全 文 ：收稿日期：２０１２－０６－２６
＊通讯作者：段祖安
文章编号：１００２－２７２４（２０１２）０４－００４５－０４
垂丝海棠离体快繁技术体系的研究＊
许以太１，邓兆华２，张　鹏３
（１．冠县林业局，山东 冠县２５２５００；２．山东林业信息中心；３．山东省林业监测规划院）
摘要：以垂丝海棠茎段为外植体，探讨不同植物激素６－ＢＡ、ＫＴ、ＩＢＡ、ＩＡＡ的浓度对试管苗增殖以及植株再生的影响。
实验结果表明：垂丝海棠的初代培养基为 ＭＳ＋ＫＴ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ，分化培养培养为 ＭＳ
＋６－ＢＡ１．５ｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋糖２０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ培养基，生根培养为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０１．５ｍｇ／Ｌ＋糖２０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５
ｇ／Ｌ。通过正交试验也得出同样的结论。炼苗移栽时，土与蛭石（１：１）基质配比成活率最高，且生长旺盛。
关键词：垂丝海棠；组织培养；正交试验；快速繁殖
中图分类号：Ｓ６８５．９９　　　　　　　　文献标识码：Ａ　
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｆａｃｔｏｒｓ　Ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　Ｍａｌｕｓ　ｈａｌｌｉａｎａ　Ｋｏｅｈｎｅ　Ｒａｐｉｄ　Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｕｌｔｕｒｅ
（１．Ｇｕａｎ　Ｃｏｕｎｔｙ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　２５２５００；２．Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ；，
３．Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　Ｐｌａｎｎｉｇ　Ｉｎ　ｓｔａｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍａｌｕｓ　ｈａｌｌｉａｔｉａ　Ｋｏｅｈｎｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔ，ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｐｒｏｂｅｓ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｈｙｔｏｈｏｒ－
ｍｏｎｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　６－ＢＡ，ＫＴ，ＩＢＡ，ＩＡＡ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ｐｌａｎｔ　ａｂｏｕｔ　ｃｕｖｅｔｔｅ　ｓｅｅｄ－
ｌｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｆｉｒｓｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｓ　ＭＳ＋ＺＴ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｇａｒ３０ｇ／Ｌ＋
ａｇａｒ６．５ｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５ｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｇａｒ２０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ６．５ｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ
ｒｏｏｔｉｎｇ　ｉｓ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０１．５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｇａｒ２０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ６．５ｇ／Ｌ，ａｎｄ　ｓａｍｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｓ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ．ｂａｓｉｃ　ｒａｔｅ
（１：１）ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｏｉｌ　ａｎｄ　ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ　ｈａｓ　ｈｉｇｈ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗｈｅｎ　ｏｎｅ　ｉｓ　ｐｌａｎｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｒａｉｎｄｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍａｌｕｓ　ｈａｌｌｉａｔｉａ　Ｋｏｅｈｎｅ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔｓ　ｐｌａｎｔｌｅｔ；ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
　　垂丝海棠（Ｍａｌｕｓ　ｈａｌｌｉａｔｉａ　Ｋｏｅｈｎｅ）是蔷薇科
苹果属、中国的特有植物，乔木。分布于中国大陆的
安徽、陕西、江苏、浙江等地，生长于海拔５０～１，
２００ｍ的地区。垂丝海棠性喜阳光，不耐阴，稍耐
寒，对土壤要求不严。宜植于小径两旁，或孤植、丛
植于草坪上；植于水边，犹如佳人照碧池；对二氧化
硫有较强的抗性，故适用于城市街道绿地和厂矿区
绿化，也是制作盆景的材料。生产上多数采用嫁接
繁殖，繁殖周期长，通过组织培养，能够显著提高垂
丝海棠的数量，迅速普及其应用。本研究以垂丝海
棠茎段为试材，并首次通过正交分析探讨不同激素
对垂丝海棠增高的影响［４］，旨在为垂丝海棠离体诱
变和生产应用打下良好的基础。
１　材料和方法
１．１　材料
来源于济南植物园，取当年生垂丝海棠茎段。
１．２　方法
１．２．１　培养条件　改良 ＭＳ培养基，附加２０ｇ／Ｌ～
３０ｍｇ／Ｌ的蔗糖，６．５ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ为５．８～６．０，光
照１６ｈ，培养温度（２５±２）℃，光照强度３０００ｌｘ。
１．２．２　材料处理　剪去当年生枝条上的叶片，自来
水冲洗干净，放入自制的消毒液和０．１％氯化汞中５
～３５分钟，在无菌室中的工作台上，无菌水冲洗２～
３遍，于无菌瓶中。
１．２．３　正交试验［５］　将垂丝海棠茎段接入附加不
同种类、不同浓度激素的培养基中。试验方案按Ｌ８
（２３）正交设计［６］（表１）。
１．２．４　ＮＢＡ生根试验　取继代培养３ｃｍ以上试
管苗，接种到附加不同浓度ＮＢＡ的１／２改良ＭＳ培
养基中。每个处理接种１０株，培养时间３０天，生根
后对其进行炼苗、移栽。
·５４·
山东林业科技　　２０１２年第４期　　总２０１期　　ＳＨＡＮＤＯＮＧ　ＦＯＲＥＳＴＲＹ　ＳＣＩＥＮＣＥ　ＡＮＤ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　　２０１２．Ｎｏ．４
表１　正交表
Ｔａｂｌｅ１　Ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔａｂｌｅ
Ａ　 Ｂ　 Ａ×Ｂ　 Ｃ　 Ａ×Ｃ　 Ｂ×Ｃ
１　 １　 １　 １　 １　 １
１　 １　 １　 ２　 ２　 ２
１　 ２　 ２　 １　 １　 ２
１　 ２　 ２　 ２　 ２　 １
２　 １　 ２　 １　 ２　 １
２　 １　 ２　 ２　 １　 ２
２　 ２　 １　 １　 ２　 ２
２　 ２　 １　 ２　 １　 １
注：Ａ６－ＢＡ为２水平１．５ｍｇ／Ｌ，２．５ｍｇ／Ｌ；ＢＩＢＡ为２水平浓度
０．１ｍｇ／Ｌ，０．２ｍｇ／Ｌ；ＣＩＡＡ为２水平浓度０．２ｍｇ／Ｌ，０．３ｍｇ／Ｌ；×：
代表互作。
２　结果与分析
２．１　不同灭菌剂的灭菌时间对消毒效果的影响
图１　不同消毒时间对垂丝海棠茎段消毒效果的影响
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔ
注：每个时间段接种１０个外植体
灭菌试剂采用０．１％的氯化汞和自配的消毒
剂，灭菌效果如图１，试验结果表明，使用自制的消
毒液对垂丝海棠茎段灭菌时，以２５ｍｉｎ为宜，污染
率与杀死率降到最低，成活率最高可达７５％（见图
１）。灭菌时间短，杀死率低，污染率提高，成活率降
低；灭菌时间过长，污染率降低，但杀死率升高，成活
率同样也降低。采用氯化汞灭菌时，只有在消毒时
间５分钟时，成活率为５０％，随着时间的延长，接种
成活率逐渐降低，而杀死外植体几率增大，成活率也
降低，从图１可以看出，自配消毒剂在消毒时间和存
活率关系上，影响较小。
２．２　初代接种芽生长情况
初代培养３０ｄ左右，部分茎段可直接诱导产生
萌生芽，在附加 ＫＴ０．６ｍｇ／Ｌ和ＩＡＡ０．５ｍｇ／ＬＭＳ
中，不定芽的萌芽率最高，达到９０％，见表２。
表２　初代接种萌芽率
Ｔａｂｌｅ２　Ｔｈｅ　ｂｕｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｆｉｒｓｔ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ＫＴ
浓度（ｍｇ／Ｌ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ＫＴ
ＩＡＡ
浓度（ｍｇ／Ｌ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　ＩＡＡ
出芽数
Ｎｕｍｂｅｒｓ
ｏｆ　ｂｕｄｓ
出芽率（％）
Ｂｕｄ　ｒａｔｉｏ
１
２
３
４
５
６
７
８
９
０．２
０．２
０．２
０．６
０．６
０．６
１．０
１．０
１．０
０．５
０．８
１．２
０．５
０．８
１．２
０．５
０．８
１．２
３
５
３
９
８
７
７
２
１
３０
５０
３０
９０
８０
７０
７０
２０
１０
２．３　不同激素对垂丝海棠植株生长的影响
２．３．１　６－ＢＡ对垂丝海棠分化生长的影响　在
ＭＳ培养基上，附加６－ＢＡ（０．５～２．０ｍｇ／Ｌ）范围的
激素，垂丝海棠增高均高于对照（照培养基中附加
ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ和ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ）；当６－ＢＡ 浓度为
１．５ｍｇ／Ｌ时植株生长最快，随着６－ＢＡ浓度的加
大，生长高度明显降低，当６－ＢＡ的浓度达到２ｍｇ／
Ｌ以上时，植株的增高不明显，随着激素浓度的增加
植株的增长速度逐渐变慢（图２）。
图２　６－ＢＡ对垂丝海棠增长率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　６－ＢＡ　ｏｎ　ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｒａｔｅ
注：增高率为６－ＢＡ培养基中的垂丝海棠平均高与ＺＴ培养基
中平均高之差同ＺＴ培养基中平均高的百分比。
２．３．２　ＩＢＡ对垂丝海棠植株的影响　ＩＢＡ浓度为
０．２～０．５ｍｇ／Ｌ时，会显著促进垂丝海棠植株的增
高；但当ＩＢＡ浓度大于等于０．６ｍｇ／Ｌ时，明显抑制
植株的增高（图３）。
图３　ＩＢＡ对植株增高率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＩＢＡ　ｏｎ　ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｒａｔｅ
·６４·
山东林业科技　２０１２年第４期
在试验中观察到，较低浓度的ＩＢＡ 可以诱导垂
丝海棠生根。多数植株附加ＩＢＡ 水平在０．４～０．６
ｍｇ／Ｌ的培养基上培养４０ｄ时已生根。
２．３．３　ＩＡＡ对垂丝海棠植株的影响　ＩＡＡ的浓度
范围为０．２～１．６ｍｇ／Ｌ时，对垂丝海棠植株的增长
有促进作用（图４）。ＩＡＡ同ＩＢＡ类似，其显著的特
点是可以诱导垂丝海棠生根和生成愈伤组织。在试
验中发现，垂丝海棠在ＩＡＡ的浓度为１．２ｍｇ／Ｌ时
增高最明显。附加上述任何激素，浓度超过一定的
范围，基部都会产生愈伤组织，说明上述激素可以诱
导垂丝海棠愈伤组织形成。
图４　ＩＡＡ对植株增高率的影响
Ｆｉｇ４　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＩＡＡ　ｏｎ　ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｒａｔｅ
２．４　正交试验分析
通过正交分析来进一步证实各种激素对垂丝海
棠的作用（见表３）。
表３　正交分析表
Ｔａｂｌｅ．３　Ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｔａｂｌｅ
水平列
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
１Ａ ２Ｂ ３Ａ×Ｂ　４Ｃ ５Ａ×Ｃ　６Ｂ×Ｃ
增高率％
Ｈｅｉｇｈｔ
ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｒａｔｅ
１
２
３
４
５
６
７
８
１
１
１
１
２
２
２
２
１
１
２
２
１
１
２
２
１
１
２
２
２
２
１
１
１
２
１
２
１
２
１
２
１
２
１
２
２
１
２
１
１
２
２
１
１
２
２
１
０．１９
０．４７
１．２４
１．３９
０．１０
０．１９
０．５４
０．３０
表３经ＳＡＳ分析可知：Ｐｒ＞Ｆ＝０．０４１８＜０．０５，
则ＡＢＣ三因素存在显著的差异，在Ｃ因素中，由于
Ｐｒ＞Ｆ＝０．３６３８＞０．０５，所以Ｃ因素作用不显著。
在Ａ因素的２水平中，由于 Ａ１水平为０．８１大于
Ａ２水平的０．２８５，所以 Ａ 因素的 Ａ１水平作用显
著。在Ｂ因素中，由于Ｂ因素的Ｂ２水平０．８９大于
Ｂ１水平的０．２４７５，所以Ｂ２水平作用显著。总上所
述ＡＢ二因素的最佳水平组合为 Ａ１Ｂ２，即 ＭＳ＋６
－ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ
２．５　不同的ＩＢＡ浓度对垂丝海棠生根的影响
将生长到３ｃｍ以上的试管分化苗，接种到附加
不同浓度ＩＢＡ的１／２改良 ＭＳ培养基中（ＩＢＡ的浓
度从左到右依次为０．５、１、１．５、２、２．５ｍｇ／Ｌ），由图５
可见，垂丝海棠在ＩＢＡ的浓度为１ｍｇ／Ｌ～１．５ｍｇ／Ｌ
时生根长且粗壮，生根率达８０％以上。随着激素浓
度的增高垂丝海棠根变短变细成须根状，易掉，且在
移栽时培养基不易洗净，成活率很低。
图５　ＩＢＡ浓度与垂丝海棠生根率和移栽成活率的关系
Ｆｉｇ５　Ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｏｏｔａｇｅ　ｒａｔｅ　ｏｎ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＢＡ
注：每个激素浓度接种１０个外枝体
２．６　炼苗与移栽
将土与蛭石１∶１的比例配制成垂丝海棠移栽
基质。取ＩＢＡ各浓度生根良好的试管苗１０株进行
炼苗。在温室中保持空气湿度７５％左右，开口炼苗
５～７天后，取出组培苗，洗净培养基栽于基质并用
塑料薄膜保湿１０～１５天，２０天后统计成活率（图
５）。其中ＩＢＡ 浓度为１．５ｍｇ／Ｌ时其成活率可达
９５％。综合考虑生根与炼苗状况诱导垂丝海棠生根
培养基选用１．５ｍｇ／Ｌ为宜。
３　讨论
３．１　垂丝海棠在离体培养时，在启动培养时，对
ＺＴ比较敏感，容易萌发不定芽。采用ＺＴ，有利于
缩短培养周期。
３．２　通过正交试验进一步说明，ＩＢＡ和ＩＡＡ虽然
都对垂丝海棠的萌发有促进作用，但是不如ＩＢＡ效
果明显，这可能是与激素的结构有关系。因此，在试
验中要确定最佳的培养基配方，一定要考虑到激素
之间的相互作用。
３．３　当垂丝海棠生根培养基附加１．５ｇ／Ｌ的活性
炭时，根细且色发黄，成活率低。 （转第２８页）
·７４·
山东林业科技 许以太等：垂丝海棠离体快繁技术体系的研究 ２０１２年第４期
２．２．４　丹顶鹤年度变化分析
丹顶鹤不同时期数量变化参图５。
图５　不同时期丹顶鹤的数量变化曲线图
从图５可以看出，丹顶鹤南迁期和北迁期的数
量呈总体的上升趋势，越冬期数量呈微弱的下降趋
势。丹顶鹤是黄河三角洲地区的常见鹤类，在整个
调查期内都有记录。丹顶鹤的变化直接反映了保护
区在调查期内丹顶鹤生境的变化情况，越冬期丹顶
鹤的生境主要为以小麦为主要生境类型的农田，近
几年随意农业产业结构的调整，小麦改变为棉花，使
丹顶鹤越冬生境丧失，改为芦苇沼泽和滩涂生境越
冬。在迁徙期，丹顶鹤的停歇地主要为芦苇沼泽和
滩涂，近几年保护区实施了湿地恢复工程，大面积退
化湿地恢复为芦苇沼泽，促使丹顶鹤数量增加，在有
的年份甚至出现数量高峰。
２．２．５　灰鹤年度变化分析
灰鹤不同时期数量变化参图６。
图６　不同时期灰鹤的数量变化曲线图
从图６可以看出，各个时期的灰鹤呈明显的下
降趋势。在上世纪初，灰鹤在保护区的数量超过
２０００只［５］，而在１９９８～２００６年间的调查数据显示，
灰鹤的数量呈锐减趋势，这与黄河三角洲生境类型
的改变有直接关系。小麦、大豆为主的农田生境是
灰鹤的主要适宜生境，农业结构的调查使这些生境
类型改变，在１９９８～２００６年间调查到的灰鹤主要集
中在滩涂、草地、芦苇沼泽及盐池等生境，种群数量
分散，数量也没有达到上世纪初的水平。
２．２．６　沙丘鹤年度变化分析
沙丘鹤在中国可能是迷鸟［６］，保护区发现的沙
丘鹤是２００６年１１月５日与灰鹤混群，经拍照后确
认，数量为１只。
２．２．７　蓑羽鹤年度变化分析
蓑羽鹤在保护区可能是偶见鹤类，１９９２年曾有
不得３只记录［７］。在１９９８～２００６年间调查中，仅
１９９９年南迁期调查到一次，数量为１只。
参考文献：
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ｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎ　Ｓｉｂｅｒｉａ　ａｎｄ　Ｃｈｉｎａ　ａｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ｓａｔｅｌｉｔｅ　ｔｒａｃｋ－
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ｃａｔｉｏｎ　ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　ｈｏｕｓｅ：１２４
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Ａ　Ｆｉｅｌｄ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｂｉｒｄｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ．Ｃｈａｎｇ　Ｓｈａ：ＨｕＮａｎ　ｅｄｕ－
ｃａｔｉｏｎ　ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　ｈｏｕｓｅ：
櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍
１２４
（接第４７页）
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·８２·
山东林业科技　２０１２年第４期