in Mongolian almond leaf [Amygdalus
mongolica (Maxim.) Ricker] form different producing areas by establishing content determination method of
quercetin. Methods: HPLC method was adopted, Shim-Pack VP-ODS C18chromatographic column(4.6 mm×250 mm,
5 μm); mobile phase: methanol-0.2% phosphoric acid (50:50); column temperature 30℃; flow rate was 1.0mL/min;
detection wavelength was 360 nm; the sample size was 20 μL. Results: Linear relationship was better, r=0.999 9, re-
gression equation was Y=86130X-6471.9, linear range was from 2.5 to 50 μg/mL, average recovery rate was
100.5%, RSD was 1.9% (n=6). The difference was existed in the comparison of the contents of quercetin of Mongo-
lian almond leaf from different producing areas, the contents of quercetin contained in Mongolian almond from
Guyang district were the highest, while these contained in the Mongolian almond from Halawugou district of Helan
mountains were the lowest. Conclusion: The contents of quercetin in Mongolian almond leaf are initially detected,
and different producing areas are compared in the experiment, the method, accurate and reliable, could be taken as
the index of quality evaluation of Mongolian almond and the reference of resource development.
Keywords Mongolian almond; quercetin; HPLC; content determination
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2016年第 29卷第 3期
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方 药·质量分析
1.2 试药槲皮素对照品(北京恒源启天化工技
术研究院北京世纪奥科生物技术有限公司,批号:
MUST-12072505);甲醇、乙腈为色谱纯;磷酸为分
析纯;水为超纯水。蒙古扁桃叶采自阿右雅布赖戈
壁、贺兰山、九峰山等地,经内蒙古大学生命科学
学院王迎春教授鉴定为蔷薇科扁桃属植物蒙古扁桃。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil ODS2-C18(4.6
mm×250mm,5μm);柱温:30℃;检测波长:360nm;
流动相:甲醇∶0.2%磷酸=50∶50;流速:1.0mL/min,
进样量:20μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取槲皮素标
准品5mg,置10mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,即
得储备液。
2.2.2 供试品溶液的制备取蒙古扁桃叶粉末
(过20目筛)约1.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶
中,精密加入80%甲醇10mL,密塞,超声50分钟(温
度25℃),放冷,转移至离心管中,离心(2000r/min)
10分钟,滤过,取上清液,即得。
2.3 系统适用性实验取对照品溶液、供试品溶
液各20μL进样,按照“2.1”项下色谱条件测定,
记录色谱图。理论板数按槲皮素峰计算不低于
4000,槲皮素峰与其他杂质峰分离度均大于1.5。
对照品溶液、供试品蒙古扁桃药材溶液在此色谱
条件下的色谱图见图1。
2.4 线性关系的考察精密称取槲皮素标准品
5mg,置10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得
储备液。精密量取该溶液2mL置于10mL量瓶中,
用甲醇定容至刻度,摇匀,精密量取 0.25、0.50、
1.00、1.50、2.00、2.50、5.00 mL,置于 10 mL 量瓶
中,用甲醇定容至刻度。制得含槲皮素浓度为2.5、
5、10、15、20、25、50μg/mL的对照品溶液,分别精
密吸取上述对照品溶液各20μL,按“2.1”项下色
谱条件测定,以浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为
纵坐标,绘制标准曲线,进行回归分析,得回归方
程:Y=86130X-6471.9,R=0.9999,结果表明:槲皮
素在2.5~ 0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线
性关系。
2.5 精密度实验取同一对照品溶液,连续进样
6次,按“2.1”项下色谱条件测定,测得槲皮素峰
面积的RSD为0.9%(n=6),表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性实验取同一供试品溶液,按“2.1”
项下色谱条件,分别在0、2、4、6、8、10小时进行测
定,测得槲皮素峰面积的RSD为1.5%(n=6),表明
供试品溶液在10小时内稳定性良好。
2.7 重复性实验精密称取同一批样品共六份,
每份约1.5g,按照含量测定的方法,进行测定,计
算含量。平均含量为9.7883mg/g,RSD为2.0%,
表明该方法重复性良好。
2.8 含量测定取内蒙古、贺兰山等7个产地的
供试品,每份约1.5g,精密称定,按上述含量测定
方法进行测定,外标法计算样品中槲皮素的含
量[4],见表1。
表1 不同产地扁桃叶中槲皮素的含量
序号 产地 取样量/g 峰面积 含量/(mg·g-1)
1 乌海千里沟 1.5005 1258842 0.0979
2 贺兰山哈拉乌沟 1.4993 144539.3 0.0117
3 巴彦诺日公 1.5020 184556.7 0.0148
4 头道湖 1.5050 192137 0.0153
5 固阳 1.5010 5173314 0.4007
6 赵长城 1.5000 922877 0.0719
7 九峰山 1.5000 378093.5 0.0297
2.9 加样回收率实验精密称取已知含量
(0.0153mg/g)的蒙古扁桃叶0.7g,共6份,精密
称定,分别精密加入槲皮素对照品适量,按供试品
溶液制备方法制备,分别按“2.1”项下色谱条件测
定,结果平均加样回收率为100.5%;RSD为1.9%,
见表2。
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0
时间/min
槲皮素对照品
9.0
8.0
7.0
6.0
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0
mA

10
槲皮素
mA

1.
00
0
1.75
1.50
1.25
1.00
0.75
0.50
0.25
0.00
-0.25
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0
时间/min
蒙古扁桃药材
图1 槲皮素对照品及蒙古扁桃药材HPLC图
槲皮素
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Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2016 Vol.29 No.3
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表2 加样回收实验结果
序号 取样量/g 样品中槲皮素的量/mg 加入量/mg 峰面积 测得量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1 0.701 0.0107 0.015 217466.1 0.0260 101.8
2 0.707 0.0108 0.015 213159.6 0.0255 97.9
3 0.703 0.0108 0.015 215743.5 0.0258 100.3 100.5 1.9
4 0.701 0.0107 0.015 216604.8 0.0259 101.2
5 0.704 0.0108 0.015 219188.7 0.0262 102.9
6 0.705 0.0108 0.015 214020.9 0.0256 98.8
3 讨论
3.1 提取方法的研究
3.1.1 提取溶剂的考察[5-6] 实验考察了提取
溶剂甲醇的浓度(100%,90%,80%,70%,60%)。结果
表明:甲醇的浓度对蒙古扁桃叶中槲皮素提取的
量有一定的影响,80%甲醇溶液提取槲皮素的量为
0.0986mg/g最高,其次是90%甲醇溶液提取槲皮
素的量为0.0530mg/g,60%甲醇溶液提取槲皮素
的量为0.0091mg/g最低。故选择80%甲醇溶液为
提取溶剂。
3.1.2 样品水解程度的考察[7-9] 由于色谱柱
的pH范围在1~ 0之间,当酸度过大就会使色谱
柱受损,采用2mol/L盐酸对样品进行水解,提取
槲皮素,发现用甲醇提取的槲皮素的量与加入盐
酸水解提取的槲皮素的量相差不大,因此,本研究
直接采用甲醇提取的方法。
3.1.3 脱脂对样品中槲皮素含量测定[10-12]分
别精密称取同一批号的样品约1.5g2份,一份加
入石油醚进行脱脂处理,另一份作为空白对照,比
较两者槲皮素的含量,结果显示含量相差不明显,
因此无需对样品进行脱脂处理。
3.2 不同产地含量的比较本实验结果显示,不
同产地蒙古扁桃叶中槲皮素的含量有较大差异,固
阳蒙古扁桃中槲皮素0.4007mg/g最高,其次为乌
海千里沟蒙古扁桃中槲皮素0.0979mg/g,而贺兰
山哈拉乌沟蒙古扁桃中槲皮素0.0117mg/g为最低,
可为蒙古扁桃药材质量控制提供参考依据[13-15]。
研究证明,本实验方法简便、灵敏、稳定、准
确,可用于蒙古扁桃药材的质量监控与评价;并为
蒙古扁桃资源的合理开发提供科学可靠的实验依
据。
参考文献
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收稿日期:2015-03-30
*基金项目:国家自然科学基金项目(编号81102760);内蒙
古自治区自然科学基金项目(编号2015MS0808)。
作者简介:白万富(1982—),男,硕士学位,讲师。研究方向:
中、蒙药及其制剂的化学成分及质量标准研究。
△通讯作者:石松利(1981—),女,博士学位,教授。研究方
向:中、蒙药成分及资源开发利用研究。
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