全 文 ：表 3　液体培养基菌体生长情况计数
Table 3　The Quanti ty of Saccharomycetes cerevisiae in liquid culture
组别 LB LB+提取物(2%)
LB+提取物
(4%)
LB+提取物
(6%)
LB+提取物
(8%) 组别 麦氏
麦氏+提取物
(2%)
麦氏+提取物
(4%)
麦氏+提取物
(6%)
麦氏+提取物
(8%)
1 5.2 5.6 9.6 11.2 6 1 5.6 7.2 7.6 10.8 5.8
2 8.2 7.8 8 9.6 8 2 6.6 5 8.6 9.6 6.8
3 5 3.4 7.8 8 6.8 3 4.2 3.6 6.2 8.6 6.2
4 4.6 5.2 7.6 8.6 5 4 5.6 5.2 8.2 7.8 8.8
5 3.4 5.8 6 6.6 5.2 5 3.4 5.8 5 7.6 4.8
　　(注:实验数据均为对酵母菌培养 48h后计数所得)
表 4　各组数据分析结果
Table 4　The analysis results of each group data
组 LB LB+提取物(2%)
LB+提取物
(4%)
LB+提取物
(6%)
LB+提取物
(8%) 组 麦氏
麦氏+提取物
(2%)
麦氏+提取物
(4%)
麦氏+提取物
(6%)
麦氏+提取物
(8%)
均数 5.53 5.56 7.8 8.62 6.2 均数 5.08 5.36 7.12 8.88 6.48
MS 组内 2.498 组间 10.87 MS 组内 1.907 组间 11.66
F0.05 F=4.35094 Fcrit=2.8660 F0.01 F=6.1149 Fcrit=4.430717
3　讨论
利用方差分析法[ 3]对各组数据进行分析的结果如表 4。
通过方差分析得知 ,在加大豆提取物的一系列培养基中 ,
LB 培养基及其加大豆提取物的各培养基之间比较 , F=4.
35904>Fcrit=2.8660 , 即 P<0.05 , LB 培养基与加大豆提取物
的各浓度的培养基之间对促进酵母菌的快速生长繁殖来说具
有明显差异。F=6.1149>Fcrit=4.430717 ,即 P<0.01 , 麦氏培
养基与加大豆提取物的各浓度的培养基之间对促进酵母菌的
快速生长繁殖来说差异极显著。 所以 , 大豆提取物的加入对
促进酵母菌的快速生长繁殖具有明显的促进作用 , 而且 ,在 LB
培养基和麦氏培养基中都是所加大豆提取物的浓度为 6%时 ,
对酵母菌的生长繁殖的促进作用最明显。因此 , 这类培养基
的设计是可以采用的 ,也是可行的。
由于大豆提取物的制备比较简便 , 来源丰富 , 容易获得 ,
同时 , 又由于它在促进酵母菌的快速生长繁殖具有明显的促
进作用 , 所以 ,由大豆提取物加入 LB 培养基或者加入麦氏培
养基制成的这一类培养基 , 既适用于实验室快速的酵母菌菌
种制作 , 也适用于工业生产中酵母菌菌种的快速制取 , 可以预
见这类培养基具有广阔的应用前景。
参考文献:
[ 1]沈萍 ,范秀容 ,李广武.微生物学试验[M].第 3版.北京:高等教育
出版社 , 1999 , 6.49.
[ 2]沈萍 ,范秀容 ,李广武.微生物学试验[M] .第 3版.北京:高等教育
出版社 , 1999.690-692.
[ 3] 盖钧镒.试验统计方法[ M] .第 3版.北京:中国农业出版社 , 2000,
9.132-125.
柔毛路边青挥发性成分研究
高玉琼1 ,3 ,王恩源2 ,赵德刚1 ,刘建华3 ,刘洋1(1.贵州省农业生物工程重点实验室 ,贵州 贵阳 , 550025;2.贵州神奇盛世制药有限责任公司 ,贵州 贵阳 550002;
3.贵州省生物技术研究开发基地 , 贵州 贵阳 550002)
摘要:目的:研究柔毛路边青(Herba gei)挥发油成分 , 为有效控制中成药蓝止安脑胶囊质量及中药二次开发提供理论依据。
方法:利用水蒸气蒸馏法提取柔毛路边青挥发油 , 用 GC/MS 进行分离测定 , 结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定 ,
应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:分离出 59个成分 , 确定了 43 个化合物 ,占挥发油总量的 87.51%。
结论:柔毛路边青挥发油成分大于 5%的为α-蒎烯 10.73%, 松金娘烷醇 13.63%,松金娘烯醛 7.19%, 松金娘烯醇 5.03%,二环
[ 3 , 1 , 1 , ] -6 , 6-二甲基-3-亚甲基庚烷 6.83%, 丁子香酚 15.82%。其中含量最高的物质为丁子香酚。
关键词:柔毛路边青;水蒸气蒸馏;挥发油;气相色谱-质谱联用
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2005)02-0052-03
Studies on the Chemical Constituents of the Volatile Oil from Herba gei
GAO Yu-qiong1 ,3 ,WANG En-yuan2 ,ZHAO De-gang1 ,LIU Jian-hua3 ,LIU Yang1
(1.Head Guizhou Key Laboratory of Agricutural Bioengineering , Guiyang 550025;2.Guizhou Shenqi Shengshi Pharmaceutical
Company LTD., Guiyang 550002;3.Guizhou Institute of Biotechnology Research and Development ,Guiyang 550002 ,P.R.of China)
Abstract:Objective:To study the chemical constituents of the volatile oil from Herba gei and give essential numbers for controlling quality and
studies.Methods:The oil was obtained by steam distillation.The chemical compositions were separated and identified by GC/MS.The relative con-
tents in the oil were determined by are a nomalization.Results:Fifty-nine components were detected in the volatile constituents of Caulis Lonicer-
ae.;of which forty-three components representing 87.51% of the oil were characterized.Conclusion:The major constituents areα-pinene 10.
73%,myrtanal 13.63%,myrtenal 7.19%,myrtenol 5.03%, bicydo[ 3 , 1 , 1] heptane , 6 , 6-dimethyl-3-methylene 6.83%, eugenol 15.82%
.The highest content in the oil is eugenol.
Key words:Herba gei;steam distillation;volatile oil;GC/MS
收稿日期:2004-10-09;修回日期:2005-01-09
专项资金:贵州省跨世纪科技人才工程专项资金资助项目[ “贵州生物
技术制药产业前期研究” ,黔科合人专字(2000)9816号]
作者简介:高玉琼(1958-),女 ,硕士 ,在读博士生 ,副研究员 ,研究方
向为植物成分研究 、新药研究与开发 ,获省市成果奖 4项 ,发表论文 10
余篇;赵德刚(1961-), 男 ,博士 ,博士生导师 , 教授 ,近五年主持完成
国家 、省基金项目等 4项 ,发表论文 20余篇 ,获省二等奖 、四等奖各 1
项 ,部一等奖 1项 ,2004年被评为全国模范教师。从事植物次生代谢
物质生物合成相关基因克隆 、植物生物反应器及安全利用转基因技术
等研究。
　　柔毛路边青(Herba gei)为蔷薇科植物柔毛路边青 Geum
japonicum Thunb.var.chinese F .Bolle的干燥全草 , 是贵州少数民
族用药[ 1] 。生于深山山坡草地 、田边 、河边 、灌丛及疏林下 , 分
布于我国西南 、华东 、中南 、陕西 、甘肃 、新疆等地区。性味苦 、
辛 , 性寒。归肝 、肾经[ 2 ,3] 。该品主要用于治疗头晕眩 , 是中药
蓝止安脑胶囊主要成分之一[ 4] , 为了更好地控制中药产品质
量 , 作者采用水蒸汽蒸馏法 ,利用气相色谱-质谱-计算机联
用系统对柔毛路边青植物挥发性成分进行了定性定量研究 ,
获得 59 个组分 ,鉴定出 43 个化合物。采用该方法对柔毛路边
青干燥全草进行挥发性成分研究属首次报道。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验材料
柔毛路边青干燥全草 , 产自贵州遵义 ,由贵州大学生物科
学与技术系植物学副教授关平鉴定为蔷薇科植物柔毛路边青
Geum japonicum Thunb.var.chinese F.Bolle干燥全草。
第 15卷第 2 期:52
2005 年 4 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.15 , No.2:52
Apr.2005
DOI :10.16519/j.cnki.1004-311x.2005.02.023
图 1　柔毛路边青GC/MS 图谱
1.1.2　试剂
正己烷 、无水硫酸钠 , 均为国产分析纯试剂。
1.1.3　仪器
美国惠普公司(Hcwlctt Packard)HP-6890/HP5973 GC-MS
气质联用仪;挥发油提取仪。
1.2　实验方法
1.2.1　柔毛路边青挥发油的提取
取柔毛路边青干燥全草 , 粉碎 , 取 250g , 加 8 倍量的水及
适量正己烷 ,进行水蒸气蒸馏 , 得混合油状物 1.2ml。收集上
层油状物 ,用无水硫酸钠干燥作为供试品。
1.2.2　柔毛路边青挥发油定性定量分析
取柔毛路边青水蒸气蒸馏供试品适量 ,直接进样 , 用 GC/
MS进行分离测定。
气相色谱条件SE-30弹性石英毛细管柱 30m×250μm×
0.25μm。柱温:50℃, 以 4℃·min-1升温至 100℃, 再以 3℃·
min-1升温至 170℃后 , 以 20℃·min-1升温至 280℃;汽化室温
度 250℃;载气:99.999%的氦气;柱前压:7.65Psi;载气流量:1.
0ml/min;进样量:1μl;流速:1ml/min;分流比比:40 :1。
质谱条件离子源:EI源;离子源温度:230℃;四级杆温度
150℃;电子能量:70eV;发射电流:34.6μA;倍增器电压:1
388V;接口温度:280℃;溶剂延迟:5 min;质量范围 10～ 550。
定性分析通过 HP MSD化学工作站检索Nist98 标准质谱图库
和WILEY275质谱图库,同时结合有关质谱图文献解析 ,确认柔毛
路边青挥发性物质的化学成分。
定量分析并通过HP MSD化学工作站数据处理系统 , 按峰
面积归一化法进行计算求出各化学成分的峰面积相对百分含
量。
2　结果
2.1　柔毛路边青挥发油的提取
水蒸气蒸馏后 ,收集上层油状物 , 获得混合油状物 1.2ml。
2.2　柔毛路边青挥发油定性定量分析
2.2.1　柔毛路边青化学组分 GC/MS 图谱
图 1为柔毛路边青 GC/MS 图谱 ,从图中可看出 , 含量大于
1%的成分主要在 20 min 以前。
2.2.2　柔毛路边青化学成分及峰面积相对百分含量:见表 1。
3　讨论
在柔毛路边青挥发性成分研究中 , 分离出 59 个成分 , 确
定了 43个化合物 , 占挥发油总量的 87.51%。柔毛路边青挥
发性成分中 ,含量大于1%的物质为 17 种 ,分别为α-蒎烯 10.
73%, 3-羟基-1-辛烯1-Octen-3-ol 1.73%, 3 , 7-二甲基
-3-羟基-1 , 6-辛二烯 L Linalool 1.29%,壬醛 1.24%, 反式
-松香芹醇 1.16%, 4-松油醇 1.27%, 松金娘烷醇 13.63%,α
-松油醇 2.68%,松金娘烯醛 7.19%, 松金娘烯醇 5.03%, 顺
-松金娘烷醇 1.10%, 二环[ 3 , 1 , 1 , ] -6 , 6-二甲基-3-亚甲
基庚烷 6.83%, 水芹醛 1.47%,丁子香酚 15.82%, 甲基丁子香
酚醚 2.99%,香叶基丙酮 1.12%, 6 , 10 , 14-三甲基-2-十五
烷酮 1.24%。
表 1　柔毛路边青化学成分及峰面积相对百分含量
No
RT
(min) Compound
Molecular
Fo rmula
Mole cular
Weight
Re lative
Conteat(%)
1 3.91 5-叔丁基-1 , 3-环戊二烯 1 ,3-Cyclopentadiene , 5-Tert -Butyl C9H14 122 0.22
2 4.32 1-己烯醇1-Hexanol C6H14O 102 0.61
3 4.98 庚醛Heptanal C7H14O 114 0.52
4 5.75 α-蒎烯α-Pinene C10H16 136 10.73
5 6.11 莰烯Camphene C10H16 136 0.33
6 6.26 (E)-2-庚烯醛(E)-2-Heptenal C7H12O 112 0.27
7 6.80 β-蒎烯 β-Pinene C10H16 136 0.57
8 6.86 3-羟基-1-辛烯1-Octen-3-ol C8H16O 126 1.73
9 7.03 6-甲基-5-庚烯-2-酮6-Methyl -5-Hepten-2
-one
C8H16O 126 0.58
10 7.15 2-戊基呋喃2-Pentyl furan C9H14O 138 0.62
11 7.20 6-甲基-2-羟基 -5-庚烯 6-Methyl -5-hepten
-2-ol
C8H18O 128 0.40
12 7.44 辛醛Octanal C8H18O 128 0.39
13 8.06 对异丙基苯甲烷 P-Cymene C10H14 134 0.33
14 8.16 柠檬烯 Linonene C10H16 136 0.49
15 8.23 桉树脑 1 , 8-Cineole C10H18O 154 0.20
16 8.60 苯乙醛 Phenylace taldehyde C8H8O 120 0.33
17 10.17 3 , 7-二甲基-3-羟基-1 ,6-辛二烯L Linalool C10H18O 154 1.29
18 10.25 壬醛Nonanal C9H18O 142 1.24
19 11.31 反式-松香芹醇 Trans-Pinocarveol C10H16O 152 1.16
20 12.41 4-松油醇Terpinen-4-ol C10H18O 154 1.27
21 12.55 松金娘烷醇Myrtanal C10H16O 152 13.63
22 12.80 α-松油醇α-Terpineol C10H18O 154 2.68
23 12.92 松金娘烯醛Myrtenal C10H14O 150 7.19
24 12.96 松金娘烯醇Myrtenol C10H16O 152 5.03
25 13.58 1 , 3 , 3 , -三甲基 -2-环己烯甲醛 β-Cyclo citral C10H16O 152 0.26
26 14.50 顺-松金娘烷醇 Cis-Myrtanol C10H18O 154 1.10
27 14.72 二环[ 3 , 1 , 1 , ] -6 ,6-二甲基-3-亚甲基庚烷 C10H16 136 6.83
Bicydo[ 3 , 1 , 1] heptane , 6 , 6-dime thyl-3-methylene
28 15.10 水芹醛 Phellandral C10H16O 152 1.47
29 15.36 乙酸-1-冰片醇酯1-Bornylacetate C12H20O2 196 0.37
30 15.54 2-十一烷酮2-Undecanone C11H22O 170 0.16
31 17.36 丁子香酚Eugenol C10H12O2 164 15.82
32 18.51 甲基丁子香酚醚Methyleugenol C11H14O2 178 2.99
33 18.94 β-石竹烯 β-Ca ryophyllene C15H24 204 0.35
34 19.10 α-Conone C13H20O 192 0.23
35 19.68 香叶基丙酮Geranylacetone C13H22O 194 1.12
36 19.80 α- 草烯α-Humulene C15H24 204 0.30
37 20.47 芳基姜黄烯Ar-Gurcumene C15H22 202 0.30
38 20.56 β-Conone C13H20O 192 0.92
39 20.63 β-芹子烯 β-Selinene C15H24 204 0.54
40 21.05 (E , E)-α-法尼烯(E, E)-Alpha-Farnesene C15H24 204 0.73
41 23.44 α-雪松醇α-Cedrol C15H26O 222 0.43
42 27.29 菲Phenanthrene C14H10 178 0.54
43 28.54 6 , 10 , 14-三甲基 -2-十五烷酮 2-Pentadecanone ,6 ,
10 , 14-trmethyl
C18H36O 268 1.24
Total 87.51
532005年 4 月　　　　　　　　　　　　　　　　　柔毛路边青挥发性成分研究　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
参考文献:
[ 1] 贵州省医药监督管理局.贵州省中药材 、民族药材质量标准[ S] .贵
州:贵州科技出版社 , 2003.387.
[ 2] 国家中医药管理局《中华本草编委会》.中华本草[M] .上海:上海科
学技术出版社 , 1999 ,4.151-153.
[ 3]江苏新医学院.中药大词典(上册)[ M] .上海:上海科学技术出版
社 , 1986.1751.
[ 4] 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编(内科心系 分册)[ S] .
2002.65.
发酵无花果香料的挥发性成分分析
林瑜1 ,徐若飞2 ,李祖红2 ,杨黎华1 ,李冰1 ,邓国宾1(1.云南瑞升科技有限公司 , 云南 昆明 650106;2.曲靖卷烟厂技术中心 , 云南 曲靖 655000)
摘要:利用微生物发酵无花果开发特色香料 ,并采用同时蒸馏萃取装置收集挥发性成分并用气相色谱-质谱仪对生物技术
制备的无花果香料挥发性成分进行分离和鉴定 , 经毛细管色谱分离出 47 种组分 , 确认了其中的 45 种成分 , 并用面积归一化法测
定了各种成分的百分含量 ,其主要成分为:9 , 12-十八碳二烯酸乙酯(27.34%)、十六酸乙酯(23.99%)、邻苯二甲酸二丁酯(6.
18%)、邻苯二甲酸二异丁酯(5.52%)、9 , 12-十八碳二烯酸甲酯(4.72%)、十六酸甲酯(4.67%)、9 , 12 , 15-十八碳三烯酸乙酯(4.
48%)、9-十八碳烯酸乙酯(3.80%)、糠醛(2.53%)、9 , 12 , 15-十八碳三烯酸甲酯(1.85%)、十八酸乙酯(1.42%)、9-十八碳烯酸
甲酯(1.26%)等。
关键词:无花果香料;发酵;同时蒸馏萃取;挥发性成分;气相色谱-质谱法
中图分类号:Q93.6　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2005)02-0054-03
Analysis of Volatile Composition in the Perfume
of Ficus Carica Lam.Produced by Fermentation
LIN Yu1 ,XU Ruo-fei2 ,LI Zu-hong2 ,YANG Li-hua1 ,LI Bi1 ,DENG Guo-bin1
(1.Yunnan Reascend Science &Technology Co.Ltd , Kunming 650106;
2.The Center of Technology , Qujing Cigarette Factory , Qujing 655000 ,P.R.China)
Abstract:The volatile compositions in the perfume of Ficus Carica produced by biological technology were prepared with simultaneous distillation
and extraction equipment(SDE).They were isolated and indentified by capillary GC-MS method.47 peaks were isolated and 45 compounds were
identified.The relative contents of constituents were determined by area normalization method.The main volatile compositions were:9 , 12-Oc-
tadecadienoic acid , ethyl ester(27.34%),Hexadecanoic acid , ethyl ester(23.99%),Hexadecanoic acid , ethyl ester(6.18%), 1 , 2-Benzened i-
carboxylic acid , bis(2-methylpropyl)ester(5.52%), 9 , 12 -Octadecadienoic acid ,methyl ester(4.72%),Hexadecanoic acid ,methyl ester(4.
67%), 9 , 12 , 15-Octadecatrienoic acid , ethyl ester(4.48%), 9-Octadecaenoic acid , ethyl ester(3.80%), Furfural(2.53%), 9 , 12 , 15-Oc-
tadecatrienoic acid ,methyl ester(1.85%), Octadecanoic acid , ethyl ester(1.42%), 9 -Octadecaenoic acid ,methyl ester(1.26%), etc.
Key words:perfume of Ficus Carica;fermentation;SDE;volatile composition;GC-MS　　无花果又名映日果 、隐花果 、蜜果 、奶浆果 、品仙果 , 为桑
科榕属多年生落叶灌木或乔木 , 有悠久的栽培历史。主要生
长在亚洲 、非洲 、欧洲 、美洲等亚热带地区 , 我国主要集中在新
疆及黄河以南各地。果实供应市场的时间很长 , 从 6 月一直
到10月 , 果肉软甜似蜜 , 味甘如香蕉 , 香气醇厚浓郁 , 很受人
们的喜爱。其含有丰富的葡萄糖 、果糖 、氨基酸 、维生素 、矿质
元素 、蛋白分解酶 , 是新一代的营养保健水果。无花果是高品
味的药 、食两用佳品。有驱除人体内的铅 、抗癌 、降低胆固醇
和血糖 、抗衰老等功能 , 对心 、脑血管硬化及糖尿病具有治疗
作用 , 对脂肪肝有一定疗效[ 3-6] 。无花果还是一种传统的烟
草加料原料在卷烟中具有增补烟香 , 增加烟草中的烘烤香 , 缓
和刺激 ,矫正吸味等作用。
对无花果化学成分的相关报道主要侧重无花果本身香气
的研究 , 其主要方法是利用超临界 CO2 流体萃取法制备无花
果挥发油 , GC-MS 分析其香味成分[ 8] ,以及对无花果主要成
分进行提取分离及应用作了相关报道[ 9] 。利用微生物法处理
无花果仅用于无花果酒的酿造[ 7] , 通过微生物发酵制备无花
果香料并进行挥发性成分分析还未见报道。本研究以无花果
为原料 ,经微生物处理得到天然无花果香料 , 利用同时蒸馏萃
取技术(SDE)和气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析无花
果香料中的挥发性成分[ 10] , 以期能对无花果的化学成分有一
定了解 ,为进一步开发利用无花果这一丰富的植物资源提供
理论依据。
收稿日期:2004-07-27;修回日期:2005-01-20
横向项目:云南烟草专卖局资助项目(“烟用功能添加剂的研制开发及
对卷烟产品提质研究” , 2004E04)
作者简介:林瑜(1981-),女 ,学士 ,助理工程师 ,研究方向为天然烟用
香精香料产品研究与开发 , Tel:0871-8321871 , 8322943 , E-mail:linyu
linmai l@sina.com。
1　材料与方法
1.1　材料 1.1.1　实验材料
无花果(Ficus Carica)qu-001 微生物产香菌株;酵母(市
售 , 湖北安琪酵母股份有限公司)。
1.1.2　试剂:酵母浸膏 、蛋白胨 ,生化试剂 , 北京奥博星生物技
术有限公司;葡萄糖 、氯化钾 、二氯甲烷 , 分析纯 , 天津市博迪
化工有限公司。
1.1.3　仪器设备
微型植物样本粉碎机(河北省黄骅中兴仪器有限公司);
DL302 型调温调湿箱;恒温培养摇床(哈尔滨东联技术开发有
限公司);GC/MS(FINNIGAN TOP 8000/VOYAGER)仪;同时蒸馏
提取器 , 实验室自制;恒温培养箱 , 宁波自动化仪表研究所;
BUCHIR-3000型旋转蒸发仪。
1.1.4　培养基
发酵液:酵母膏 5g , 蛋白胨 10g , 葡萄糖 1g , 氯化钾 2g , 水
1000ml。
1.2　方法
1.2.1　样品处理
按照固∶液=2∶1 的比例配制无花果发酵组分 , 经过生物
发酵后 ,取 100g物料加入 75%乙醇 200ml , 加热回流提取 3h ,
过滤 , 向剩余物中再加入 75%乙醇(淹没)加热回流提取 3h , 过
滤 ,再加入75%乙醇(淹没)加热回流提取 3h ,过滤。合并 3 次
滤液 , 静置过夜 ,取上清液 ,用 BUCHIR-3000 型旋转蒸发仪于
60℃蒸馏除去乙醇 , 所得香料再用 200ml 95%乙醇进行回溶 ,
静置过夜后 , 取上清液减压浓缩至膏状。制得无花果香料。
1.2.2　同时蒸馏萃取
将无花果香料 25g 放入同时蒸馏萃取装置一端的 500ml
圆底烧瓶中 , 加入 250ml蒸馏水 ,用电热套加热;装置的另一端
为盛 25ml二氯甲烷的 100ml圆底烧瓶 , 在 60℃下水浴加热 , 同
时蒸馏萃取 3h。二氯甲烷萃取液用无水硫酸钠干燥 ,置于 4℃
过夜 , 过滤 , 滤液倒入浓缩瓶中用 Vigreux 柱浓缩至约 1ml , 浓
缩液用于 GC-MS 分析。
第 15卷第 2 期:54
2005 年 4 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.15 , No.2:54
Apr.2005