全 文 ：垂盆草颗粒中槲皮素、山奈素与异鼠李素的
HPLC测定方法研究
汪正宇
(宿州市食品药品检验所，安徽 宿州 234000)
摘要:目的 建立垂盆草颗粒中槲皮素、山奈素与异鼠李素的 HPLC测定方法，为制定该制剂质量标准中定量测定方法及限度
提供依据。方法 色谱柱:SunFire-ODS C18(4． 6 mm × 150 mm，5 μm)流动相:以甲醇—0． 4%磷酸溶液(50∶50) ;流速:1． 0 mL
·min －1，检测波长:360 nm，柱温:25℃，进样量:10 μL。结果 槲皮素、山奈素和异鼠李素的线性范围分别为 34． 35 ～ 429． 43、
10． 83 ～ 135． 37、12． 39 ～ 154． 94 μg，平均加样回收率(n = 6)分别为 99． 2%、99． 3%和 99． 1%，ＲSD 分别为 0． 26%、0． 29%和
0． 77%。结论 该方法简单、快速、结果准确，重现性好，为垂盆草颗粒中槲皮素、山奈素与异鼠李素的测定提供可靠的方法。
关键词:垂盆草颗粒;槲皮素;山奈素;异鼠李素;HPLC
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2015． 08． 012
垂盆草(Sedum sarmentosumBunge)为景天科植
物，全草入药，清热解毒，治痈肿、带状疱疹、毒蛇咬
伤、烫伤、烧伤，也是治疗肝炎的有效药物。化学成
分研究表明，从垂盆草中分离并鉴定的化合物主要
有黄酮及其苷、三萜、甾醇、生物碱、氰苷、氨基酸、
糖类等。垂盆草颗粒是由垂盆草的新鲜全草经提
取、制粒制备而成的中成药，具有清利湿热、降低谷
氨酸氨基转移酶的作用，用于清热解毒，活血利湿，
急慢性肝炎湿热瘀结证［1 － 2］。为全面控制药品质
量，我们结合参考文献［3 － 7］，对垂盆草颗粒中黄酮类
化合物中的化学成分进行了研究，建立槲皮素、山
奈素和异鼠李素建立含量测定方法，考察该药活性
成分，以便控制药品质量。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 DIONEX UltiMate 3000 系列(SＲD-
3400A分析泵、WPS-3000 自动进样器、TCC-3000SD
柱温箱、VDW-3000 检测器) ;工作站:Chromeleon
Dionex 版本 7． 1． 2． 1478;色谱柱:SunFire-ODS C18
(150 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;KQ-300DE 型数控超声
波清洗器(江苏省昆山超声仪器有限公司) ;梅特勒
AB-135S型电子天平(D =0． 01 mg)。
1． 2 试药 垂盆草颗粒(批号:120914、130115、
130701，上海海虹实业(集团)巢湖今辰药业有限公
司) ;槲皮素对照品(批号:100081-20907，97． 4%) ，
山奈素对照品(批号:110861-201209) ，异鼠李素
(批号:110860-201109) ，对照品均来自中国药品生
物制品检定院;甲醇(色谱纯，美国 Tedia 公司) ;水
(自制纯化水)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 流动相:以甲醇—0． 4%磷酸溶液
(50∶40) ;流速:1． 0 mL·min －1，检测波长:360 nm，
柱温:25℃，进样量:10μL。
2． 2 对照品溶液的制备 取槲皮素对照品、山奈素
对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇分别
制成每 1 mL各含 15、5、5 μg的混合溶液，即得。
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取垂盆草颗粒
2． 006 5g，加入甲醇—25%盐酸溶液(4∶1)混合溶液
25 mL，称定重量，加热回流 1 h，放冷，再称定重量，
用甲醇—25%盐酸溶液(4∶1)混合溶液补足减失的
重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 4 阴性供试品溶液的制备 取缺槲皮素、山奈
素和异鼠李素的阴性样品，按 2． 3 项下制得缺车前
子阴性供试品溶液。
2． 5 阴性干扰试验 分别取对照品溶液、供试品
溶液和阴性供试品溶液各 10 μL，依上述色谱条件
测定，结果显示阴性无干扰，见图 1。
A 对照品 B 样品 C 阴性样品
图 1 HPLC色谱图
·4741· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2015 Aug;19(8)
2． 6 线性关系的考察 精密量取 2． 2 项下的对照
品溶液 2，5，10，15，20，25 μL，注入高效液相色谱仪
中，记录色谱图，以对照品进样量为横坐标(X)、峰
面积积分值为纵坐标(Y) ，求得回归方程:槲皮素 Y
= 4 025． 4X － 18 414，r2 = 0． 999 8，山奈素 Y =
4 157． 6 X － 12 749，r2 = 0． 999 9，异鼠李素 Y =
3 908． 2X － 16 478，r2 = 0． 999 9。结果表明，槲皮
素、山奈素和异鼠李素的进样量分别在 34． 35 ～
429． 43、10． 83 ～ 135． 37、12． 39 ～ 154． 94 μg 范围内
与峰面积分值呈良好的线性关系。
2． 7 稳定性试验 取供试品溶液，分别在 0，2，4，
6，8，10 h进样，取 10 μL 注入高效液相色谱仪，按
上述色谱条件测定。结果槲皮素、山奈素和异鼠李
素峰面积的 ＲSD分别为 0． 8%、1． 8%和 1． 9%(n =
5) ，表明供试品 10 h内稳定。
2． 8 精密度试验 取混合对照品溶液 10 μL，连续
进样 6 次，按上述色谱条件测定峰面积。结果槲皮
素、山奈素和异鼠李素峰面积的 ＲSD分别为1． 5%、
0． 6%和 0． 6%(n = 6) ，表明仪器精密度良好。
2． 9 加样回收率试验 取已知含量的垂盆草颗粒
(批号 130115)6 份，各加入一定量的槲皮素、山奈
素和异鼠李素对照品，稀释成相应浓度的对照品溶
液，摇匀并过滤，取 10 μL 进入色谱仪，记录色谱
图，并计算回收率，结果见表 1。
表 1 山奈素、槲皮素和异鼠李素回收率测定结果(n = 6)
待测
成分
编号
取样
量 / g
样品中
含量 /mg
加入量
/mg
测出总
量 /mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
山奈素 1 1． 081 0． 253 0． 235 0． 488 99． 7 99． 3 0． 29
2 1． 072 0． 246 0． 291 0． 536 99． 2
3 1． 083 0． 254 0． 338 0． 590 99． 0
4 1． 072 0． 255 0． 354 0． 608 99． 4
5 1． 072 0． 251 0． 351 0． 601 99． 4
6 1． 236 0． 342 0． 251 0． 590 99． 0
槲皮素 1 1． 081 0． 754 0． 746 1． 494 99． 1 99． 2 0． 26
2 1． 072 0． 748 0． 772 1． 513 99． 1
3 1． 083 0． 743 1． 031 1． 769 99． 3
4 1． 072 0． 746 1． 112 1． 852 99． 2
5 1． 072 0． 748 1． 074 1． 815 99． 0
6 1． 236 0． 947 1． 071 2． 016 99． 7
异鼠李素 1 1． 0723 0． 2632 0． 2832 0． 5460 99． 87 99． 1 0． 77
2 1． 0832 0． 2454 0． 3102 0． 5515 98． 31
3 1． 0723 0． 2580 0． 3952 0． 6508 99． 05
4 1． 0721 0． 2602 0． 4225 0． 6777 98． 08
5 1． 2364 0． 2613 0． 4075 0． 6683 99． 81
6 1． 0812 0． 3406 0． 3125 0． 6512 99． 45
2． 10 样品测定 取 3 批垂盆草颗粒，按 2． 3 项下
制备供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法
计算 3 批样品含量，结果见表 2。
表 2 样品的测定结果(n = 3)/mg·g － 1
批号 槲皮素含量 山奈素含量 异鼠李素含量 总量
120914 0． 806 3 0． 252 3 0． 294 5 1． 353 1
130115 0． 809 8 0． 241 5 0． 281 5 1． 332 9
130701 0． 739 2 0． 230 0 0． 261 2 1． 230 4
3 讨论
本实验所采用的液相色谱条件初始参考《中国
药典》一部中垂盆草药材［8］项下方法，利用流动相
甲醇—0． 4%磷酸溶液(45∶55)进行试验，发现保留
时间较长，各峰之间分离度较好;笔者提高流动相
中有机成分比例，结果分离度较好，运行时间也大
大减少，所以最终确定流动相为甲醇—0． 4%磷酸
溶液(50 ∶40)。在选择样品提取方法时，笔者先后
采用超声、萃取和回流法分别进行试验，通过对比
试验结果，可以得出回流方法重复性高，提取相对
完全，所以本文采取回流法提取样品［9］。
垂盆草中含有垂盆草苷、黄酮类、甾醇类和三
萜类、有机酸、氨基酸等化合物，其中具有保肝降酶
作用的活性成分主要为黄酮类和垂盆草苷类。而
槲皮素、山奈素和异鼠李素是黄酮类主要化学成
分，槲皮素具有抗癌、抗炎、抗菌、抗氧化、保护心血
管系统和保护皮肤等作用，山奈素对酪氨酸酶 TYＲ
活性有抑制作用。所以研究上述三种成分检测方
法，对于控制垂盆草颗粒质量，发挥积极治疗作用
有着重要作用［10 － 11］。
本研究建立了垂盆草颗粒中槲皮素、山奈素及
异鼠李素含量测定方法，经方法学考察，均符合中
药质量标准要求，该方法简便、准确、可控，重复性
高，可作为控制垂盆草质量的指标。
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