全 文 ：第 41 卷 第 2 期
2 0 1 4 年 6 月
福 建 林 业 科 技
Jour of Fujian Forestry Sci and Tech
Vol. 41 No. 2
Jun.，2 0 1 4
doi:10. 13428 / j. cnki. fjlk. 2014. 02. 023
福建山樱花组织培养试验
黄树燕
( 福建省永安林业股份有限公司种苗中心，福建 永安 366000)
摘要:以半木质化枝条为外植体，探讨外植体消毒时间、植物生长调节剂对福建山樱花组培各阶段的影响，结果表明:外植
体先用 75%酒精消毒 30 s，再使用 0. 1%HgCl 溶液消毒 5 min 的消毒效果较好。较适宜的诱导培养基为:MS + 6-BA 1. 5
mg·L －1 + NAA 0. 1 mg·L －1;较适宜的继代培养基为:3 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1;较适宜的生根培
养基为:1 /3 MS + IBA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1，生根率达 97. 4%。生根苗移栽到泥炭土∶珍珠岩∶黄心土(6∶ 3∶ 1)
的基质中成活率可达 90%以上。
关键词:福建山樱花;组织培养;外植体;培养基;植物生长调节剂
中图分类号:S723. 1 + 32. 6 文献标识码:A 文章编号:1002 － 7351(2014)02 － 0103 － 04
The Experiment on Tissue Culture of Cerasus campanulata Maxim
HUANG Shu-yan
(Yongan Forestry Co.，Ltd.，Yongan 366000，Fujian，China)
Abstract:Taking half lignification stems as explants，this article discusses about the impact of sterilization time and plant growth reg-
ulator for Cerasus campanulata Maxim in each stage. The results showed that:the best method for sterilization of explant was 75% of
ethanol for 30 s first then 0. 1% of HgCl for 5 min. The optimum medium for continue generation subculture of C. campanulata Max-
im was 3 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1. Medium 1 /3 MS + IBA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1 was relative
suitable rooting medium for C. campanulata Maxim，with a rooting rate of 97. 4% . The survival rate of seedlings could reach above
90% in substrate of peat soil∶ perlite∶ yellow soil = 6∶3∶1.
Key words:Cerasus campanulata Maxim;tissue culture;explants;medium;plant growth regulator
福建山樱花(Cerasus campanulata Maxim)又名钟花樱，为蔷薇科樱属落叶小乔木或中乔木，主要分布
于福建、台湾、广东、广西、江西等省区及越南、日本等地。福建山樱花既喜阳又半耐荫，喜温暖又较耐高
温，抗逆性强，适应性广，是所有樱花品种中开花最早，花色最为浓艳的品种之一，观赏价值可与东京樱花、
垂枝早樱等相媲美。福建山樱花是集观赏、绿化、生态、食用等价值于一身的优良乡土树种。近年来越来
越受到园林工作者的青睐，并逐渐得以开发利用，取得良好的经济效益［1 － 2］。但福建山樱花种子结实量
少，采种期短，成熟时易为鸟食或爆裂，种子收集储藏困难且具有深度休眠特性。各种规格的苗木生产远
不能满足市场需求。因此，采用组培技术进行快速繁殖就成为重要的良种繁育途径［3］。目前，福建山樱
花组培快繁技术方面研究较少，本试验对福建山樱花外植体诱导、增殖培养和生根诱导培养等技术进行研
究，以期为组培工厂化育苗技术推广应用提供参考。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
2011 年 4 月采集福建山樱花(采自福建永安上坪)当年生、无病害的半木质化枝条作为外植体。
收稿日期:2013 － 07 － 04;修回日期:2013 － 10 － 21
基金项目:福建省科技计划项目、基本计划成果转化———星火计划重点项目(福建省山樱花等乡土树种快繁技术研究与
示范，2010S01010075)
作者简介:黄树燕(1984—)，女，福建将乐人，福建省永安林业(集团)股份有限公司助理工程师，从事林木育种与组培技
术研究。E-mail:zmhsy@ 163. com。
福 建 林 业 科 技 第 41 卷
1. 2 试验方法
1. 2. 1 外植体最佳消毒时间选择 枝条去叶去柄后，用 0. 1%的洗洁精溶液清洗，并用小软毛刷轻轻的
清洗枝条表面，自来水冲洗 20 min。在超净工作台上，用 75%酒精消毒 30 s，分别用 0. 1%的 HgCl 溶液
(添加 3 ～ 4 滴的吐温-80)消毒 3、5、8 min，用无菌水冲洗 6 ～ 8 遍。每组合分别随机选取 50 瓶，统计污染
率和无菌活体数量。
1. 2. 2 诱导培养基的筛选 将材料接种于 MS(Murashige and Skoog)+ 6-苄氨基腺嘌呤(BA)1. 0 ～ 2. 5
mg·L －1 + a-萘乙酸(NAA)0. 1 ～ 0. 2 mg·L －1的培养基中进行芽诱导培养，每瓶(200 mL 罐头瓶，下同)
接种 1 个外植体，每组合分别随机选取 50 个无菌芽，培养 15 d 并统计生长状况。
1. 2. 3 丛芽的继代培养与优化 把形成的丛芽切割后接种于继代培养基上，以 MS 为基础培养基(1 /2
MS、MS、3 /2 MS)，添加不同质量浓度 6-BA(0. 5、0. 75、1. 0 mg·L －1)、NAA(0、0. 25、0. 5 mg·L －1)、KT(0、
0. 25、0. 5 mg·L －1)进行 L9(3
4)正交试验，每组合接种 30 瓶，继代培养 25 d后，统计其丛芽增殖系数与生
长情况，筛选增殖阶段最适合的培养配方。
1. 2. 4 丛芽生根培养 继代苗增殖到一定数量后，选择芽丛中高 2 ～ 4 cm，展叶 4 ～ 5 片的单株切下，接入
以 MS、1 /2 MS、1 /3 MS为基础培养基，添加不同浓度 IBA(0. 5、1. 0 mg·L －1)、NAA(0. 1、0. 2 mg·L －1)进
行试验，每组合接种 30 瓶，每瓶 10 株苗，15 d后统计生根率。
1. 2. 5 炼苗与移栽 当生根苗根长至 3 ～ 5 cm 时，把组培瓶苗进行炼苗、移栽，基质选用泥炭土 ∶珍珠
岩∶黄心土(6∶3∶1)，随机抽取生根苗 300 株，移栽 45 d后统计成活率及生长状况。
1. 3 培养条件
以 MS作为基本培养基，附加不同浓度、种类的植物生长调节剂、蔗糖(继代培养 30 g·L －1，生根培养
20 g·L －1)、有机添加物(肌醇 100 mg·L －1、甘氨酸 2 mg·L －1、盐酸硫胺素 5 mg·L －1、盐酸吡哆醇 1
mg·L －1、烟酸 1 mg·L －1)、卡拉胶(继代培养 5. 5 g·L －1，生根培养 6. 0 g·L －1)，pH 值 5. 4 ～ 5. 8，温度
(25 ± 2)℃，辅助光照 10 h·d －1，光照强度 1600 ～ 2000 lx。
2 结果与分析
2. 1 福建山樱花外植体最佳消毒时间的选择
福建山樱花外植体消毒试验结果表明(表
1):外植体消毒时间的长短可影响外植体的无
菌活体的获得数量。升汞消毒 3 min对材料的
茎段无损害，死亡率为 14%，但污染率达
70%;升汞消毒 8 min，虽然污染率低，但对茎段
严重损害，死亡率高达 40%;升汞消毒 5 min，不
表 1 不同消毒时间对福建山樱花外植体的消毒效果
消毒时间 /
min
接种外植
体数 /个
污染率 /
%
死亡率 /
%
无菌活体率 /
%
3 50 70 14 16
5 50 12 10 78
8 50 18 40 42
但污染率较低，而且对茎段伤害较小，无菌活体率达 78%。
2. 2 福建山樱花诱导培养基的筛选
福建山樱花诱导培养基筛选试验结果表明(表 2):添加 6-BA 1. 0 mg·L －1时，茎段腋芽萌动率低，并
且出芽后生长缓慢;而添加 6-BA 2. 0、2. 5 mg·L －1时，茎段、新芽及叶片均已出现玻璃化现象;添加 6-BA
1. 5 mg·L －1时，不仅出芽率较高，而且叶片舒展，抽高明显，植株生长状况较好(图 1)。所以，较适宜的诱
导培养基为 MS +6-BA 1. 5 mg·L －1 + NAA 0. 1 mg·L －1。
表 2 不同诱导培养基对福建山樱花芽诱导的情况
培养基 出芽率 /% 生长情况
MS + 6-BA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 1 mg·L －1 50 出芽率低，部分出芽后生长缓慢
MS + 6-BA 1. 5 mg·L －1 + NAA 0. 1 mg·L －1 92 出芽率较高，叶片舒展，抽高明显
MS + 6-BA 2. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1 94 出芽率较高，叶片出现玻璃化现象
MS + 6-BA 2. 5 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1 90 茎段包括新芽均已玻璃化，出现畸形苗
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第 2 期 黄树燕:福建山樱花组织培养试验
图 1 MS + 6-BA 1. 5 mg·L －1 + NAA 0. 1 mg·L －1
培养基芽诱导的情况
2. 3 福建山樱花丛芽增殖培养基的筛选
当福建山樱花腋芽或顶芽抽出并抽高长叶时基部
茎段老化变黑，叶片出现变黄脱落等现象，就需多次转
接培养基以形成丛芽，针对组培苗出现的玻璃化、顶芽
黄化等现象，对增殖培养基的配方进行优化。
继代培养基筛选正交试验结果表明(表 3):4 个因
素中 6-BA极差最大，表明 6-BA对新芽的增殖起主导作
用，而 NAA对高生长起主要作用。芽的增殖倍数随 KT
浓度增加反而降低，表明 KT 对于芽的增殖及高生长起
到抑制作用，在继代培养中可不添加 KT，因此较适宜的
继代培养基:3 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2
mg·L －1(图 2)。
表 3 福建山樱花丛芽继代培养正交试验结果
处理号 大量元素
6-BA /
(mg·L －1)
NAA/
(mg·L －1)
KT /
(mg·L －1) 芽增殖倍数
芽平均生长高度 /
cm
1 1 /2 MS 0. 50 0 0 1. 56 1. 46
2 1 /2 MS 0. 75 0. 10 0. 25 2. 78 4. 24
3 1 /2 MS 1. 00 0. 20 0. 5 4. 12 5. 63
4 MS 0. 50 0. 10 0. 50 1. 96 2. 76
5 MS 0. 75 0. 20 0 3. 85 5. 58
6 MS 1. 00 0 0. 25 4. 78 4. 67
7 3 /2 MS 0. 50 0. 20 0. 25 2. 13 3. 35
8 3 /2 MS 0. 75 0 0. 50 3. 67 4. 36
9 3 /2 MS 1. 00 0. 10 0 5. 12 5. 89
T1 8. 46 /11. 06 5. 65 /7. 57 10. 01 /10. 49 10. 53 /12. 93 T = 29. 97 T = 36. 94
T2 10. 59 /13. 01 10. 3 /14. 18 9. 86 /12. 89 9. 69 /12. 26
T3 10. 92 /13. 60 14. 02 /16. 19 10. 1 /14. 56 9. 75 /12. 75
X1 2. 82 /3. 69 1. 88 /2. 52 3. 34 /3. 50 3. 51 /4. 31
X2 3. 53 /4. 34 3. 43 /4. 73 3. 29 /4. 30 3. 23 /4. 09
X3 3. 64 /4. 53 4. 67 /5. 40 3. 36 /4. 85 3. 25 /4. 25
极差 0. 82 /0. 84 2. 79 /2. 88 0. 02 /1. 35 0. 28 /0. 22
* :T1、T2、T3 分别为各水平的总值;X1、X2、X3 分别为各水平的平均值;数值形式为芽增值倍数 /芽平均生长高度。
2. 4 福建山樱花生根培养基的筛选
前期预备试验表明，1 /3 MS培养基为较适宜的基础培养基，且在 1 /3 MS 基本培养基上单独使用 IBA
或 NAA时，生根效果较差，均低于 50%。因此，试验中使用 IBA、NAA的不同组合观察其生根情况。
福建山樱花生根培养基筛选试验结果表明(表 4):添加 IBA 0. 5 mg·L －1时，生根率低于 90%，且基
部出现了白色愈伤组织，添加 IBA 1. 0 mg·L －1时，生根效果最佳;添加 NAA 0. 2 mg·L －1时，生根率较高，
且根系更发达。因此，有利于福建山樱花组培生根的培养基为:1 /3 MS + IBA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2
mg·L －1(图 3)。不仅根系良好健康，生根率可达到 97. 4%。
2. 5 炼苗与移栽
当生根苗根长至 3 ～ 5 cm时把瓶苗从培养室移到自然环境下进行炼苗 7 ～ 15 d，移栽前 1 ～ 2 d 将培
养瓶盖旋松，移栽前 1 d用 2. 5‰的高锰酸钾溶液进行消毒。从瓶中取出生根苗，洗净根系上的培养基，植
入泥炭土∶珍珠岩∶黄心土(6∶3∶1)的基质中，搭盖塑料薄膜拱棚，并保持空气湿度在 70%以上，7 d 后再适
当的降低空气湿度和喷水次数，增加通风时间。经统计，移栽 45 d后福建山樱花成活率可达 90%以上。
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福 建 林 业 科 技 第 41 卷
表 4 福建山樱花丛芽在不同培养基中的生长状况
基本培养基
IBA /
(mg·L －1)
NAA/
(mg·L －1)
生根率 /
% 根系生长状况
1 /3 MS 0. 5 0. 1 76. 3 1 ～ 2 条根，基部无愈伤组织
1. 0 0. 1 87. 1 3 ～ 4 条根，基部无愈伤组织
0. 5 0. 2 82. 8 1 ～ 2 条根，基部有白色愈伤组织产生
1. 0 0. 2 97. 4 4 ～ 5 条根，根系良好健康且基部无愈伤组织
图 2 3 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1
培养基继代培养情况
图 3 1/3 MS + IBA 1. 0 mg·L －1 +NAA 0. 2 mg·L －1
培养基生根情况
3 结论与讨论
试验结果表明:福建山樱花外植体使用 0. 1%HgCl溶液消毒 5 min 消毒效果较好。以 MS + 6-BA 1. 5
mg·L －1 + NAA 0. 1 mg·L －1培养基进行诱导，经过多次转接可诱导出丛芽。福建山樱花丛芽增殖较适宜
培养基为:3 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg·L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1;生根适宜的培养基为:1 /3 MS + IBA 1. 0 mg·
L －1 + NAA 0. 2 mg·L －1，生根率可达 97. 4%;福建山樱花组培苗在泥炭土∶珍珠岩∶黄心土(6∶3∶ 1)的基质
上移栽成活率较高(90%以上)。
近年来，有关樱花组培的报道中，相关于增殖阶段降低 NAA 的使用浓度以减少基部有团块的愈伤组
织出现［4］和提高腋芽分化率并加入 GA3 可促进不定芽的伸长
［5］。提出降低大量元素(MS基本培养基)的
使用浓度，减少其黄化和促进丛芽萌发的作用 ［6］。而福建山樱花在组培过程中出现了顶芽黄化的现象，
本试验提高大量元素(MS基本培养基)的使用浓度，从而有了良好的改善作用。随着继代次数的增多，丛
芽增值率会下降、长势变差，可转接 1 次不添加 BA 的培养基中壮苗加以改善，因此表明培养基中的植物
生长调节剂配比仍需调整，有待深入研究。福建山樱花在生根培养过程中可对其进行暗培养 5 ～ 7 d 或者
添加活性炭有利于生根率的提高［7 － 8］。
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