全 文 ：化学与生物工程 2009 , Vol.26 No.8　Chemist ry &Bioengineering 91　
收稿日期:2009-05-12
作者简介:吕飞(1984-),男 , 湖北洪湖人 , 研究方向:生物工程;通讯联系人:吴士筠 , 高级实验师。 E-mail:w usj5721@sina.com。
HPLC法测定凹叶景天中槲皮素和异鼠李素含量
吕　飞 ,翁德会 ,吴士筠 ,干　信
(中南民族大学工商学院环境与生命科学系 ,湖北 武汉 430065)
　　摘　要:采用高效液相色谱(H PLC)法测定了凹叶景天中槲皮素和异鼠李素含量。采用 Kromasil C18(250 mm×4.6
mm , 5 μm)色谱柱 ,以乙腈-水-磷酸(43∶57∶1)为流动相 ,流速为 1.0 mL ·min -1 ,检测波长为 360 nm。得到槲皮素
回归方程为 y=74197x+40608 , R2=0.9998 ,槲皮素在 3.6～ 18.0 μg ·mL-1范围内线性关系良好 , 平均加样回收率为
100.65%, RSD=2.02%;异鼠李素回归方程为 y=285344x+5535.1 , R2=0.9998 ,异鼠李素在 1.06 ～ 5.30 μg ·mL -1范
围内线性关系良好 ,平均加样回收率为 101.99%, RSD=4.95%。该方法简便 、高效 、准确度较高 , 结果令人满意 ,为制
定凹叶景天的质量标准及指纹图谱的研究提供了依据。
关键词:凹叶景天;高效液相色谱;槲皮素;异鼠李素
中图分类号:O 657.72　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1672-5425(2009)08-0091-04
　　凹叶景天为景天属植物凹叶景天(Sedum emar-
g inatum M igo)的全草 ,性味平 ,味微酸 ,具有清热 、解
毒 、利尿 、平肝的功效 ,用于治疗痢疾 、疮毒 、跌打损伤 、
吐血 、衄血 、肝炎 、血崩 、白带 、痈疥等症[ 1 , 2] ,是一种重
要的药用植物资源。在景天属植物(如垂盆草等)中发
现了黄酮类化合物[ 3 , 4] 。异鼠李素和槲皮素是凹叶景
天中两种主要的黄酮类物质 ,具有增强心脏收缩 、降血
脂 、止血 、抑制血小板聚集等多种药理作用 ,引起了人
们的广泛重视 ,对该类化合物的研究已成为国内外医
药界的研究热门 。
目前测定槲皮素 、异鼠李素的方法有双波长分
光光度法[ 5] 、HPLC 法[ 6 ～ 10] 等 ,国内外尚未见凹叶景
天中黄酮类物质含量测定的研究报道 。作者在此采
用 HPLC法对凹叶景天中槲皮素和异鼠李素的含量
进行了测定 , 拟为制定凹叶景天的质量标准及指纹
图谱的研究提供依据 。
1　实验
1.1　材料 、试剂与仪器
凹叶景天 ,产于湖北建始 ,由中南民族大学生命科
学学院万定荣老师鉴定并提供 。
异鼠李素和槲皮素对照品 ,成都曼斯特生物科技
有限公司;甲醇 、乙腈为色谱纯;磷酸等试剂均为分析
纯;水为超纯水 。
LC-1000型高效液相色谱仪 、LC-1000 型紫外可
变波长检测器 、色谱柱 Kromasil C18柱(250 mm×4.6
mm , 5μm),山东鲁南瑞虹化工仪器有限公司;N-2000
型色谱数据工作站 ,浙江大学智达信息工程有限公司;
AUY120型电子天平(1 ),日本岛津公司;SP-756型
紫外分光光度计 ,上海光谱仪器有限公司;艾科浦超纯
水系统 ,颐洋企业发展有限公司。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件
色谱柱为 K romasil C18柱(250 mm ×4.6 mm , 5
μm),流动相为乙腈-水-磷酸(43∶57∶1),流速为
1.0 mL·min-1 ,检测波长为 360 nm ,柱温为室温 ,进
样量为 10 μL。
在上述条件下 ,异鼠李素和槲皮素对照品达到基
线分离 ,且其它组分色谱峰无干扰 ,以槲皮素计 ,理论
塔板数大于 3000 。
1.2.2　供试品溶液的制备
称取一定量的凹叶景天全草 ,粉碎 ,过 50目筛 ,
备用。精密称取样品粉末 2.00 g 置于 50 mL 的烧杯
中 ,加入 70%的乙醇 30 mL ,回流提取 1 h ,过滤;滤
液加入 1 mL 稀盐酸 ,水浴蒸发至 10 mL ,加入纯水
10 mL ,用二氯甲烷 20 mL 提取 2次;弃去二氯甲烷 ,
再用醋酸乙酯 20 mL 提取 3次;合并醋酸乙酯提取
液 ,蒸干;用少量的甲醇溶解 , 转移至 5.0 mL 量瓶
吕　飞等:HPLC法测定凹叶景天中槲皮素和异鼠李素含量/2009 年第 8 期92　
中 ,定容 ,摇匀 ,再用 0.45 μm 微孔滤膜过滤 ,滤液备
用。
1.2.3　对照品溶液的配制
精密称取异鼠李素对照品 1.03 mg 、槲皮素对照
品0.90 mg ,溶解 ,于 5 mL 量瓶定容 ,配成浓度分别为
530 μg ·mL -1和 180 μg ·mL-1的对照品溶液 ,置于
冰箱中保存 ,备用。
1.2.4　标准曲线的绘制
将槲皮素对照品溶液准确稀释 10倍 、异鼠李素对
照品溶液准确稀释 100 倍 ,备用。按表 1 所示浓度进
样 ,每次进样 10 μL 并记录其峰面积。以峰面积为纵
坐标 、浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 。
表 1 槲皮素和异鼠李素标准曲线峰面积
Tab.1 The peak area of standard curve for
quercetin and isorhamnetin
槲皮素
浓度/μg·mL -1 3.6 7.2 10.8 14.4 18.0
峰面积 300327.5 581294 846364 1110351 1371348
异鼠李素
浓度/μg·mL -1 1.06 2.12 3.18 4.24 5.30
峰面积 300076.7 615994.8 919443 1217462 1511665
2　结果与讨论
2.1　提取方法的选择
比较了浸渍提取法 、回流提取法 、超声提取法所制
备供试品的含量 。结果表明 ,回流提取法提取的样品
中的异鼠李素和槲皮素的含量相对较高 ,说明回流提
取法的提取效果好。
2.2　流动相的选择
通过比较乙腈-水-磷酸(43∶57∶1)、乙腈-水
-磷酸(50∶50∶1)和甲醇-水-磷酸(40∶60∶1)3
种流动相的分离效果 ,发现以乙腈-水-磷酸(43∶57
∶1)为流动相时 ,系统对待测组分的保留时间短且分
离效果好 。因此 ,确定以乙腈-水-磷酸(43∶57∶1)
为本研究测定的流动相。
2.3　检测波长的选择
分别取槲皮素和异鼠李素对照品溶液 ,以甲醇为
参比溶液 ,用紫外可见分光光度计于 200 ～ 400 nm 波
长范围内扫描 ,测定其最大吸收值 。结果表明 ,槲皮素
和异鼠李素均在 360 nm 处吸收最好。故选择 360 nm
为测定波长。
2.4　标准曲线(图 1)
图 1　槲皮素和异鼠李素标准曲线
Fig.1　Standard curves of quercetin and isorhamnetin
　　对标准曲线进行回归 ,分别得槲皮素回归方程 y
=74197x+40608 , R2=0.9998;异鼠李素回归方程 y
=285334x +5535.1 , R2 =0.9998 。槲皮素在 3.6 ～
18.0 μg · mL-1范围内线性关系良好 , 异鼠李素在
1.06 ～ 5.30μg ·mL-1范围内线性关系良好 。
2.5　精密度实验
取浓度为 53μg ·mL-1的异鼠李素对照品溶液和
浓度为 18μg ·mL-1的槲皮素对照品溶液的混合液 4
μL ,按 1.2.1色谱条件各连续进样 5 次 ,记录峰面积。
计算得到异鼠李素和槲皮素的 RSD 值(n=5)分别为
2.07%和 0.738%,均小于 5%。结果表明精密度良
好。
2.6　重复性实验
精密称取样品 5份 ,制备供试品溶液;按 1.2.1色
谱条件进样测定 ,记录峰面积。计算得到异鼠李素和
槲皮素的 RSD值(n=5)分别为 1.06%和 1.09%,均
小于 5%。结果表明重复性良好 。
2.7　稳定性实验
取同一浓度的异鼠李素和槲皮素供试品溶液 ,分
别于 2 h 、4 h 、6 h 、8 h 、10 h进样 10μL 进行测定 ,记录
峰面积。计算得到异鼠李素和槲皮素的 RSD值分别
为 0.71%和 2.73%,均小于 5%,说明样品溶液在 10
h内稳定。
吕　飞等:HPLC法测定凹叶景天中槲皮素和异鼠李素含量/ 2009 年第 8 期 93　
2.8　回收率实验
准确吸取已知含量的供试品溶液 1.0 mL 、0.8
mL 、0.6 mL ,分别加入 53 μg ·mL-1异鼠李素对照品
溶液和18μg ·mL-1槲皮素对照品溶液各 0.1 mL ,加
甲醇定容至 5 mL ,按1.2.1色谱条件各进样 10 μL 进
行分析 ,结果见表 2。由表 2可知 ,异鼠李素平均回收
率为 101.99%,槲皮素的平均回收率为 100.65%。
表 2 异鼠李素和槲皮素的回收率
Tab.2 Recovery of isorhamnetin and quercetin
样品 样品含量/μg·mL-1 加入体积/mL 贮备液含量/μg 加入含量/μg 测得含量/μg 回收率/ % 平均回收率/ % RSD/ %
7.49 0.6 4.94 5.3 10.14 107.80
异鼠李素 7.49 0.8 5.99 5.3 11.26 99.50 101.99 4.95
7.49 1.0 7.49 5.3 12.69 98.66
10.03 0.6 6.018 1.8 7.96 102.36
槲皮素 10.03 0.8 8.024 1.8 9.92 101.20 100.65 2.02
10.03 1.0 10.03 1.8 11.67 98.40
2.9　样品的测定
取供试品溶液 10 μL 注入高效液相色谱仪 ,结果
见图 2 。由图 2可看出 ,样品中槲皮素与异鼠李素的
出峰时间与对照品一致 ,表明该峰确为槲皮素和异鼠
李素 。计算得出干燥品中槲皮素 、异鼠李素的含量分
别为 32.43 μg · g-1 、25.315μg ·g -1 。
图 2　对照品和样品的高效液相色谱图
Fig.2　HPLC chromatograms of standard and sample
3　结论
采用高效液相色谱(HPLC)法测定凹叶景天中槲
皮素和异鼠李素含量 。采用 Kromasil C18(250 mm×
4.6 mm , 5μm)色谱柱 ,以乙腈-水-磷酸(43∶57∶
1)为流动相 ,流速为 1.0 mL ·min-1 ,检测波长为 360
nm 。得到槲皮素回归方程为 y=74197x +40608 , R2
=0.9998 ,槲皮素在 3.6 ～ 18.0μg ·mL-1范围内线性
关系良好 , 平均加样回收率为 100.65%, RSD =
2.02%;异鼠李素回归方程为 y =285344x +5535.1 ,
R2=0.9998 ,异鼠李素在 1.06 ～ 5.30 μg ·mL -1范围
内线性关系良好 ,平均加样回收率为 101.99%, RSD
=4.95%。该方法简便 、高效 、准确度较高 ,结果令人
满意 ,为制定凹叶景天的质量标准及指纹图谱的研究
提供了依据。
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Determination of Content of Quercetin and Isorhamnetin
in Sedum Emarginatum Migo by HPLC
LU
··
Fei ,WENGDe-hui ,WU Shi-jun , GAN Xin
(Department of Env ironment and Li f e Sciences ,Collegeo f Industry and Commerce ,
South-Central University for Nationali ties ,Wuhan 430065 ,China)
Abstract:The contents of querce tin and isorhamnet in in Sedum emarg inatum M igo w ere dete rmined by
high performance liquid chromatography (HPLC)using Kromasil C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm)column ,w ith
acetonit rile∶water∶phosphoric acid(43∶57∶1)as mobile phase at a f low rate of 1.0 mL ·min-1 and detec-
tion w aveleng th of 360 nm.The re sults show ed that the reg ression equation fo r querce tin w as y =74197 x+
40608 , R2=0.9998 , querce tin o f 3.6 ～ 18.0μg ·mL-1 had a good linear relationship , the average recove ry w as
100.65%, RSD=2.02%;the reg ression equation for isorhamnet in was y =285344x +5535.1 , R2=0.9998 ,
i sorhamnetin of 1.06 ～ 5.30μg ·mL-1 had a good linear relat ionship , the average recovery w as 101.99%, RSD
=4.95%.This method is simple , ef ficient w ith high accuracy and satisfacto ry re sults , so i t can provide refer-
ence for the establishment of quality standard and f ingerprint spectrum study of Sedum emarginatum Migo.
Keywords:Sed um emarg inatum M igo;HPLC;quercet in;i sorhamnetin
(上接第 84页)
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Determination of Residual Monomer MMA in
MMA-CR System by Headspace Sampling Method
WEI Zheng , HUANGHong
(School of Chem istry and Chem ical Engineering , South China Universi ty
o f Technology , Guangz hou 510640 , China)
Abstract:Residual monomer MMA in MMA-CR(methy l methacry late-chloroprene latex)sy stem , in w hich
CR was modified by MMA , was determined by gas chromato graphy (GC)w ith headspace sampling.The
ef fects of emulsion copolymerization on the content of residual monomer MMA could be analy zed quanti tatively
by GC , using standard curve method.The test of repe titio n(RSD=2.7%)and recovery(Recovery =97.48%)
proved that the method w as accurate and feasible.
Keywords:gas chromatog raphy(GC);headspace sampling;residual monomer;repet itio n;recovery;methy l
methacry late(MMA)