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郭新民#于松涛
郭新民# 于松涛# 牡丹江医学院生物化学与分子生物学教研室，黑龙江
省牡丹江市 $%&’$$
郭新民，女，$()& 年生，河北省沧县人，汉族，$(&’ 年北京医科大学毕
业，硕士生导师，教授，主要从事 型糖尿病生物化学与分子生物学机
制的研究。 *+,-./0./1’%2 $314 5,0
电话：6 !37)%173%!$%3711!
中图分类号：8%!&4 $ 文献标识码：9 文章编号：$3&$ : %(3;’’%<$$ : ’’! : ’
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郭新民) 于松涛 6 翻白草合剂对 B 型糖尿病大鼠海马神经生长因子及神经纤维
蛋白含量的影响 O P Q 6 中国临床康复，BCCD，F G HH I：KB L M O @@@6 R,89S16 9#( Q
摘要
目的：探讨翻白草合剂对 型糖尿病 ; HMED N.FXDHDL 0DPP.H+L，WCO<大
鼠脑海马神经生长因子 ; /DGUD *G,YHK IF5H,GL，>Z[<、神经元纤维蛋白
; /D+G,I.XG,+L EG,HD./L，>[<含量的影响。
方法：!’ 只 ].LHFG大鼠随机选取 $’ 只作为正常对照组，余下的 &’ 只用
高热量饲料加小剂量链脲佐菌素建立实验性 WCO大鼠模型，)’ 只大
鼠造模成功，随机分为 WCO模型组、翻白草合剂大剂量组、翻白草合
剂中剂量组、翻白草合剂小剂量组，$’ 只 =组，用翻白草合剂治疗 ! 周
后，采用免疫组化法观察各组大鼠脑海马 >Z[、>[含量。
结果：WCO模型组大鼠脑海马 >Z[、>[免疫阳性细胞数目明显降低，
与正常对照组比较，差异具有显著性意义 ; ! ‘ ’4 ’$ <；翻白草合剂组大
鼠脑海马神经元 >Z[、>[免疫阳性细胞数目与 WCO模型组比较明显
升高，差异具有显著性意义 ; ! ‘ ’4 ’$ <。
结论：WCO大鼠脑海马 >Z[、>[含量下降，翻白草合剂可增加 WCO
大鼠脑海马 >Z[、>[的表达。
主题词：神经生长因子；海马；糖尿病，非胰岛素依赖型
G 引言
神经生长因子 ; /DGUD *G,YHK IF5H,GL，>Z[< 是神经
系统最重要的生物活性分子之一，与神经元的再生和
分化密切相关。>Z[属神经生长因子，是一类对神经元
的分化和突起的生长、存活及功能起支持促进作用的
蛋白质 b$ : 1 c，具有促进损伤神经再生和修复的作用 b ) c。
海马是哺乳动物学习和记忆的重要脑区，随着 >Z[脑
内功能研究的不断深入，人们发现某些疾病可导致
>Z[、神经元纤维蛋白 ;/D+G,I.XG,+L EG,HD./L# >[< 含量
的变化 b% c。本研究采用免疫组化法观察 型糖尿病
; HMED N.FXDHDL 0DPP.H+L，WCO< 大鼠脑海马 >Z[、>[
含量的变化，同时使用降血糖中药翻白草合剂观察其
对大鼠脑海马 >Z[、>[含量的影响，旨在寻找一种具
有增加 WCO大鼠脑海马 >Z[、>[表达的药物。
H 材料和方法
设计：以实验动物为研究对象的随机对照实验。
单位：一所大学的生物化学与分子生物学教研
室。
材料：实验于 ’’1 : $’ = ’’) : ’$在牡丹江医学
院生物化学与分子生物学教研室及医学与药物开发重
点实验室完成。选用].LHFG大鼠 !’只，清洁级，雌雄各
半，体质量 ’’ d %’ *，购自吉林省长春市高新医学动
物实验研究中心 b实验动物中心许可证号：@Ref :
（吉）’’17’’’) c。分笼饲养，温度（’ g ）h，湿度
（%% g %）i，人工光照，明暗各 $ K = N，) K自由取食
和饮水。基础饲料热卡配比：碳水化合物占 3’i，蛋白
质占 %i，脂肪占 $’i（植物脂肪为主），维生素及矿
物质等成分占 %i。高热量饲料热卡配比：碳水化合物
占 $!i，蛋白质占 ’i，脂肪占 %&i（动物脂肪为
主），维生素及矿物质等成分占 %i。主要试剂与药品：
链脲佐菌素购于 @.*0F公司；临用时溶于 ES )4 %的柠
檬酸钠 :柠檬酸缓冲溶液，配成 ’* = B的溶液；>Z[
W@T?AO\C免疫组化染色试剂盒、>[’’ W@T?AO\C 免
疫组化染色试剂盒（购自深圳赛尔生物技术有限公
司）；’4 ’$ 0,P = B TJ@；C9J显色试剂盒（广东晶美生
物工程有限公司）；’4 % 0,P = B WG.L7SRB；翻白草合剂
主要由翻白草、柏子仁、人参、远志、五味子等组成，购
于牡丹江市益寿堂药店，牡丹江医学院普通高校医学
与药物开发重点实验室配制。
设计、实施、评估者：研究设计、干预实施及评估
者均为作者，全部参与者实验前均经过培训，采用盲
法评估。
干预措施：WCO模型的制备：参考有关文献建立
7CO大鼠模型 b 3 c。!’只大鼠适应性喂养 1 N，随机取
$’只作为正常对照组给以基础饲料，其余 &’只给以
高热量饮食。持续喂养 !周后，&’只高热量饮食大鼠
尾静脉 &% 0B = B 医用乙醇消毒，一次性注射 @W?注射
翻白草合剂对 型糖尿病大鼠海马神经生长因子及
神经纤维蛋白含量的影响
·基础研究·
中国临床康复 第 F 卷第 HH 期 ’’%7’17$ 出版
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周政，陈惠孙，张可成 # 神经生长因子和中枢神经系统创伤的研究进展 $ % & #
中国临床康复，’((，)（*(）：*++,
刘京升，孙正义，王宏沛，等 # 白介素 - * 和神经生长因子对周围神经再生
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王涛，刘伟. 崔磊，等 # 骨髓基质细胞诱导为神经原及胶质细胞 $ % & # 中国
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高延明，李靖年，王鸿飞，等 # 局部连续应用神经生长因子对周围神经修复
与再生的影响 $ % & # 中国临床康复，’((,，!（,）：//, - /
王雪琦，由振东，赵小林，等 # 抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元 456含
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张芳林. 李果，刘优萍，等 # ’ 型糖尿病大鼠模型的建立及其糖代谢特征分
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丁斐，顾晓松，陈峰 # 神经生长因子基因在大鼠心肌组织中的表达 $ % & # 南
通医学院学报，’((*，’*（）：’’, - !
梅晰凡，范广宇，秦书俭，等 # 转化生长因子 !和神经生长因子联合诱导成
年鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞的研究 $ % & # 中国临床康复，’((,，!
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液 ( 7D W XD，正常对照组注射相同体积的柠檬酸钠 -
柠檬酸缓冲液。,! G后，全部动物禁食 *’ G，乙醚麻醉，
用毛细玻璃管内眦静脉丛采血约 * 7Y， ((( < W 7J>离
心*( 7J>，取血清用葡萄糖氧化酶法测血糖。以血糖
#**# * 77=S W Y且 Z # 77=S W Y为造模成功。最终
资料完整且符合 [’QB 模型标准的 ! 只大鼠随机分
为模型对照组、翻白草合剂大剂量组、翻白草合剂中
剂量组、翻白草合剂小剂量组。各组分别给相应药物
/ 7Y W XD体质量灌胃，正常对照组与模型对照组灌胃
相同体积生理盐水，时间 !周。
免疫组化：灌胃 !周后，各组大鼠禁食 *’ G，戊巴
比妥钠（*(( 7D W XD）腹腔麻醉，俯卧固定。将颅骨夹
开，取出脑组织，浸入 ,( D W Y多聚甲醛固定 *周，石蜡
标本脱蜡至水，标本连续冠状切片，层厚 ( 7。切片
按以下程序进行免疫组化染色：( 7Y W Y过氧化氢室
温孵育去除内源性过氧化物酶；(# (* 7=S W Y N\?洗；复
合消化工作液抗原暴露；(# (* 7=S W Y N\?冲洗切片；非
特异性 ]D5的封闭和阻断；滴加特异性一抗，, ^过夜；
N\?冲洗切片 次；内源性生物素的封闭和阻断；N\?
冲洗切片 次；滴加特异性生物素二抗，, ^过夜；N\?
冲洗切片 次；滴加高敏的 [?N_‘BOQ 9\@过氧化物酶
复合物，, ^过夜；N\?冲洗切片 次；Q9\染色剂覆
盖组织，室温避光显色 *+ 7J>；N\?冲洗切片，复染，脱
水，封固。免疫组化半定量分析，每只大鼠脑海马部
位连续切片 *+ 张，进行阳性细胞计数。在物镜
（’( a）下，计数海马区每高倍视野内含 456，46的
阳性神经元数。
主要观察指标：#主要结局：在物镜（’( a）下，各
组大鼠脑海马区每高倍视野内 456、46阳性神经元
数。$次要结局：各组大鼠脑海马 456、46免疫组化
染色结果。
统计学分析：数据由第一作者应用 ?N?? **# (软
件处理. 实验结果用 0% 1 2表示. 组间比较用单因素方
差分析。
! 结果
’# * 实验动物数量分析 纳入大鼠 !(只，随机选取
*(只作为正常对照组，其余 )(只建立 [’QB大鼠模
型，!只造模后死亡，最终 !只大鼠资料完整且符合
[’QB模型标准。[’QB模型组 3只，翻白草合剂大剂
量组 3只，翻白草合剂中剂量组 *(只，翻白草合剂小
剂量组 *(只。
’# ’ 统计推断 大鼠脑海马 456、46免疫组化染色
结果 与正常对照组比较，[’QB模型组大鼠脑海马
内 456阳性染色神经元数目明显减少（3 Z (# (*），呈
浅棕色；与 [’QB模型组比较，翻白草合剂组大鼠海马
内 456阳性染色神经元数目明显增多（3 Z (# (*），呈
深棕色，以中剂量组最明显。
与正常对照组比较，[’QB模型组大鼠脑海马内
46阳性染色神经元数目少（ 3 Z (# (*），呈浅棕色；
与 [’QB 模型组比较，翻白草合剂组大鼠脑海马内
46 阳性染色神经元数目较多（ 3 Z (# (*），呈深棕
色。见表 *。
讨论
456对神经元的发育、分化、维持正常功能具有
极其重要的作用 $ ) &。456促进发育中的交感与感觉神
经细胞的分化和成熟，促进体外培养的交感神经元和
感觉神经元突起的长出，促进神经细胞内 @;’ b向细胞
外释放。骨髓基质细胞在转化生长因子 !和 456诱导
下有可能分化成为神经元 $ ! &。此外，456可有效地延缓
由于靶细胞损伤而引起的神经元的立即死亡，在损伤
后可维持一定数量的神经元存活，在适宜的环境中可
促进神经环路的重建，最终达到生理功能的重建 $ 3 &。
研究发现 46主要在胞浆中和微管蛋白有关，在
细胞表面递质传递中起重要作用 $ *( &。46是研究智力
损害分子基础的很好疾病模型，通过 46异常对大脑
功能和细胞信号转导通路的影响，可以进一步探索一
般人群中认知损害和学习能力下降的病理机制。
本研究中 [’QB 大鼠脑海马内 456 阳性染色神
经元数目明显减少且呈浅棕色，46阳性染色神经元数
目少，这可能与 [’QB大鼠脑组织中许多重要的神经
营养因子表达减少有关。456 长时间缺乏是促进
[’QB大鼠脑老化、损伤胆碱能神经元功能的重要因
素。另外翻白草合剂组大鼠脑海马内 456阳性染色神
经元数目明显增多且呈深棕色，46阳性染色神经元数
目较多，证明翻白草合剂具有增加 456与 46表达的
作用。
[’QB大鼠脑海马 456. 46含量明显下降，翻白
草合剂可增加 456. 46的表达，从而起到保护脑功能
的作用。
# 参考文献
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4445 67*89:5 8&) 9:;<<=>?=<@ 2A/(5 8&) 郭新民.等 #
翻白草合剂对 ! 型糖尿病大鼠海马神经生长因子及
神经纤维蛋白含量的影响
表 * 各组大鼠脑海马 456、46抗体阳性细胞数目比较
（0% 1 2，个 W ’( a物镜）
与正常对照组比较，; 3 Z (# (*；与模型对照组比较，T 3 Z (# (*
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’)# */ c # /,T
’,# *) c # ’T
*(
3
3
*(
*(
正常对照组
模型对照组
翻白草合剂大剂量组
翻白草合剂中剂量组
翻白草合剂小剂量组
组别 / 456 46