全 文 ：欧李绿枝组织培养与快速繁殖研究
焦 淑 华 ,林丽 华 ,李宝 江
(沈阳农业大学园艺学院 , 110161)
　　摘　要:以钙果三号嫩茎为外植体 、MS 为基本培养基 , 初步建立了欧李试管苗的快速繁殖体系。 结果
表明 ,诱导嫩茎分化生长较适宜的培养基为 MS+BA1.0 mg/ L+IAA1.0 mg/ L;MS 培养基较 B5 、改良 White
培养基更有利于试管苗的嫩茎增殖 , 试管苗增殖的适宜的蔗糖浓度 30 g/ L ～ 40 g/ L;培养基中 BA 和 NAA
浓度 ,以及 pH 值对欧李组培苗的增殖系数影响较大 , 3 因素的影响次序为 BA>pH 值>NAA , 最佳增殖培养
基为 BA0.2 mg/ L , NAA0.05 mg/ L , pH 值 6.2;最佳壮苗培养基 MS+NAA0.07 mg/ L;最佳生根培养基为
1/ 2MS+NAA0.4 mg/ L。
关键词:欧李;组织培养;快速繁殖
中图分类号:S662.3　文献标识码:B　文章编号:1001-0009(2006)03-0117-03
　　欧李(Cerasus humilis(Bge)Sok)为蔷薇科(Rosaceae)樱
桃属(Cerasus)[ 1] , 多年生落叶小灌木。欧李植株矮小 , 高
0.3 m ～ 1 m , 结果早 ,座果率高 , 可高密度栽植或建立草地果
园[ 2] ,也可盆栽或庭院栽培。欧李根系发达 , 喜光 、耐旱 、耐
寒 、较耐瘠薄 , 但不抗涝 ,适宜中性至微碱性的土壤 , 宜在干旱
地区发展。欧李与桃 、李嫁接亲和 ,且具有一定矮化作用 , 生
产中可用做砧木[ 3] 。
欧李有实生 、嫁接 、扦插 、组织培养等多种繁殖方式 ,不同
方式各有特点。欧李是异花授粉植物 ,实生繁殖后代具有变
异性状多 、变异幅度大的特点[ 4] , 很难保持亲本的优良性状。
嫁接繁殖通常采用本砧 ,但欧李实生植株常在结果 3～ 5 年后
死亡 ,导致接穗随之死亡 , 使生产遭受损失[ 5] 。欧李扦插繁殖
系数低 ,苗木整齐度差 , 且易在繁殖中积累病毒。组织培养不
但繁殖速度快 ,而且幼苗根系发达 、整齐度高 ,植株寿命长 ,是
欧李快速繁殖的最佳方式。欧李由于植株小 ,单位面积用苗
量较大 ,一般在 1 000 株/ 667 m2～ 2 000 株/667 m2 ,所以采用
适宜的繁殖方式 、加快欧李的繁育速度是生产中的重要问
题[ 6] 。但在欧李组织培养过程中 , 通常出现幼苗生长势弱 ,生
根培养效果差 ,组培苗移栽成活率低等问题 , 给良种繁育带来
较大的困难 。本试验以欧李嫩茎为外植体 , 对组织培养中的
嫩茎分化 、幼苗增殖 , 以及壮苗 、生根等主要环节进行了较深
入的研究 ,建立了适宜的快速繁殖体系 , 为欧李组织培养的生
产应用提供了试验和技术依据。
1　材料和方法
1.1　试验材料
欧李组织培养的试材为沈阳农业大学园艺学院温室栽培
的 2 年生钙果 3 号苗。
1.2　试验方法
试验于 2004 年 4 月末从萌发的新梢上剪取嫩茎做外植
体 ,用流水冲洗 20 min ～ 30 min , 除去叶片 , 剪成 1.0 cm ～
1.2 cm长的带腋芽茎段放在广口瓶中 , 在超净工作台上 , 用
75%的酒精灭菌 40 s , 再倒出酒精用 0.1%的 HgCl2 溶液浸
收稿日期:2006-01-10
泡 10 min～ 12 min ,注意将处理材料完全浸泡在消毒液中 , 在
处理期间晃动广口瓶数次使灭菌液与茎段充分接触。消毒后
用无菌水冲洗 3 ～ 5 次 , 放在铺有滤纸的无菌培养皿上 , 剪除
材料两端与灭菌药液接触部分 ,将处理好的茎段接种于启动
培养基上培养。 5 d后 , 叶腋萌发生长;20 d 后 , 形成展叶枝 ,
在新枝上又有新的侧枝生成。当幼苗生长到一定高度后 , 剪
成 1 cm 左右的茎段(至少带有两个节)接种于不同的增殖培
养基上进行继代扩繁培养。当幼苗增殖到一定数量 、较整齐
一致时 , 剪取长度为 2 cm ～ 3 cm 的新梢 , 去除基部叶片 , 接种
到生根培养基上进行生根培养。培养室温度为 25±2 ℃, 光
照强度为 1 500 Lx ～ 2 000 Lx ,光照周期 14 h/d。
试验中启动培养采用 4 种培养基分别为①MS +BA0.8
mg/ L+IBA0.8 mg/ L;②MS+BA1.0 mg/ L+IAA1.0 mg/ L;
③MS+BA1.0 mg/ L+NAA1.0 mg/ L;④MS+BA1.0 mg/ L
+2 , 4-D0.5 mg/ L , 培养基中添加蔗糖 30 g/ L、琼脂 6 g/ L、
pH 值为 5.8。试验每处理接种 20 个外植体 , 重复三次。继
代培养首先以 MS 、B5、改良White为基本培养基 ,进行基本培
养基筛选试验。试验时激素含量为 BA0.25 mg/ L+NAA0.1
mg/ L , 并添加蔗糖 30 g/ L , 琼脂 6 g/ L , pH=5.8;然后 , 在 MS
+BA0.25 mg/ L+IBA0.1 mg/ L , 琼脂 6 g/ L , pH 值为 5.8 的
培养基中 ,添加 20 g/ L 、30 g/ L、40 g/ L的蔗糖 , 以筛选影响嫩
茎增殖适宜的蔗糖浓度。试验还以 MS 为基本培养基 ,采用
L9(33)正交设计的方法分析了 BA 和 NAA浓度及 pH 值对钙
果 3 号嫩茎增殖的影响。 试验中 BA 浓度为 0.1 mg/ L、
0.15 mg/ L、0.2 mg/ L、NAA 浓度为 0.05 mg/ L、0.10 mg/ L、
0.15 mg/ L、pH 值为 5.4 、5.8、6.2 , 培养 4 周后调查增殖系数
和幼苗高度。试验还进行了壮苗培养基的筛选 , 以 MS 为基
本培养基 , NAA 浓度为 0 mg/ L、0.05 mg/ L 、0.07 mg/ L、0.1
mg/ L。继代培养中每处理接种 12 瓶 ,每瓶接种 5 株 ,在培养
4 周后调查增殖系数和幼苗高度。 生根培养以 1/2MS 为基
本培养基 , 添加蔗糖 15 g/ L , 琼脂 6 g/ L , pH 值为 6.2 , 进行了
IBA和 NAA 8 种不同浓度组合的培养基配比试验 , 以筛选适
宜的生根培养基。生根培养每个处理接种 60 株 , 20 d 后调查
平均生根率和平均生根条数。
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2　结果与分析
2.1　欧李茎段分生培养结果分析
表 1 列出了不同培养基对嫩茎侧芽分化的影响。可以看
出 , 2 号培养基平均分化率最高 , 为 90.4%;平均抽生新枝数
最多 , 为 4.5 个;幼苗也最高 , 为 1.3 cm , 明显优于其它培养
基。观察中发现 , 1 号培养基培养 7 d 嫩茎开始萌发 , 抽生新
枝长势良好 ,茎较粗壮 , , 叶片黄绿色 , 叶形狭长 , 茎基部有少
量黄白色愈伤组织;2 号培养基培养 5 d 开始萌发 , 抽生新枝
长势好 , 茎粗壮 , 枝叶展开 , 绿色 , 无愈伤组织;3 号培养基培
养 7 d 开始萌发 ,抽生新枝长势较弱 , 茎纤细 , 叶卷曲 , 有少量
黄白色愈伤组织;4 号培养基培养 10 d 开始萌发 ,抽生新枝数
量少 、生长势弱 , 叶黄绿而卷曲 , 有玻璃化现象。 综合分析表
明 ,培养基成分为 MS+BA1.0 mg/ L+IAA1.0 mg/ L 的 2 号
培养基更适宜欧李嫩茎侧芽分化培养。
　　表 1　不同培养基对钙果 3 号嫩茎侧芽分化的影响
培养基
代号
外植体总数
(个)
平均分化率
(%)
产生新枝总数
(个)
每个外植体
平均新枝数(个)
平均枝高
(cm)
1 40 82.5 152 3.8 1.2
2 42 90.4 189 4.5 1.3
3 38 71.1 84 2.2 0.8
4 36 30.8 61 1.7 0.7
2.2　欧李增殖培养结果分析
2.2.1　基本培养基对钙果 3 号试管苗嫩茎增殖的影响　表
2 列出了 3 种基本培养基对钙果 3 号试管苗增殖的影响。可
以看出 ,不同基本培养基间试管苗增殖系数和幼苗高度明显
不同 , 其中 MS 基本培养基幼苗增殖系数较高 ,为 3.32 , 株高
也较高 , 为 3.80 cm , 明显优于其它培养基。观察中发现 , 在
MS 基本培养基中钙果 3号试管苗粗壮 、长势较强 , 叶片厚而
平展 , 深绿色;B5 基本培养基幼苗长势较差 , 叶片小而卷曲 ,
并出现顶梢黄化现象;改良 White基本培养基幼苗细弱 、长势
差 ,叶片小而皱缩。可以看出 , MS 培养基为钙果 3 号试管苗
嫩茎增殖较适宜的基本培养基。
表 2　不同基本培养基对钙果 3 号试管苗嫩茎增殖的影响
培养基成分 接种株数(株) 增殖后株数(株) 增殖系数 转瓶时的株高(cm)
MS 60 199 3.32 a 3.80A
B5 60 154 2.56b 2.83B
改良 White 60 183 3.05ab 2.54B
表 3　不同蔗糖浓度对钙果 3号试管苗嫩茎增殖的影响
培养基
代号
蔗糖浓度
(g/L) 增殖系数 　　　　　生长情况
1 20 3.23 苗长势弱 ,叶片小 ,黄绿色 ,顶梢黄化 ,有少量愈伤组织
2 30 2.86 苗长势好 ,较壮 ,无愈伤组织
3 40 12.35 苗长势壮 ,较矮 ,有愈伤组织
2.2.2　不同蔗糖浓度对钙果 3 号试管苗嫩茎增殖的影响　
试验在 MS+BA0.25 mg/ L+IBA0.1 mg/ L 培养基中添加了
不同浓度的蔗糖 ,分析了蔗糖对钙果 3 号试管苗嫩茎增殖的
影响(表 3)。结果表明 , 蔗糖浓度对增殖系数和幼苗长势都
有影响 , 蔗糖浓度较低时幼苗增殖系数较低 , 生长势弱 , 叶片
小 ,易出现顶端黄化现象。蔗糖浓度为 30 g/ L～ 40 g/ L时 ,幼
苗生长势较强 ,植株粗壮 , 培养效果较好。蔗糖浓度为40 g/ L
时 ,幼苗增殖系数高达 12.35 ,不但基部分枝多 , 枝上还萌发
较多侧枝 , 但苗较矮 , 基部生成黄白色愈伤组织 , 而且在培养
两个月时幼苗仍能旺盛生长。
2.2.3　BA 和 NAA 浓度及 pH 值对钙果 3 号嫩茎增殖的影
响　试验以 MS 为基本培养基采用正交设计的方法分析了
BA 和 NAA浓度及 pH 值对钙果 3 号嫩茎增殖的影响(表 4)。
结果表明 , 在试验浓度范围内 , BA 和 NAA 浓度及 pH 值对增
殖系数和幼苗高度都有明显影响 , 三者间对增殖系数影响的
顺序为 BA>pH 值>NAA 。试验中利于幼苗增殖的培养基最
佳组合为 BA0.2 mg/ L , NAA0.05 mg/ L , pH 值 6.2。三者间
对幼苗高度影响的次序为 BA>NAA >pH 值 , 最佳组合为
BA0.1 mg/ L , NAA 0.1 mg/ L , pH 值 5.8。
　　表 4 BA 、NAA、pH 值配合使用对钙果 3 号
试管苗嫩茎增殖的影响
培养基代号 BA(mg/L) NAA(mg/L) pH值 增殖系数 试管苗高度(cm)
1 0.1 0.05 5.4 1.08 2.8
2 0.1 0.1 5.8 1.67 3.2
3 0.1 0.15 6.2 1.85 3.0
4 0.15 0.05 5.8 2.42 2.6
5 0.15 0.1 6.2 2.67 2.9
6 0.15 0.15 5.4 2.75 2.7
7 0.2 0.05 6.2 3.15 2.5
8 0.2 0.1 5.4 2.65 2.3
9 0.2 0.15 5.8 2.83 2.8
增 K1 1.53 2.22 2.16
殖 K2 2.61 2.33 2.31
系 K3 2.88 2.48 2.56
数 R 1.35 0.26 0.40
嫩 K1 3.13 2.63 2.60
梢 K2 2.73 2.80 2.87
长 K3 2.53 2.97 2.80
度 R 0.60 0.34 0.27
2.2.4　最佳壮苗培养基的筛选　试验中以正交试验筛选出
的最佳培养基组合进行继代扩繁培养时发现 , 虽然幼苗生长
速度快 、增殖系数高 ,但生长势较弱 , 不利于进一步的生根培
养。试验将幼苗转接到 MS 培养基 , 或添加少量生长素的培
养基中进行壮苗培养(表 5)。结果发现 ,在不加 NAA 的 MS 培
养基中幼苗较矮 ,部分苗褪绿死亡;NAA 浓度为 0.05 mg/ L
时 ,幼苗较矮 , 叶片也较小;NAA 浓度为 0.07 mg/ L时 ,幼苗
节间较短 , 幼茎粗壮 ,叶片较大而平展 , 呈深绿色;NAA 浓度
为 0.1 mg/ L时 , 幼苗节间长 ,叶片大 、叶色绿 ,有较明显徒长
现象;所以 , MS+NAA0.07 mg/ L为钙果 3 号试管苗最佳壮
苗培养基。
　　表 5　培养基对钙果 3 号试管苗壮苗的影响
培养基成分 试管苗生长情况 试管苗高度(cm)
MS 一部分苗褪绿死亡 2.1
MS+NAA0.05mg/L 叶片小 ,节间短 1.7
MS+NAA0.07mg/L 茎粗壮 ,叶片大 ,展开 2.5
MS+NAA0.10mg/L 间长 ,茎细弱 ,苗有徒长现象 3.6
2.3　生根培养
表 6 列出了欧李生根培养试验的调查结果。可以看出 ,
在培养基中不添加 IBA 时 ,随 NAA 浓度的增加 , 幼苗的生根
率和平均生根数逐渐增高;添加 IBA 后虽然幼苗的生根率和
平均生根条数也有增加的趋势 ,但幼苗的根系着生在愈伤组
织上 ,移栽时易脱落降低了幼苗移栽的成活率。在不添加
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IBA的培养基中 ,添加 NAA0.5 mg/ L 时虽然生根率最高 , 但
生根方式也为愈伤组织生根 , 移栽成活率较低;在 NAA0.4
mg/L 时 , 虽然生根率较低(72.3%), 但生根方式为基部直接
生根 ,移栽成活率较高。所以 , 欧李生根培养基以不添加 IBA
为宜 , 添加 NAA 的浓度也不宜过高 , 本试验中以 NAA0.4
mg/ L生根效果最好。
表 6　不同浓度的生长调节剂对钙果 3 号试管苗生根的影响
培养基代号 IBA/(mg/L) NAA/(mg/L) 生根率/ % 生根条数
1 - - 10.5 1.1
2 - 0.2 37.8 2.5
3 - 0.4 72.3 3.6
4 - 0.5 75.6 4.1
5 0.2 0.4 82.1 4.5
6 0.3 0.4 78.1 4.2
7 0.5 0.4 90.1 4.8
8 0.5 0.5 91.5 5.2
2.4　试管苗移栽
试验中组培苗根长 1 cm ～ 2 cm 时 , 选择苗高 2 cm ～
3 cm ,茎杆粗壮 ,叶片大而绿 , 生根质量好的幼苗进行移栽试
验。移栽时将生根苗连同培养瓶一起移入温室 , 用清水洗净
根部的培养基 ,移入人工配制的基质中保湿栽培。移栽基质
中含有草炭 、蛭石 、田园土 , 具备良好的透气性和良好的营养
条件。移栽前基质用多菌灵和甲基托布津消毒 , 装入营养钵
中浇透水后放置 24 h , 再移栽生根的组培苗 。欧李耐旱但不
耐涝 , 移栽后尽量减少浇水次数和水量 ,以免引起沤根 , 但要
注意保持一定的空气湿度。生根苗移入温室要注意通风 , 透
气 ,尽量保持和自然生长状态一致 , 10 d左右可移栽成活。
3　小结与讨论
　　在欧李组织培养过程中易产生组培苗玻璃化现象 , 给增
殖继代带来很大困难。玻璃化苗从外型上看多为水浸状 , 半
透明[ 7] , 叶片长而两侧边缘向外翻卷 , 繁殖系数下降 , 生根培
养效果差。据文献报道 ,培养基容器内的空气湿度过高 ,透气
性不好 , 光照不足 ,培养基中细胞分裂素过高都可引起组培苗
产生玻璃化。本试验中发现使用大口果酱瓶 ,透光性差;封口
的塑料膜透气性不好 , 使瓶内空气湿度增大 , 易产生水蒸汽影
响光照 , 引起幼苗产生玻璃化。实验中将大口玻璃瓶内的产
生玻璃化的苗转到带棉塞的透光性好的三角瓶中 , 降低了湿
度 , 提高了透光量 ,大大减轻了组培苗的玻璃化程度。
　　诱导外植体侧芽分化较适宜培养基为 MS+BA1.0 mg/ L
+IAA1.0 mg/ L;适宜嫩茎增殖的基本培养基为 MS;蔗糖浓
度在 30 g/ L～ 40 g/ L时 , 可有效的促进嫩茎增殖。培养基的
BA 和 NAA 含量及 pH 值对欧李增殖培养都具有明显影响 ,
三者的最佳组合为 BA0.2 mg/ L、pH 值 6.2、NAA0.05 mg/ L;
最佳壮苗培养基为 MS+NAA0.07 mg/ L;最佳生根培养基为
1/2MS+NAA0.4 mg/ L 。
　　欧李生根培养的效果受生长素影响较大。培养基中不添
加 IBA , NAA 的浓度较低时(0 mg/ L ～ 0.4 mg/ L), 生根方式
为幼苗基部直接生根 ,但生根率较低 , 平均生根条数也较少。
当添加 IBA时 , 生根率和生根条数都明显提高 , 但生根方式
多为愈伤组织生根 , 影响移栽成活率 , 其原因有待进一步研
究。
参考文献:
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名录[ M] , 1987.
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10.
　　温室里常见的害虫有蚜虫 、红蜘蛛 、白粉虱 、
根蛆 、跳虫等。其防治方法分别如下:
蚜虫:体黄绿色 , 长圆形 , 有三对足 , 体型很
小。多集中在心叶里 、叶片背面或幼嫩的茎上危
害。可喷洒 50%复果或灭蚜松 1 000 ～ 1 500 倍
液防治。
红蜘蛛:体红色 , 近圆形 , 有四对足 , 善爬行 ,
比蚜虫还小些。红蜘蛛主要危害叶片 , 受害叶片
有褪绿色的斑点 , 严重时变黄 、枯萎。防治时可喷
洒氧化乐果或复果 1 000 倍液。
白粉虱:大小和蚜虫相似 ,但体表面覆盖一层
白色的蜡质层 , 复眼是红色的。成虫有一对翅膀 ,
性活跃 , 受惊善飞翔。 白粉虱不但危害叶片 、果
实 ,排泄物还能污染叶面和果实表面 ,引起霉菌繁
殖 ,对品质影响很大。防治时可喷洒 5 000 倍溴
氰菊酯。
根蛆:是蝇类的幼虫 ,体乳白色头部尖 , 尾部
较粗 ,呈圆筒形 。体表光滑 、无足。根蛆主要危害
韭菜 、大葱的根部。韭菜受害后 , 根部腐烂 , 地上
部叶片枯萎 、死亡。防治时可用 90%敌百虫 800
倍液或 1 000倍液马拉硫磷灌根。
跳虫:体很小 ,黑褐色 , 腹部末端有个弹器 ,性
极活泼 , 善跳。在温室里主要危害黄瓜的幼苗叶
片 ,黄瓜幼苗叶片受害后 , 出现淡黄的斑点 , 严重
时出现小孔洞。可用 1 000 倍敌敌畏喷洒地表面
或植株下部的叶片进行防治。
(王忠民　河北省枣强县流常农牧服务中心 ,
053101)
温
室
害
虫
的
防
治
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