全 文 ：周金梅． 欧李芽离体诱导培养技术研究［J］． 江苏农业科学，2011，39(6) :97，110．
欧李芽离体诱导培养技术研究
周金梅
(吉林农业科技学院，吉林吉林 132101)
摘要:采用 4 种不同的愈伤组织培养基和 4 种不同的芽分化培养基诱导欧李离体芽，以筛选出最佳的诱导方法。
结果表明，欧李芽离体诱导最佳培养途径:在 MS + KT 0． 2 mg /L + 2，4 － D 0． 25 mg /L的培养基上诱导出愈伤组织，然
后将愈伤组织转接到 MS + 6 － BA(或 KT)1． 0 mg /L + NAA 0． 5 mg /L进行芽分化。
关键词:欧李;愈伤组织;芽诱导;培养基
中图分类号:S662． 303 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2011)06 － 0097 － 01
收稿日期:2011 － 07 － 15
作者简介:周金梅(1976—) ，女，吉林吉林人，硕士，讲师，研究方向为
园艺植物的育种与栽培。E － mail:jiandefeng@ sohu． com。
欧李(Prunus humilis Bunge Sok)为蔷薇科李属中的一种
小灌木。该树种果实含有多种对人体有益的矿质元素，特别
是钙元素的含量比一般水果都高，为了突出其钙含量高这一
特点，便有了商品名称“中华钙果”;但目前欧李在市场上并
不常见，因此，其开发和利用蕴含着较大的潜在经济价值。在
吉林长白山及其余脉山区分布着众多野生欧李，其人工栽培
较少，主要原因是欧李为异花授粉植物，受外界环境条件影响
较大，实生后代中易出现变异，繁殖系数较低［1］。随着离体
培养技术的发展，其快速、高效、保持品种优良性状的繁殖特
点，使得尝试采用离体培养技术进行欧李繁育具有重要意义。
参照同属其他树种的离体培养资料，发现同属其他大部分树
种的离体培养途径为:芽—愈伤组织—不定芽—扩繁—生
根—成苗。在这个过程中，通过芽诱导出愈伤组织的数量和
质量，以及愈伤组织形成不定芽的多少，对其后期扩繁非常关
键。因此本试验着重进行欧李芽诱导阶段的研究，选择欧李
的芽作为外植体，通过不同的培养基配方诱导愈伤组织和芽
分化，以筛选出欧李离体培养的最佳诱导方法。
1 材料与方法
1． 1 供试材料
母树为经过实生选种的优良品种，种植于吉林农业科技
学院园艺场，树龄 3 年，挑选健壮、无病虫害的苗木，选择生长
势旺盛的若干芽为外植体，剪取待用。
1． 2 仪器与设备
高压灭菌锅、分析天平、超净工作台、镊子、剪刀、乙醇灯、
培养皿、滤纸、100 mL三角瓶若干等。
1． 3 试验方法
1． 3． 1 培养基 愈伤组织诱导培养基为 4 种配方，分别为
J1:MS + KT 0． 1 mg /L + 2，4 － D 0． 25 mg /L;J2:MS + KT
0． 2 mg /L + 2，4 － D 0． 25 mg /L;J3:MS + KT 0． 25 mg /L + 2，4
－ D 0． 25 mg /L;J4:MS + KT 0． 3 mg /L + 2，4 － D 0． 25 mg /L。
分化培养基为 4 种配方，分别为 Y1:MS + 6 － BA 0． 5 mg /L +
NAA 0． 5 mg /L;Y2:MS + 6 － BA 1． 0 mg /L + NAA 0． 5 mg /L;
Y3:MS + KT 0． 5 mg /L + NAA 0． 5 mg /L ;Y4:MS + KT
1． 0 mg /L + NAA 0． 5 mg /L。以上各种培养基均添加琼脂
7 g /L、蔗糖 30 g /L，pH值 5． 8 ～ 6． 0［2 － 3］。
1． 3． 2 材料处理 将采集的芽清洗后用 75% 乙醇浸泡
15 min，然后再用 50 mg /L 84 消毒液消毒 20 min，无菌水冲洗
干净后在超净工作台内接种，分别接入上述 4 种愈伤组织培
养基，第 2 天开始观察外植体生长情况及愈伤组织形成时期，
统计愈伤组织发生率。愈伤组织生长旺盛阶段，将其转入
4 种分化培养基，观察不定芽萌发情况［4］。
1． 3． 3 培养 培养室光温可控，温度控制在 18 ～ 22 ℃，湿度
在 80%左右，光照度 1 500 ～ 2 500 lx，光照时间 8 ～ 12 h /d［5］。
2 结果与分析
2． 1 愈伤组织诱导情况
由表 1 可见，4 种培养基均可以诱导欧李芽外植体愈伤
组织的形成，J2 最早形成愈伤组织，其他培养基陆续形成愈伤
组织。相比较而言，J2、J3 愈伤组织形成时间较早，出愈率分
别达到 87． 5%和 75． 0 %。40 d转瓶后计算出的平均愈伤组
织生长量，最高为 J2，达到 7． 2 g，其次为 J3、J4。可见
0． 2 mg /L KT + 0． 25 mg /L 2，4 － D 对欧李愈伤组织诱导效果
较好。
表 1 4 种培养基上欧李外植体愈伤组织诱导情况
诱导
培养基
KT浓度
(mg /L)
接种数
(瓶)
出愈率
(%)
开始出愈
时间(d)
平均愈伤组
织生长量(g)
J1 0． 1 40 62． 5 14 3． 9
J2 0． 2 40 87． 5 9 7． 2
J3 0． 25 40 75． 0 13 5． 8
J4 0． 3 40 52． 5 13 5． 2
2． 2 不定芽分化情况
将愈伤组织转瓶后，在 4 种分化培养基上芽分化有一定
差异。Y1、Y3 40 d左右形成不定芽，Y2、Y4 30 d 左右形成不
定芽，每种培养基上都会产生不同程度须状根。
2． 2． 1 不同分化培养基上分化情况 由图 1 可见，培养基
Y2 中芽分化率高达 80%，其次是 Y4，分化率达到 78%，Y1、
Y3 不定芽分化率相对较低。可见 6 － BA 和 KT 在欧李愈伤
组织不定芽分化上都有促进作用，只是添加量不同。
(下转第 110 页)
—79—江苏农业科学 2011 年第 39 卷第 6 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2011.06.213
作用更大。有关 NaCl 和 Na2CO3 对甜叶菊的盐害机制仍有
待进一步研究。
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216 － 220．
(上接第 97 页)
2． 2． 2 已分化培养基上分化情况 由表 2 可见，Y2、Y4 培养
基形成不定芽的时间比较早，约 30 d;但从平均分化出不定芽
的数量来看，Y4 最多，平均为 4． 6 个，其次为 Y2，为 4． 2 个，说
明 Y4、Y2 对于欧李芽愈伤组织分化不定芽效果较好。
表 2 不同分化培养基分化情况
分化
培养基
转接数
(瓶)
成活数
(瓶)
分化不
定芽数
(瓶)
最早形成
不定芽的
时间(d)
平均
芽数
(个 /瓶)
Y1 20 20 12 38 3． 2
Y2 20 20 16 29 4． 2
Y3 20 19 13 41 3． 6
Y4 20 18 14 32 4． 6
3 结论
从 4 种诱导培养基添加的不同浓度 KT对欧李芽外植体
愈伤组织诱导的影响结果来看，每个添加浓度都可以诱导出
愈伤组织，可见以 MS为基本培养基，选择 KT和 2，4 － D诱导
欧李愈伤组织是可行的;但诱导效果有一定的差异，从出愈率
来看，各配方均有一定的出愈率，而且出愈率均大于 50%，因
此欧李采用芽作为外植体是很容易进行组培育苗的。综合比
较出愈率是 J2 ＞ J3 ＞ J1 ＞ J4，愈伤组织平均生长量为 J2 ＞ J3 ＞
J1 ＞ J4，J2 添加浓度与水平无论出愈率还是生长量，均优于其
他配方，即 0． 2 mg /L KT + 0． 25 mg /L 2，4 － D 相结合对诱导
欧李芽愈伤组织是最佳选择。综合不定芽分化情况，4 种分
化培养基上均有不定芽形成，体现细胞分裂素 6 － BA 和 KT
对促进愈伤组织芽分化起主导作用;但 4 种分化培养基上的
分化情况不同，相对而言，6 － BA 和 KT 均以 0． 5 mg /L 处理
的分化率、分化芽数低于 1． 0 mg /L 处理，6 － BA 和 KT 添加
量均以 1． 0 mg /L为好。
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—011— 江苏农业科学 2011 年第 39 卷第 6 期