全 文 ： 98 《食品工业》2010 年第 3 期
反相高效液相色谱法测定苣荬菜中的槲皮素
姚薇薇，刘宁*
乳品科学教育部重点实验室，东北农业大学食品学院 (哈尔滨 150030)
摘 要 建立苣荬菜中槲皮素含量的简便、快速测定方法。通过超声波法震荡提取苣荬菜中的槲皮素，
利用反相高效液相色谱法测定其含量。色谱条件为：色谱柱：Hypersil–ODS2 C18柱(4.6 mm ×250 mm, 5
μm)，流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(48:52, V:V)，检测波长：360 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：30℃
条件下等度洗脱。结果表明：槲皮素在(0.036~0.252) μg范围内与峰面积的线性关系良好（r=0.999 9），
平均回收率99.56%，RSD4.25% (n=6)。
关键词 苣荬菜；槲皮素；反相高效液相色谱法
The Determination of Quercetin in Sonchus arvesis L. by RE-HPLC
Yao Wei-wei，Liu Ning
Key Lab of Dairy Science, Ministry of Education; College of Food Science; Northeast Agricultural University
（Harbin 150030）
Abstract To establish an effective method for determining the content of quercetin in Sonchus arvesis L..
Quercetin was extracted with ultrasonic method and determined by RE-HPLC. The chromatographic conditions
were as follows: Hypersil–ODS2 C18 column (4.6 mm×250 mm, 5µm) as the chromatographic column, and
methanol-0.1% phosphoric acid water (48:52, V:V) as the mobile phase, the UV detection wavelength was 360
nm, with the fl ow rate of 1.0 mL/min at 30℃. The results showed: A good linear was obtained in the range of
(0.036~0.252) µg (r=0.999 9), the average recovery and RSD was 99.56% and 4.25% respectively(n=6).
Keywords Sonchus arvesis L；quercetin；RE-HPLC
苣荬菜(Sonchus arvesis L.)，多年生草本植物，菊
科苦苣菜属。它是一种纯天然绿色食品，主要生于路
边、田野中。营养价值丰富，为其它野菜所不及。同
时，苣荬菜具有很强的药用保健价值，具有清热解
毒，补虚止咳的作用，用于治疗菌痢、喉炎、内痔脱
出等疾病[1]。近代研究发现，苣荬菜中含具有多种生
物活性的黄酮类化合物槲皮素及其衍生物[2-3]，但关
于其有效成分含量测定的文献报道较少。本实验采用
高效液相色谱法测定苣荬菜中的槲皮素[4]，旨在通过
对苣荬菜中槲皮素含量的分析研究，为评价苣荬菜的
质量标准提供参考依据，同时为更深层次研究槲皮素
的生理及药理学活性奠定科学基础。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
Waters 2695 高效液相色谱仪，配有Waters 2487
紫外检测器和Waters Empower Pro工作站；SYNERGY
超纯水仪：美国Millipore公司；AL204精密电子天
平：瑞士梅特勒-托利多公司；LD-08A八两装中药粉
碎仪：温岭市大海药材机械厂；电热恒温鼓风干燥
箱：北京东联哈尔仪器制造有限公司；KQ-800GKDV
型高功率恒温数控超声波清洗器：昆山市超声波仪器
有限公司。
槲皮素对照品：中国药品生物制品检定所，批号
（100081~200406)；苣荬菜：黑龙江省药材公司，经
鉴定为菊科植物裂叶苣荬菜Sonchus arvesis L.的干燥
茎叶切段；甲醇、乙腈：色谱纯，天津市津冬天正精
细化学试剂厂；甲醇：分析纯，天津市光复化学试剂
厂；磷酸：分析纯，天津市天大化学试剂厂；超纯
水。
1.2 试验方法
1.2.1 对照品溶液的配制
精密称取槲皮素对照品12 mg，置于100 mL容量
瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取
上清液1 mL，置于10 mL容量瓶中，再次加入甲醇稀
释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，制成槲
皮素浓度为12 μg/mL的对照品溶液。
1.2.2 样品溶液的制备
将苣荬菜粉碎、过筛（80目），置干燥、阴凉处
备用。取约3 g样品粉末于250 mL具塞锥形瓶中，加
入50 mL甲醇，密塞，称定质量，超声波震荡提取2
h，放冷，用甲醇补足损失的质量，抽滤。精密吸取
滤液10 mL，向滤液中加入1 mL 12 M的盐酸，称重，
90℃条件下水解10 min[5]，立即放冷后，再次用甲醇
补足损失的质量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取
*通讯作者
分析检测
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续滤液作为上机样品溶液。
1.2.3 色谱条件
色谱柱：Hypersil – ODS2 C18柱(250 mm×4.6
mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(48:52,
V:V)，检测波长：360 nm；流速：1.0 mL/min；柱
温：30℃；进样量10 μL。
2 结果与讨论
2.1 提取方法的确定
黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂浸提法、煎
煮法、超声波提取法等。其中，超声波提取法可以利
用超声波增大物质分子的运动频率和速度，增加溶剂
渗透力，药物成分的溶出次数和溶出速度优于其他方
法。同时，对大多数有效成分的生理活性基本无影
响。考虑以上优点，实验采用超声波提取法提取苣
荬菜中的槲皮素，并设定提取时间分别为1 h、2 h、3
h，分别根据槲皮素峰面积计算其含量。结果显示提
取2 h时槲皮素的得率要明显高于1 h的，但3 h的得率
与2 h的接近。所以，确定提取方法为超声波法震荡
提取2 h。
2.2 提取条件的优化
槲皮素广泛存在于许多植物的花、叶、果实中，
多以甙的形式存在，经酸水解可得到槲皮素。实验初
曾尝试直接测定苣荬菜中槲皮素的含量，但结果不理
想。之后将苣荬菜提取物经HCl水解，与对照品色谱
图对比发现：在槲皮素对照品相同保留时间处有较
大的游离色谱峰。因此确定使用HCl水解槲皮素的甙
类。对于大多数黄酮苷而言，通常用1.2 M HCl在80℃
下回流提取2 h的方法。鉴于甲醇在高温条件下易挥
发，同时为在保证效率的前提下尽量缩短提取时间，
选用12 M的HCl，90℃下水解10 min。
2.3 色谱条件的选择
2.3.1 流动相的选择
实验采用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.05%磷
酸、甲醇-0.1%磷酸以及甲醇-0.2%磷酸溶液等在不
同比例下的流动相系统进行等度洗脱实验，比较不同
洗脱条件下的色谱图。结果显示，甲醇-0.1%磷酸水
溶液(48:52, V:V)条件下，分离色谱图峰形良好，与其
他各杂质峰分离完全，并且出峰较快，溶剂价格低
廉，为最佳流动相组成。
2.3.2 检测波长的选择
槲皮素对照品溶液在360 nm处有最大吸收，且实
验中样品杂质在此波长下干扰较小，因此选择360 nm
作为检测波长。
2.3.3 柱温和流速的选择
实验表明，柱温和流速是影响出峰时间的主要因
素。分别于柱温为25℃、28℃、30℃，流速为0.6 mL/
min、0.8 mL/min、1.0 mL/min条件下按上述色谱条件
进行色谱分析，记录色谱图。通过比较发现，随着柱
温和流速的升高，出峰时间逐渐缩短，在30℃、1.0
mL/min时出峰时间最短，同时峰型良好，故选择柱温
30℃、流速1.0 mL/min。
2.3.4 系统适用性考察
在最优色谱条件下，分别取槲皮素对照品溶液和
样品溶液注入色谱仪，比较两者的色谱图。结果表
明：槲皮素保留时间为6.949 min，与相邻色谱峰的分
离度＞1.5，峰型对称，样品中无其他组分色谱峰干
扰，可以用于苣荬菜中槲皮素的定性与定量分析。色
谱图见图1。
图1 槲皮素标准溶液和苣荬菜样品的高效液相色
谱图
2.4 线性关系
取预先配制的12 μg/mL 槲皮素对照品溶液，分
别进样3、6、9、12、15、18、21 μL，测定槲皮素
的峰面积。以进样质量为横坐标、峰面积为纵坐标，
绘制标准曲线，并以峰面积(Y)对槲皮素的进样量(X)
进行线性回归处理，计算相关系数。经计算，回归方
程为：Y=361 968X-8 633.7，相关系数r=0.999 9。表
明槲皮素在(0.036~0.252) μg范围内线性关系良好，
相关性显著。见图2。
图2 槲皮素含量的标准曲线图
2.5 精密度试验
重复吸取对照品溶液10 μL，进样6次，按上
述色谱条件进行测定，记录色谱图并计算峰面积，
RSD=0.312%，结果表明，相对保留时间的稳定度
高，精密度良好。
分析检测
100 《食品工业》2010 年第 3 期
专题论述
2.6 稳定性试验
按照“1.2.2所述方法”制备样品溶液，分别于
0、2、4、6、8、12、24 h精密吸取10 μL进入色谱
仪，分析并计算峰面积，RSD=0.702%，说明样品溶
液在24 h 内稳定。
2.7 重现性试验
称取同一批次的样品，按照“1.2.2所述方法”平
行制备5份样品溶液，各进样10 μL，按上述色谱条
件测定、记录峰面积，计算槲皮素的质量分数，RSD
为4.98%，重现性良好。
2.8 回收率试验
精密称取6份已知含量的苣荬菜粉末(约1 g)，
分别准确加入适量槲皮素对照品，按供试品溶液的
制备方法处理，测定槲皮素含量，得平均回收率为
99.56%，RSD=4.25%，见表1。表明该法加样回收率
较好。
表1 加样回收率试验结果
样品含
量 /mg
加入
量 /
mg
测得量 /
mg
回收率
/%
平均回
收率 /% RSD /%
0.168 6 0.12 0.2860 97.83
99.56% 4.25%
0.159 3 0.12 0.2745 96.00
0.174 8 0.18 0.3648 105.56
0.188 3 0.18 0.3761 104.33
0.166 5 0.24 0.3971 96.08
0.172 8 0.24 0.4070 97.58
2.9 样品测定
将 3 批不同批次的苣荬菜样品按“1.2.2所述方
法”制备成样品溶液，并按上述色谱条件和测定方法
进行测定，计算样品中槲皮素的含量，结果见表2。
表2 苣荬菜样品中槲皮素的含量 (n=3)
样品编号 含量 /mg·g- 1 平均值 /mg·g- 1
200901 0.1489
0.1169200902 0.1005
200903 0.1014
3 结论
通过优化苣荬菜中槲皮素提取条件，对高效液相
色谱法进行系统的方法学考察，证实该法具有准确、
稳定、重现性强的特点，适用于测定苣荬菜中槲皮素
的含量，可以为评价苣荬菜的质量标准提供参考依
据。
参考文献
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出版社, 1986, 1054-1055.
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究[J]. 中国中药杂志, 1996, 21(5): 292 -294.
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[5] Anna Wach, Krystyna Pyrzyn´ska, Magdalena Biesaga.
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Chemistry, 2007, 100, 699-704.
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