全 文 ：收稿日期:2009-12-10;　修订日期:2010-06-18
基金项目:江西省卫生厅中医药科研基金课题(No.2006B36);
九江学院科研项目(No.06KJ34)
作者简介:曲伟红(1978-),女(汉族),吉林人 ,现任九江学院医学院讲师 ,
硕士学位 ,主要从事药用植物学和生药学教研工作.
瓦松愈伤组织诱导研究
曲伟红 , 赵建国
(九江学院基础医学院 ,江西 九江　332000)
摘要:目的 探讨影响瓦松愈伤组织诱导因素 , 建立瓦松愈伤组织培养方法。方法 采用组织培养方法 ,比较不同外植体 、
pH、温度 、植物生长物质种类及其配比对瓦松愈伤组织诱导的影响。结果 在培养基 MS上 , 叶片的诱导率高达 80%以
上 , 茎和根难以诱导愈伤组织 ,诱导率近 10%;不同 pH差异不明显;愈伤组织诱导适宜温度为 25℃;6-BA1.0 mg· L-1
+NAA0.1 mg· L-1诱导率最高。结论 瓦松愈伤组织的培养的外植体为叶 , 适宜培养基为 MS+ 6-BA1.0 mg· L-1 +
NAA0.1 mg· L-1(pH5.8), 培养温度为 25℃ ,光照 12h· d-1 , 光照度 1200Lx。
关键词:瓦松;　愈伤组织;　诱导
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.11.051
中图分类号:R937.7　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)11-2832-01
　　瓦松为景天科植物瓦松 Orostachydfimbriatus(Turcz.)Ber-
ger或晚红瓦松 O.erudescens(Maxim.)Ohwi的全草。全国各地
均有分布 , 生于屋顶瓦缝中或岩石上 ,又被誉为 “房上仙子”。瓦
松具有清热解毒 , 止血 , 利湿 , 消肿等功效 , 用于治疗吐血 、鼻衄 、
血痢 、疟疾 、痔疮 、湿疹 、痈毒 、疔疮等症 [ 1] 。由于瓦松市场需求
量巨大 , 价值较贵 , 野生资源有限 ,目前该药材原料 , 提取物和制
剂的原料供应完全依赖于野生资源 , 过量的采挖 , 使野生瓦松资
源短缺并濒临灭绝 , 为了对其野生资源进行有效保护和可持续开
发利用 , 作者对瓦松愈伤组织的诱导进行了研究 , 为培养出瓦松
新药源提供物质基础 。
1　材料与仪器
1.1　材料 瓦松新鲜植株 , 采自新疆伊犁 , 经九江学院医学院药
学教研室高春华教授鉴定为景天科植物瓦松 Orostachydfimbria-
tus(Turcz.)Berger的全草。不同外植体比较研究取叶片 、茎和
根为试验材料;不同 pH值 、温度 、不同种类和浓度的植物生长物
质等比较研究取叶片作为试验材料。
1.2　仪器与试剂 MGC-250型光照培养箱(上海一恒科技有限
公司);YXQGCZ型电热式蒸汽消毒器(山东新华医疗器械厂);
ESCO超净工作台(新加坡 ESCO公司);PP-15EPH计(德国赛
多利斯集团);萘乙酸(NAA)和 6-苄基嘌呤(6-BA), 均为生化
制剂;蒸馏水为超纯水(自制);其它实验所需的试剂均为分析
纯。
2　方法
2.1　材料处理 新鲜瓦松植株用自来水冲洗干净 , 用 75%的乙
醇浸泡 10min,用无菌水冲洗后 , 再放入 0.1%HgCl2溶液中浸泡 2～ 3 min,用无菌水反复冲洗后 , 在无菌条件下 , 用无菌手术刀于
滤纸上将植株按叶片 、茎和根三部分分别切成 0.5 cm左右长的
小段 , 接种到 MS诱导培养基上 ,每个实验培养 5瓶 , 每瓶接种 5
个。
2.2　培养基与培养条件 培养基:以 MS为基础的固体培养基 ,
附加不同浓度的 6 -BA, NAA组成各种培养基 , pH值均调至
5.8, 加入蔗糖 30 g· L-1 ,琼脂 5 g· L-1 , 121℃高压灭菌 15 min。
培养条件:不同外植体(设叶片 , 茎 , 根)、pH(设 5.2, 5.5, 5.8,
6.1, 6.4)、温度(设 15℃, 20℃, 25℃, 30℃), 光照 12 h· d-1 , 光
照度 1 200 Lx。比较实验均采用 MS+ 6-BA1.0 mg· L-1 +
NAA0.1 mg· L-1培养基;不同种类和水平植物生长物质及其配
比对愈伤组织诱导影响实验选用 2因素 3水平正交设计 L9
(34)。所有实验培养温度均为 25.0℃±0.5℃(温度试验除外),
外植体为叶片(外植体试验除外), 3 ～ 5 d后持续观察愈伤组织
诱导结果。
2.3　成愈率的计算 成愈率(%)=(产生愈伤组织的块数 /接种
的块数)×100%
3　结果
3.1　不同外植体对愈伤组织诱导的影响 第 6天在叶片外植体
的切口处观察到愈伤组织的生长 ,诱导率高达 80%以上;用茎或
根作为外植体难以诱导出愈伤组织 , 诱导率很低 , 只有 10%左
右。因此确定叶片为瓦松诱导愈伤的最佳外植体。
3.2　不同 pH对愈伤组织诱导的影响 从表 1可知 , 偏低的 pH
对愈伤组织生长较为有利 , 出愈率高 ,但从愈伤组织生长质量方
面看 , 不同 pH差异不明显 , 诱导的愈伤组织均呈绿色 , 质量好。
表 1　不同 pH对愈伤组织诱导的影响
pH 出愈最早时间 t/d 成愈数 成愈率(%)
5.2 8 21 84
5.5 7 22 88
5.8 6 23 92
6.1 6 20 80
6.4 6 20 80
3.3　不同温度对愈伤组织诱导的影响 不同温度对愈伤组织诱
导的影响结果见表 2。从表 2可以看出 , 25℃愈伤组织诱导率最
高 , 为 92%,而且质量较好 , 诱导的愈伤组织呈现绿色;15℃最
低 , 成愈率仅为 52%, 生长缓慢。因此选取培养的温度为 25℃。
表 2　不同温度对愈伤组织诱导的影响
温度 T/℃ 出愈最早时间 t/d 成愈数 成愈率(%)
15 9 16 64
20 8 21 84
25 6 23 92
30 6 22 88
3.4　不同植物生长物质种类及其配比对愈伤组织诱导的影响
结果见表 3。结果表明 2种激素对愈伤组织诱导作用中 , 6-BA
的作用较比 NAA的作用强 , 6-BA2个浓度中 , 1.0 mg· L-1作
用比 0.5 mg· L-1强 , 而 NAA的 2个浓度的作用较为接近 , 6-
BA1.0 mg· L-1 +NAA0.1 mg· L-1较适合愈伤组织的诱导。
4　讨论
药用植物愈伤组织诱导受很多因素的影响 ,其作用程度和大
小因植物种类不同而不同。影响景天科植物愈伤组织诱导的主
要因素有外植体 、植物生长物质种类及其配比等 、pH、温度 、光照
等 [ 2 ～ 4] 。本实验表明 ,外植体和植物生长物质是影响瓦松愈伤组
织诱导较为关键的因素。外植体中 , 叶片诱导率较高 , 达 80%以
·2832·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11
上 , 而茎和根难以诱导愈伤组织诱导 , 这与文献报道 [ 5 , 6]景天科
属植物大花红景天愈伤组织诱导选用的外植体为叶或叶柄 ,而根
和茎难诱导率低下的实验结果一致 ,这可能与瓦松叶片肉质肥厚
多汁 , 营养储备多 ,而茎和根较细(0.5 mm), 营养储备少 , 伤面又
较小等有关。植物生长物质种类及其配比试验中 , 6-BA对瓦松
愈伤组织诱导效果好 ,说明在瓦松愈伤组织诱导及继代培养中宜
使用 6-BA。通过 4因素 3水平正交实验证明 , 在培养基 MS+6
-BA1.0mg· L-1 +NAA0.1 mg· L-1上 , 瓦松愈伤组织诱导效
果最好。文献报道。 温度和 pH对瓦松愈伤组织诱导也有一定
的影响。本实验表明 , pH对瓦松愈伤组织诱导作用很接近 ,与文
献一致 , 温度对瓦松愈伤组织诱导作用不是很明显 , 20, 25, 30℃
的愈伤组织诱导率很接近 ,愈伤组织诱导最适温度为 25℃, 诱导
率可达 92%, 30℃诱导率也可达到 88%, 随着温度的降低 , 诱导
率则逐渐下降 , 15℃时仅为 64%。
表 3　不同植物生长物质种类和水平及其配比对愈伤组织诱导的影响
实验号 6-BA/mg·L-1 NAA/mg· L-1 成愈数 成愈率(%)
1 0 0 4 16
2 0 0.1 9 36
3 0 0.2 9 44
4 0.5 0.1 17 68
5 0.5 0.2 18 72
6 0.5 0 16 64
7 1.0 0.2 22 88
8 1.0 0.1 23 92
9 1.0 0 16 64
为了缓解压力 ,并对其野生资源进行有效保护 , 作者对瓦松
愈伤组织的诱导进行了研究。今后应对瓦松愈伤组织诱导及继
代培养 、组织快繁以及毛状根培养等进行深入的研究 , 并将对培
养出的各组织化学成分进行分析 ,以期提供利用组织培养方法和
生物技手段获得瓦松资源的途径。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:47.
[ 2 ] 　安桂花 ,许明子 ,李美善 ,等.植物激素对高山红景天试管苗愈伤组
织诱导的影响 [ J] .延边大学农学学报 , 2007, 29(3):153.
[ 3 ] 　赵银萍 ,李发荣 ,张九东 , 等.杂景天愈伤组织诱导及红景天苷测
定 [ J] .西北植物学报 , 2007, 27(8):1679.
[ 4 ] 　刘剑锋 ,阎秀峰 ,李　霞 , 等.高山红景天叶片愈伤组织诱导与植
株再生 [ J] .东北林业大学学报 , 2007, 35(2):33.
[ 5 ] 　白玛玉珍 ,李宝海 ,次仁措姆.大花红景天愈伤组织的诱导 [ J] .西
藏科技 , 2008, 2:74.
[ 6 ] 　沙　红 ,唐　芳 ,高　燕 , 等.大红红景天愈伤组织的诱导及植株
再生体系的建立 [ J] .新疆农业大学学报 , 2008, 31(3):58.
收稿日期:2009-05-08;　修订日期:2010-06-11
基金项目:天然产物研究与利用湖北省重点实验室资助项目
(No.2008NP02)
作者简介:杨兴海(1953-),男(土家族), 湖北宜昌人, 现任三峡大学医学
院教授 ,学士学位 ,主要从事天然药物化学成分和活性的筛选研究工作.
＊通讯作者简介:吴　杰(1981-), 男(汉族),湖南常德人 , 现为三峡大学
医学院在读硕士研究生 ,主要从事天然药物化学成分和活性的筛选研究
工作.
资木瓜皂苷对大鼠佐剂性关节炎的抗炎作用
杨兴海 1, 2 ,吴　杰1＊ ,郭莲军 3
(1.三峡大学医学院 ,湖北 宜昌　443002;　
2.天然产物研究与利用湖北省重点实验室 ,湖北 宜昌　443002;　
3.华中科技大学同济医学院 ,湖北 武汉　430030)
摘要:目的 探讨资木瓜皂苷(SCS)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗作用。方法 用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠形成
关节炎 , 观察 SCS对大鼠体质量 ,足跖关节肿胀度 , 关节炎症指数以及局部组织中 PGE2含量的影响。结果 SCS组与模
型组比较 , 能显著减轻大鼠足跖关节肿胀度 、关节炎症指数 , 降低局部组织中 PGE2含量。结论 SCS能改善 AA症状 、抑
制炎症免疫反应 , SCS的抗炎作用与下调炎症因子(PGE2)和抑制 T淋巴细胞增殖等有关。
关键词:木瓜皂苷;　佐剂性关节炎;　前列腺素 E2DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.11.052
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)11-2833-02
　　资木瓜为蔷薇科木瓜属植物贴梗木瓜的果实 ,原产于湖北长
阳资丘一带 , 是木瓜中的主流产品 [ 1] , 为鄂西南特有的地道中药
材 , 湖北省科技厅已将资木瓜列入十大地道中药材 , 重点扶持和
开发。本实验研究以皱皮木瓜传统应用为基础 ,以抗炎免疫为突
破点 , 利用现代药理学方法探讨和评价其中的活性成分 SCS抗
炎免疫作用。
佐剂性关节炎(AdjuvantArthritis, AA)是一种用 FCA免疫动
物而引发的慢性多发性关节炎 ,其病理过程 、病理形态学改变 、血
清学指标变化与人类 RA极为相似 , 是筛选和研究治疗 RA药物
的理想模型 [ 2] 。
本实验观察大鼠体质量 、足跖关节肿胀度 、关节炎症指数及
炎性足趾 PGE2的含量改变 , 为 SCS的深入研究和应用提供理论
依据。
1 　材料与仪器
1.1　动物 雄性 , Wistar大鼠 , SPF级 , 体质量(220±20)g,购自
湖北省实验动物中心 [许可证号:SCXK(鄂)2008-0005] 。
1.2　试剂和仪器 SCS经 D101大孔吸附树脂分离纯化 , 含量为
51%, 临用时用双蒸水配成所需浓度 ,溶液 pH7.4;雷公藤多苷片
(浙江普洛康裕天然药物有限公司):国药准字 Z33020778, 产品
批号 070601;弗氏完全佐剂(FAC, 北京鼎国生物技术发展中心出
品);所用试剂均为分析纯 , PV-200型动物足趾容积测量仪(成
都泰盟科技有限公司)。
2　方法
2.1　AA大鼠模型的建立 Wister大鼠 40只 , 除空白组外 , 余者
·2833·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11 时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期