全 文 ：2006年12月
岳 阳 职 业 技 术 学 院 学 报
JOURNALOFYUEYANGVOCATIONALTECHNICALCOLLEGE
红檵木(Loropetalumchinensevar.rubrum),属
金缕梅科 (Hamamelidaceae)檵木属,系白檵木(L.
chinense)的变种。全世界檵木属有4个品种和1个
变种,其中白檵木、大果檵木、大花檵木3个品种和
红花檵木变种产于我国,其野生种产于湖南省湘东
山区,为珍贵的盆景材料,是观叶赏花的名贵木本
花卉。国内已对其进行了初步研究,如黄瑞康[1]、肖
盛华[2]在种质资源方面进行过调查研究;李党训[3]、
张琴[4]对嫩枝扦插,李昌珠[5]、周洁[6]对嫁接繁殖进行
了研究;彭信海[7]以腋芽,连芳清等[8]以带芽茎段快繁
成苗,杨金贵就叶色、花色等问题[1],张旺凡就花期促
控[9]进行了研究。李晨东、唐前瑞等对不同来源红檵
木进行了RAPD分析及分类学探讨[10];唐前瑞对红檵
木与檵木叶绿体超微结构进行了比较[11]。黄瑞康[1]、
姚诤[12]发表的文章谈论过红檵木桩景的维护和生
产问题,但未见直接用愈伤组织诱导分化成苗的
报导。
由于原生资源极少保存,种子繁殖又多用作育
种材料。为了加快红檵木的育种、脱毒快繁,保存、发
展种质资源,我们进行了红檵木组培的初步试验。
1材料与方法
1.1材料
红檵木外植体系湖南农业大学园艺园林实验
基地的苗圃,健康状态良好,生长旺盛,来源于同一
母株。
1.2方法
将母株上的幼叶,幼茎,幼茎,老茎,花瓣,花托
常规清洗,用70%的酒精浸泡1min,倒净酒精后用
0.1%的升汞泡 5~8min,无菌水漂洗三次(时间依次
为 2min,3min,5min,其间注意摇晃,让易浮于液面
的材料消毒或漂洗彻底)后备接种用。接种培养基
为 MS,蔗糖 30g/L,琼脂 7.5g/L,PH:5.8(a配方添加
NAA2.0mg/L;b配方添加 NAA2.0mg/L、BA0.5mg/L;
c配方添加 NAA2.0mg/L、BA1.0mg/L;d配方添加
NAA2.0mg/L、BA1.5mg/L;e配方添加 NAA1.5mg/L、
BA0.5mg/L;f配方添加 NAA1.0mg/L、BA0.5mg/L),
高压蒸汽灭菌冷凝后在无菌条件下接种 (压强
0.1~0.15Mpa,温度 120~127℃,时间 20min)。培养
于20~5℃,光照4000Lux,照明9~14小时/天的培养
箱中(暗处理则置于盒内)。
2结果和分析
2.1外源激素对诱导红檵木愈伤组织的影响
将外植体在 a,b,c,d四种培养基上培养 14
天开始启动形成愈伤组织,叶片外植体的切口边
缘开始膨胀肿大、产生红色瘤状突起,为较致密
的愈伤组织,继而愈伤组织不断生长,靠近叶中
脉切口处的愈伤组织生长较快。19天后记录实
验结果(表1,表2)。
表1 激素对诱导幼叶产生愈伤组织的影响
红檵木愈伤组织的诱导研究
王慧颖 唐前瑞 尹 恒
(湖南农业大学园艺园林学院,湖南 长沙 410128)
摘 要:为提高红檵木愈伤组织的诱导频率,以红檵木不同部位为材料,对影响红檵木愈伤组织形成
的几个主要因素进行了研究。结果表明,幼叶比老叶更容易产生愈伤组织。采用幼嫩部位的茎、叶作为外
植体,在MS+NAA2.0mg/L+BA0.5Lmg/L培养基上更容易获得更多愈伤组织。且在NAA1.5mg/L+BA0.5mg/L
的培养基中,经暗处理的比光照条件下的更不易衰老。
关键词:红檵木;组织培养;愈伤组织
中图分类号:S68 文献标识码:A 文章编号:1672-738X(2006)06-0052-04
收稿日期:2006-11-07
作者简介:王慧颖(1982-),女,湖南长沙人,湖南农业大学园艺园林学院2005级观赏园艺学专业硕士研究生。主要研究方
向:园林观赏植物遗传育种。
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DOI:10.13947/j.cnki.yyzyxb.2006.06.015
第21卷第6期
Table1Efectsofdiferenthormoneconcentrationonthecalusinducingfromnewleaves
当BA浓度从0增加到0.5时,愈伤组织的诱导率迅速上升,但继续增加到 1.0时,诱导率反而下降,
与浓度为0时差别不明显,再加大到1.5时,可以看出诱导率的显著下降。由此可以得出结论,对于幼叶添
加0.5mg/L的BA对诱导愈伤组织最有利。
表2 激素对诱导老叶产生愈伤组织的影响
Table2Efectsofdiferenthormoneconcentrationonthecalusinducingfromoldleaves
老叶较幼叶的启动时期稍长,愈伤组织的总体长势较慢。表2表明:BA浓度为0.5的培养基中诱导效果最
佳(诱导率为20%),在0.5的基础上增加或降低0.5诱导率都有所下降。降低1.0个浓度时,诱导率仅为6.7%。
2.2不同来源外植体对诱导红檵木愈伤组织的影响
前期幼茎比幼叶启动快诱导率高,后期叶愈伤组织体积增大快量更多。靠近叶中脉的切口边缘和茎两
端切口边缘愈伤组织长得相对旺盛,远离中脉的切口一端以及茎的中段也有愈伤组织形成。花瓣、花托始
终未启动,建议减少升汞泡侵泡时间、或通过切割利用伤口产生对诱导细胞分裂的自溶产物刺激启动。四
种不同外植体的愈伤组织诱导比较如表3所示。张瑞麟等曾在添加BA2.0、NAA0.2的MS培养基上,通过
剥去外层鳞片切成两半的地被菊幼蕾(自来水冲洗10min,70%的酒精消毒30s,0.2%的升汞泡8～10min,无
菌水冲洗5～6次)获得大量愈伤组织[13]。
表3 四种不同外植体的愈伤组织诱导比较
Table3Efectsofdiferentexplantsonthecalusinducting
2.3外源激素,暗处理对愈伤组织继代培养的影响
挑选在上b配方培养基上生长旺盛,结构相对疏松的愈伤组织继代培养。不同NAA浓度遮光处理,
并设不遮光处理为对照(CK),结果遮光处理的愈伤组织成活率明显高于对照,光照条件下的愈伤组织老化
快,体积增大慢。
激素浓度(mg.L-1) 接种数 形成愈伤组织数 愈伤组织诱导率
NAA BA (块) (块) (%)
2.0 0.0 30 8 26.7
2.0 0.5 30 22 73.3
2.0 1.0 30 7 23.3
2.0 1.5 30 5 16.7
激素浓度(mg.L-1) 接种数 形成愈伤组织数 愈伤组织诱导率
NAA BA (块) (块) (%)
2.0 0.0 30 4 13.3
2.0 0.5 30 6 20.0
2.0 1.0 30 3 10.0
2.0 1.5 30 2 6.7
外植体 接种数 形成愈伤组织数 愈伤组织诱导率
(块) (块) (%)
幼茎 24 21 87.5
幼叶 29 16 55.2
花瓣 40 0 0.0
花托 20 0 0.0
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暗处理有利于红檵木愈伤组织的继代培养。NAA浓度1.5的培养基在黑暗条件下能让愈伤组织更长时间
的保持新鲜(详见表4)。
表4 激素及暗处理对愈伤组织继代培养的影响
Table4Efectsofdiferenthormoneconcentrationanddarknessonthecalusgrowth
3讨论和小结
3.1 关于诱导愈伤组织成苗:赵玉芬、刘建等曾分别通过先由顶芽或带腋芽茎段得到的无菌苗茎段
培养出不定芽生根的方法首次对龙蒿[14]、羽衣甘蓝[15]的愈伤组织诱导成功。李霖、蒯娟则分别通过在培养
基中加细胞分裂素(KT)提高对紫花酢浆草[16]、条纹十二卷[17]的诱导率。张红梅等通过对愈伤组织复壮培
养,提高花叶连翘生根成苗率[18]。
3.2 关于防止愈伤组织褐变:褐变后使外植体的蛋白质聚合,生长停顿、死亡[19]。赵绮等认为材料消毒
过长会导致褐变[20];刘军等研究认为酒精消毒效果虽好,但易于致使材料褐变[21];傅术琳等等通过添加葡萄
糖、水解酪蛋白、脱落酸防止褐变并获得大量不定芽[22];张瑞麟、范敏则使用添加Vc的两相培养基,且预先
暗处理减小西瓜皮椒草中的褐变率[23]。ZAIDA研究认为BA不仅能促进酚类化合物的合成,而且能刺激多
酚氧化酶的活性,导致愈伤组织褐变[24]。谷瑞升等研究认为生长素可以减轻褐变化,主要是延缓多酚的合
成[25]。防止褐变的措施除了选择生长旺盛的外植体,缩短转瓶时间外,在培养基中加入抗氧化剂,如维生素
C,聚乙烯吡咯烷酮,柠檬酸,硫代硫酸钠,二硫苏糖醇,谷胱甘肽等。在实验室中也常用0.01%~0.1%的活性
炭吸附酚类物质[19]。概括起来,防止外植体褐变可以采取以下五种措施:一是选取适当的外植体和培养条
件,即选取具有较强的分裂能力的处于旺盛时期的外植体,或是利用酸性环境、静态培养和固体培养交
替等方式减轻褐变;二是添加合适的抑制剂,采用抗氧化剂或其它抑制剂来抑制,如水解乳蛋白(LH)、
EDTA、Vc(抗坏血酸)、活性炭、水解酪蛋白(CA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、果糖和葡萄糖等;三是添加
合适的吸附剂,如无机吸附剂活性炭,酚类物质的专一吸附剂 PVP(聚乙烯吡咯烷酮);四是进行细胞筛选
和材料的预处理,对外植体材料进行预处理尽量使组织中的酚类物质渗入培养基中,还可以及时将外植
体转移到新鲜培养基中或同一瓶培养基的不同部位,直到外植体的切口愈合后酚类物质就会减少为止;
五是进行适当的热激作用,利用植物体中多酚氧化酶活性与多酚含量平行的特点,通过影响植物多酚氧
化酶类活性,从而控制褐变。
参考文献:
[1]黄瑞康,杨金贵.红檵木资源调查研究[J].湖南农业科学,1998,(4):44-45.
[2]肖盛华,王国平.加强红檵木种质资源的保护与开发利用[J].湖南林业科技,1999,(9):45-48.
[3]李党训,李昌珠等.红檵木嫩枝扦插技术[J].林业科技开发,2001,(6):55.
[4]张琴,刘德良.红檵木嫩枝密闭扦插技术研究[J].浙江林业科技,2001,(5):46-48.
[5]李党训,李昌珠.白檵木作砧快速培育红檐木桩景的研究[J].湖南林业科技,2002,(9):26-28.
[6]周洁.快速培养红檵木[J].湖南林业,2002,(1):1.
[7]彭信海,黄承前,胡果生.红檵木的组织培养快速繁殖[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2001,(4):119-120.
[8]连芳清,肖德兴.红檵木快繁研究[J].江西林业科技,1995,(5):23-25.
[9]张旺凡.红檵木的花期促控[J].中国花卉盆景,2002,(5):15.
[10]李晨东,唐前瑞,陈德富.不同来源红檵木材料的RAPD分析及分类学探讨[J].园艺学报,2002,(3):358～362.
激素浓度(mg.L-1) 接种数 形成愈伤组织数 愈伤组织诱导率
NAA BA (块) (块) (%)
1.5 0.5(黑暗) 30 4 13.3
1.0 0.5(黑暗) 30 6 20.0
1.5 0.5(CK) 30 3 10.0
1.0 0.5(CK) 30 2 6.7
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第21卷第6期
[11]唐前瑞.红檵木与檵木叶绿体超微结构的比较[J].湖南农
业大学学报,2003,(2):41-42.
[12]姚净,红檵木盆景的培育与养护[J].花木盆景,1998,(34).
[13]张瑞麟,范敏.地被菊的组织培养及其快速繁殖[J].植物
生理学通讯,2001,(12):531.
[14]赵玉芬,刘满光.龙蒿的组织培养和快繁[J].植物生理学
通讯,2001,(8):309.
[15]刘建,周丽娟.羽衣甘蓝的组织培养[J].植物生理学通讯,
2001,(12):529.
[16]李霖,宋宜颖,鲁润龙,陈曦,尹路明.紫叶酢浆草的组织培
养[J].植物生理学通讯,2002,(8):360.
[17]蒯娟,谭文澄.条纹十二卷的组织培养与快速繁殖[J].植
物生理学通讯,2001,(2):36-37.
[18]张红梅,肖哓琴.花叶连翘的组织培养和快速繁殖[J].植
物生理学通讯,2002,(10):453.
[19]中国植物生理学会,植物生长物质委员会.植物生长调节
剂在植物组织培养中的应用[M].化学工业出版社,2002,9:
38-54.
[20]赵绮,周冬法.金边瑞香离体培养中芽和愈伤组织诱导初
步研究[J].浙江林业科技,2003,(11):20-24.
[21]刘军,丰震.影响月季愈伤组织诱导因素的初步分析[J].
山东林业科技,2004,(3)11-12.
[22]傅术琳,徐重益,程智慧.木立芦荟愈伤组织的诱导及快
速繁殖[J].植物生理学通讯,2002,(4):139.
[23]张瑞麟,范敏.西瓜皮椒草的组织培养及快速繁殖[J].植
物生理学通讯,2002,(2):45.
[24]ZAIDA,Invitrobrouningoftissuesandmediawith
specialemphasistodatepalmculturesAreview[J].Acte
Hort,1987,21(2):561-566.
[25]谷瑞丰,蒋湘宁,郭伸琛.植物离体培养中器官发生控制
的研究进展[J].植物学通报,1999,(3):238-244.
(责任编校:刘 武)
王慧颖 唐前瑞 尹 恒 红檵木愈伤组织的诱导研究
StudiesonCalusInducingofLoropetalumchinensevar.rubrum
WANGHui-yingTANGQian-ruiYINHeng
(DepartmentofHorticultureandLandscapeArchitecture,Changsha,Hunan410128)
Abstract:ThefactorsafectingthecalusinducingfromdiferentexplantsofLoropetalumchinensevar.
rubrumwerestudiedinthispaper.Theresultsshowedthatthenewstemandleafweretherightexplantstobe
usedtoinducecalus.AndMSmediumaddedwith2.0mg/LNAAand0.5mg/LBAwastheoptimalmediumfor
calusinducing.ItwasalsoindicatedthatcalusonMSwith1.5mg/LNAAanddarknesswasmorevigorous
thantheydidunderlight.
Keywords:Loropetalumchinensevar.rubrum;Tissueculture;Calus
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