全 文 ：收稿日期:2014 － 04 － 07;修订日期:2014 － 05 － 07
作者简介:王晓炜(1977 －) ，女，辽宁大连人，硕士，实验师，从事细胞生物学研究。
第 32 卷 第 3 期
2014 年 6 月
江 西 科 学
JIANGXI SCIENCE
Vol． 32 No． 3
Jun． 2014
文章编号:1001 － 3679(2014)03 － 0338 － 04
翼柄山莴苣愈伤组织分化及试管苗培养的研究
王晓炜1，姜云清2，张成鸿1
(1．大连医科大学基础医学院形态实验室，116044，辽宁，大连;2．大连市结核病医院检验科，116033，辽宁，大连)
摘要:为保护翼柄山莴苣的野生资源，满足栽培对种苗的需求，以嫩茎为材料，进行了愈伤组织诱导及分化培
养、生长芽试管苗培养、试管苗移栽与定植的研究，成功培养了生长旺盛的试管苗。结果表明:MS +琼脂 4． 6
g /L +蔗糖 34 g /L + ZT 0． 7 mg /L + 2，4-D 2． 2 mg /L是嫩茎愈伤组织培养的适宜培养基;在光照强度 4 000 Lx
的条件下，MS + La(NO3)3·6H2O 0． 5 mg /L +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52 g% + IAA 0． 05 mg /L是愈伤组织分
化培养的适宜培养基;1 /3 MS +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52 g% + IAA 0． 05 mg /L + NAA 0． 15 mg /L是生长芽试
管苗培养的适宜培养基;试管苗移栽成活率为 86． 9%，定植成活率为 97． 5%。定植的试管苗保持了野生翼柄
山莴苣的植物学性状。
关键词:翼柄山莴苣;愈伤组织;试管苗
中图分类号:S688． 4;Q943． 1 文献标识码:A
The Study on the Callus of Youngers Culture and Test-tube
Seedlings Culture with Lactura Triangulate Maxim
WANG Xiaowei1，JIANG Yunqing2，ZHANG Chenghong1
(1． Morphology Laboratory，Basic Medical Sciences，Dalian Medical University，116044，Dalian，Liaoning，PＲC;
2． The Clinical Laboratory of Dalian Tuberculosis Hospital，116033，Dalian，Liaoning，PＲC)
Abstract:To protect the wild resource，meet the demand of seedling cultivation，with the younger
stem of Lactura triangulate Maxim． As material to study the induction and differentiation of the cal-
lus，growth rooting of buds，transplanting and colonization of test-tube seedling． The results showed
that MS + agar4． 6 g /L + sucrose34 g /L + ZT 0． 7 mg /L + 2，4-D 2． 2 mg /L was suitable medium of
callus culture，in light intensity under the condition 4 000 Lx，the appropriate medium for callus dif-
ferentiations culture was MS + La (NO3)3·6H2O 0． 5 mg /L + sucrose 36 g /L + agar 0． 52g% +
IAA 0． 05 mg /L，1 /3MS + sucrose 36 g /L + agar0． 52g% + IAA 0． 05 mg /L + NAA 0． 15 mg /L was
suitable medium for growth rooting of buds，the survival rate of test-tube seedling s transplanting
was86． 9% and the colonization survival rate was97． 5% ． The test-tube seedling maintained botanical
traits of wild Lactura triangulate Maxim．
Key words:Lactura triangulate Maxim;callus;test-tube seedling
0 引言
翼柄山莴苣(Lactura triangulata Maxim)又称
野生菜，为菊科苦苣菜属 2 年生或多年生草本植
物［1］，主要分布在我国的东北、华北等地，在辽宁
地区的大连、本溪、宽甸等地也有分布，生长于山
DOI:10.13990/j.issn1001-3679.2014.03.016
坡林下和林缘草地等环境［2 － 3］。在辽宁的南部地
区，翼柄山莴苣的嫩茎叶是民间非常受欢迎并具
有一定疗效作用的野菜，市场上也有出售。由于
翼柄山莴苣的适口性好，农民饲养的猪、羊、兔、
鸡、鸭和鹅等畜禽，也都非常喜食翼柄山莴苣的嫩
茎叶。几十年前，有的农民发现，把翼柄山莴苣作
为青饲料喂饲畜禽，能降低发病率，有助于提高养
殖效益。因此，多年来辽宁南部的大连等地区的
人们一直在大量的采收翼柄山莴苣作为药用食
材，或者作为青饲料喂养畜禽。然而，由于所采收
的翼柄山莴苣必须是幼苗才能食用或饲用，由此
使野生翼柄山莴苣资源遭到了严重破坏。致使现
今出现了不仅难以采收到食用或饲用的野生翼柄
山莴苣幼苗，而且每年的 8 － 10 月连野生翼柄山
莴苣的种子也无法采收到的现象。为保护野生资
源和满足栽培的需求，研究者对其进行了愈伤组
织分化及试管苗培养的研究。尽管同属植物已有
毛脉山莴苣［4］、叶用莴苣［5 － 7］、结球莴苣［8］的研
究报道，但却未见翼柄山莴苣愈伤组织分化及试
管苗培养培养的研究报告。
1 材料与方法
1． 1 材料来源及预处理
5 月下旬，将在大连金州西海岸草地上生长
旺盛的翼柄山莴苣植株的地下部一次性浇透 4
mg /L青霉素溶液，同时向植株的地上部喷洒 3
mg /L青霉素与 3 mg /L 庆大霉素的混合溶液，进
行预先灭菌处理。1 d 后，将已经预先灭菌、待做
试验材料的全株采回实验室备用。
1． 2 材料灭菌
将采回实验室内的植株叶柄、嫩茎和粗壮根
分别剪成长 2 cm左右的叶柄段、嫩茎段和粗壮根
段，采用穿龙薯蓣研究［9］的方法进行材料的灭
菌，就会获得无菌的叶柄段、嫩茎段和粗壮根段。
1． 3 试验方法
1． 3． 1 愈伤组织培养 将无菌材料段从灭菌瓶
中取出后，放到无菌滤纸上，在吸干多余水分的同
时，将无菌材料段两端分别切掉 0． 5 cm 左右，使
其形成长约 1 cm、两端具有新鲜切口的叶柄段、
嫩茎段和粗壮根段，并接种到以下 6 种培养上培
养:1)1 /4 MS +琼脂 4． 6 g /L +蔗糖 34 g /L + ZT
0． 7 mg /L + NAA 2． 2 mg /L;2)1 /4 MS +琼脂 4． 6
g /L +蔗糖 34 g /L + ZT 0． 7 mg /L + IAA 2． 2 mg /L;
3)1 /4 MS +琼脂 4． 6 g /L +蔗糖 34 g /L + ZT 0． 7
mg /L + 2，4-D 2． 2 mg /L;4)MS +琼脂 4． 6 g /L +
蔗糖 34 g /L + ZT 0． 7 mg /L + NAA 2． 2 mg /L;5)
MS +琼脂 4． 6 g /L +蔗糖 34 g /L + ZT 0． 7 mg /L
+ IAA 2． 2 mg /L;6)MS +琼脂 4． 6 g /L +蔗糖 34
g /L + ZT 0． 7 mg /L + 2，4-D 2． 2 mg /L。接种后，
分别放到无光(以下称暗培养)和光照强度 3 200
Lx(以下称光培养)的条件下培养。进行在不同
培养基上、不同材料与光照条件对愈伤组织培养
的影响试验。试验重复 2 次，每次重复间隔时间
15 d，每种处理接种 30 个材料。
1． 3． 2 嫩茎愈伤组织的分化培养 把以上验证
培养获得的 74 块嫩绿色的颗粒状愈伤组织，从培
养瓶中取出后，在无菌培养皿中切成边长约 0． 3
cm的块状，再接种到以 MS + La(NO3)3·6H2O
0． 5 mg /L +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52 g%和 MS +
La(NO3)3·6H2O 0． 5 mg /L +蔗糖 36 g /L +琼脂
0． 52 g% + 6-BA 0． 5 mg /L 2 种培养基为基本培
养基，附加浓度分别为0 ． 01mg / L、0 ． 05mg / L、
0． 10 mg /L、0． 15 mg /L、0． 20 mg /L、0． 25 mg /L、
0． 30 mg /L、0． 35 mg /L、0． 40 mg /L的 IAA和 NAA
培养基上，再放到无光照(以下简称暗培养)、光
照强度 2 000 Lx(以下简称光培养)和光照强度
4 000 Lx(以下简称强光培养)的条件下培养，进
行不同基本培养基、不同生长素及光照条件对愈
伤组织分化的影响试验。该试验重复了 1 次，每
种处理培养 40 个愈伤组织块。
1． 3． 3 生长芽试管苗培养 将验证性试验中获
得的 362 块愈伤组织分化出的丛生生长芽，采用
以下 3 种方法处理:1)将 0． 5 mg /L 的 IAA 溶液
倒入具有由愈伤组织分化丛生生长芽的培养瓶
中，处理 3 d后，将从生芽从基部剪下，使其形成单
芽，再接种到 1 /2 MS +蔗糖 14 g /L +琼脂 0． 48 g
不含生根剂的培养基上，进行生根培养(下称方
法 1) ;2)将丛生生长芽从基部切下后，马上把下
部切口放到 IAA 1． 8 mg /L的溶液中处理 10 min，
再接种到 1 /3 MS +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52g% +
IAA 0． 8 mg /L 的培养基上，进行生根培养(下称
方法 2) ;3)将丛生生长芽从基部剪下后，直接接
种到 1 /3MS +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52 g% + IAA
0． 05 mg /L + NAA 0． 15 mg /L的培养基上，进行生
根培养(下称方法 3)。该试验重复 1 次，每一种
处理接种培养 200 个生长芽。
1． 3． 4 试管苗移栽与定植 将 2 次生根试验分
别培养的 186 株和 189 株(共 375 株)试管苗，培
·933·第 3 期 王晓炜等:翼柄山莴苣愈伤组织分化及试管苗培养的研究
养到第 28 d 时，从培养瓶中取出，直接移栽到上
面为一层厚约 7 cm 砻糠灰的日光温室苗床上。
移栽后的前 13 d 要防止直射光照、保持 18 ～ 30
℃的温度和 80%以上的湿度。之后按照温室内
条件正常管理。
移栽后第 35 d，一次性将温室内移栽成活的
326 株试管苗定植到大连金州西海岸的草地上，
除了初期浇 2 次透水外，其它按照野生条件进行
管理。
2 结果与分析
2． 1 不同材料、不同培养基及光照条件下对愈伤
组织诱导培养的影响
接种后 2 个月观察表明，所有暗培养的材料
均不能生长出愈伤组织;而在光培养的条件下，只
有在 6)号培养基上培养的材料能不同程度的生
长出愈伤组织。由表 1 可见，在 6)号培养基上以
嫩茎段为材料的培养效果最好。在这种培养基
上，以嫩茎为材料培养到第 8 d 时有的嫩茎段切
口处就生长出可见淡绿色、直径 0． 1 cm左右的愈
伤组织。随着培养时间的延长，生长出愈伤组织
的嫩茎段数不断增加，愈伤组织块越来越大，并且
生长的愈伤组织也由最初的淡绿色转化为嫩绿色
的颗粒状。在这一试验的基础上，将 100 个嫩茎
段接种到 6)号培养基上，进行了 2 次验证试验，
结果 2 次验证试验分别有 74 个和 76 个嫩茎段生
长出直径 0． 9 ～ 2． 2 cm的嫩绿色的颗粒状愈伤组
织。以上结果说明，在光照的条件下，MS +琼脂
4． 6 g /L +蔗糖 34 g /L + ZT 0． 7 mg /L + 2，4-D 2． 2
mg /L这一培养基是翼柄山莴苣嫩茎愈伤组织培
养的适宜培养基。
表 1 6)号培养基上不同材料对愈伤组织生长的
影响(3 次试验平均结果)
材料
接种
数量
生长愈伤
组织段数
愈伤组织
生长率 /%
愈伤组
织长势
叶柄段 90 21 23． 3 +
嫩茎段 90 62 68． 9 + +
粗壮根段 90 13 14． 4 +
注:+ +为长势旺盛;+为长势一般。
2． 2 嫩茎愈伤组织的分化培养
2次愈伤组织的分化试验结果证明:只有在以
MS + La(NO3)3·6H2O 0． 5 mg /L +蔗糖 36 g /L +
琼脂 0． 52g%为基本培养基、附加不同浓度 IAA
和强光培养的条件下，培养的愈伤组织块才能分
化出生长芽，其余任何条件愈伤组织块均不能分
化。由表 2 显示，IAA 的浓度不同，分化的效果
也不同。在附加浓度为 0． 05 mg /L IAA的培养基
上，分化效果最好。对整个培养过程的观察还发
现，在 IAA的浓度为 0． 05 mg /L 的培养基上，愈
伤组织块分化时间早，分化的生长芽叶片伸展，呈
丛生状。在以上 2 次试验的基础上，又将 400 个
愈伤组织块 1 次性接种到以 MS + La(NO3)3·
6H2O 0． 5 mg /L +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52g%为
基本培养基、附加浓度为 0． 05 mg /L 的 IAA 培养
基上，在光照的条件下进行分化的验证性试验，共
有 362 块愈伤组织分化出丛生生长芽，其它观察
统计的指标也获得了与初期 2 次试验几近一致的
结果。以上试验说明:在光照强度 4 000 Lx 的条
件下，翼柄山莴苣嫩茎愈伤组织生长芽分化培养的
适宜培养基是 MS + La(NO3)3·6H2O 0． 5 mg /L +
蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52g% + IAA 0． 05 mg /L。
表 2 不同浓度 IAA对愈伤组织块分化培养的影
响
IAA浓度
/mg·L －1
接种愈
伤组织
块数
分化愈
伤组织
块数
愈伤组
织分化
率 /%
每块愈伤
组织分化
生长芽
个数
分化
生长
芽长势
0． 01 80 26 32． 5 2． 3 +
0． 05 80 73 91． 25 6． 2 + + +
0． 10 80 56 70． 0 5． 2 + +
0． 15 80 45 56． 25 3． 1 +
0． 20 80 23 28． 75 3． 0 +
0． 25 80 22 27． 5 2． 6 +
0． 30 80 16 20． 0 2． 1 +
0． 35 80 18 22． 5 2． 1 +
0． 40 80 7 8． 75 1． 6 +
注:+为长势一般;+ +为长势较好;+ + +为长势旺盛。
2． 3 不同处理方法对生长芽试管苗培养的影响
用以上 3 种处理方法培养的生长芽，接种 28
d统计，结果由表 3 所示:3 种处理方法，培养的生
长芽均能生根并生长成试管苗，但用方法 3 对生
长芽进行处理，不仅生根率和试管苗平均生根条
数远远好于方法 1 和方法 2，而且对方法 3 的 2 次
重复试验共培养的 375 株试管苗的外观长势也很
旺盛。上述结果说明，将丛生生长芽从基部剪下
后，直接接种到 1 /3 MS +蔗糖 36 g /L +琼脂 0． 52g
·043· 江 西 科 学 2014 年第 32 卷
+ IAA 0． 05 mg /L + NAA 0． 15 mg /L的培养基上，
进行生根培养的方法是翼柄山莴苣生长芽试管苗
培养的理想方法;也就是说，1 /3 MS +蔗糖 36 g /L
+琼脂 0． 52g% + IAA 0． 05 mg /L + NAA 0． 15
mg /L这种培养基是翼柄山莴苣生长芽试管苗培
养的适宜培养基。
表 3 不同处理方法对生长芽试管苗培养的影响
(2 次试验平均结果)
处理
方法
接种处
理生长
芽个数
培养生
根生长
为试管
苗株数
生根率
/%
平均每
株试管
苗生根
条数
试管苗
长势
方法 1 400 185 46． 25 2． 9 +
方法 2 400 156 39． 0 3． 1 +
方法 3 400 375 93． 75 6． 1 + +
注:+为长势一般;+ +为长势旺盛。
2． 4 试管苗移栽与定植
35 d后统计，移栽的 375 株试管苗，成活 326
株，成活率为 86． 9%。
定植后 1 个月统计，共成活并正常生长的试
管苗为 318 株，定植成活率为 97． 5%。定植的试
管苗根系发达，生长旺盛，翌年 8 月开花，野生翼
柄山莴苣的植物学性状都保持不变。
3 讨论
在进行愈伤组织分化培养的试验中，在附加
了不同浓度的人工生长素 NAA的培养基上，均未
见愈伤组织分化;而在附加了 9 种不同浓度的天
然生长素 IAA的培养基中，培养的愈伤组织均能
不同程度分化。这一现象说明，虽然 NAA是愈伤
组织分化培养研究中较为常用的生长素［10］，但翼
柄山莴苣愈伤组织的分化适宜生长素却是天然生
长素 IAA。
尽管在培养基中附加了 9 种不同浓度的天然
生长素 IAA，培养的愈伤组织都能不同程度分化
生长出生长芽，但在低浓度(0． 05 mg /L)IAA 培
养基中分化培养的效果最好。这并不能说明翼柄
山莴苣愈伤组织分化更需要低浓度(0． 05 mg /L)
的 IAA，而实际情况是在分化培养过程中，嫩绿色
的颗粒状愈伤组织自身能合成部分天然生长素
IAA，这不仅提高了天然生长素 IAA 的浓度，也促
进了愈伤组织分化培养生长素的平衡，从而出现
了理想分化培养效果。
注:本研究在辽宁省植物工程重点实验室完成。
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