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平卧菊三七组培快繁研究



全 文 :平卧菊三七组培快繁研究
黄宝祥,聂 韡,朱培林,龚 斌
(江西省林业科学院,江西南昌 330013)
摘 要:以平卧菊三七茎段为外植体,对其进行增殖培养、生根培养和栽培试验,结果表明,增殖培养 MS + 6-BA 0.5~
1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L ,增殖倍数可达 4以上。生根培养 1/2 MS + NAA 0.1~0.5 mg/L,生根率 99%以上。掺 15%河沙的
红壤土作为栽培基质,生根苗移栽 30 d后,苗高 4 cm以上,成活率 98%以上。
关键词:平卧菊三七;组织培养
分类号:Q813.12 文献标识码:A 文章编号:1006-2505(2013)05-0011-03
平卧菊三七[Gynura procumbens (Lour.) Merr.]为菊
科菊三七属多年生宿根草本植物,菊三七属植物,我国
有 10种,主要分布于南部、西南部及东南部。平卧菊三
七以根或全草入药,具有止痛消肿、清热解毒功效,用
于牙痛、跌打伤痛、咽喉肿痛、痈肿疮疖等症状的治疗。
平卧菊三七有种子繁殖和扦插繁殖。本试验以平卧菊
三七茎段为外植体对其组织培养快繁技术进行研究,
取得了良好的实验结果,为它的生产提供了技术支
撑。
1 材料和方法
1.1 实验材料
试验用材料平卧菊三七采自江西武宁县,2011年
7、9、10月各采样 1次,共 3次,剪取当年生枝条。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体的表面灭菌。剪去枝条的叶子和木质化
较重部分,自来水洗净,用棉花团醮加入了少量冼洁净
的自来水,轻擦枝条及其液芽处,自来水冲洗 2 h 。在
超净工作台上,剪成带 1~2个腋芽的小段,放入经灭菌
处理的玻璃瓶中,70%酒精灭菌 30 s,无菌水冲洗 3
次,0.1%升汞灭菌 5~12 min,无菌水冲洗 3次。经上述
表面灭菌处理好的材料接种在空白 MS培养基上。
1.2.2 培养条件。培养条件:温度 26(±1) ℃,光照时间
12 h/d,光照强度 1 000~1 500 lx;MS培养基:卡拉胶,
pH 值 5.8~6.0,蔗糖 30 g/L,灭菌温度 121 ℃, 灭菌时
间 25 min。
2 结果与分析
2.1 外植体的表面灭菌处理
外植体进行表面灭菌时,0.1%升汞灭菌时间分别
为 6、9、12 min的灭菌效果见表 1。每瓶接种 1个外植
体,每组 100瓶。试验结果表明,灭菌时间短,污染严
重,获得的无菌苗很少。灭菌时间长,腋芽被杀死,虽然
污染少,但是,获得的无菌苗也很少,比较合适的灭菌
时间为 8~10 min,获得的无菌苗可达 20%。
2.2 平卧菊三七增殖培养
考察 6-BA 和 NAA对增殖培养的影响,每个浓度
10瓶,3个重复,试验 3次,计算它们的平均增殖倍数。
2.2.1 6-BA对增殖培养的影响。当培养基 NAA浓度
固定不变时,增殖倍数与 6-BA 浓度的关系见表 2或
图 1。试验结果表明,增殖倍数随着 6-BA浓度的升高
而增大,但是,6-BA 浓度大于 1.0 mg/L 后,增长趋于
平缓。NAA浓度 0.1 mg/L与 6-BA组合的增殖倍数高
于 NAA浓度 0.2 mg/L与 6-BA的组合。
2.2.2 NAA对增殖培养的影响。当培养基 6-BA浓度
固定不变时,增殖倍数与 NAA浓度的关系见表 3或图
2。试验结果表明,增殖倍数随着 NAA浓度的升高而快
速下降,这点和 NAA浓度固定不变时,考察 6-BA对
增殖培养的影响得到的结果是一致的。当 NAA浓度大
于 0.2 mg/L时,增殖倍数甚或小于未添加 NAA的单
收稿日期:2013-07-05
基金项目:江西省科技厅社发项目“中药材雷公藤高产优质种源选择”(20122BBG70100)。
作者简介:黄宝祥,男,研究员,主要从事植物生物工程研究。E- mail: huangbaoxiang@126.com
江西林业科技 2013年第 5期
序号
1
2
3
灭菌时间/ min
6
9
12
无菌苗得率/ %
2.4
21.5
3.6
表 1 0.1%升汞外植体表面灭菌效果
11· ·
DOI:10.16259/j.cnki.36-1342/s.2013.05.008
6-BA培养基的增殖效果。 从上述试验可以得出:影响平卧菊三七增殖培养
主要是细胞分裂素 6-BA,但是,当 6-BA浓度大于 1.0
mg/L后,效果不明显,且苗变细。生长素 NAA对增殖
倍数的提升贡献非常有限,添加了 NAA 比不添加
NAA有不到 15%的提高,然而,当 NAA浓度大于 0.1
mg/L,增殖倍数快速下降,大于 0.2 mg/L后,增殖倍数
还不及未添加 NAA。合适的 MS增殖培养基为:6-BA
浓度 0.5~1.0 mg/L,NAA小于 0.1 mg/L。
2.3 平卧菊三七生根培养
切取顶端长 2 cm左右的增殖苗,接种在 1/2 MS
培养基,添加 NAA浓度分别为 0、0.1、0.2、0.3、0.6 mg/L
进行生根培养,观察记录从接种到出现根原基的时间
和生根培养的状况,生根培养的状况包括根长 1.5~2
cm所需的培养时间,单株长出的根数量,生根率和苗
的生长情况等。生根培养试验见表 4和图 3,结果表
明,空白 1/2 MS不能长出有效根,NAA浓度从 0.1 mg/
L到 0.6 mg/L都能长出根,出根整齐、根粗壮。4个
NAA浓度的生根培养效果差别不大,如生根率、根数
量和苗的生长势等都比较接近,最大的差别是出现根
原基的时间或生根培养的时间,NAA浓度 0.1~0.2 mg/
L生根培养效果最好,接种 6~7 d后基部根原基伸长,
11 d即可移出培养室进行炼苗移栽。
2.4 平卧菊三七栽培试验
在院部取里层干净红壤土,摊开晴天晒 1 d,掺入
15%的河沙,搅均后装入育苗盆。将炼苗 4 d的生根苗
从培养瓶中取出,水洗去除根部培养基后栽植在育苗
盆中,栽完后立即用自来水浇透,以后用喷壶浇水,前
3 d早、中、晚各喷水 1次,后面视情况而定,保持表土
湿润即可。移栽苗见图 4,不施任何肥料,30 d后,4种
生根培养处理的苗情看不出差别,成活率都在 98%以
上,苗高 4 cm以上,完全满足大田移栽的要求。
3 讨论
本试验只考察了 MS 培养基添加 6-BA 和 NAA
的增殖培养,未做其它培养基类型和激素的增殖培养
序号 6-BA浓度/ mg/L NAA浓度/ mg/L 增殖倍数 生长状况
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、稍细
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、稍细
苗长势好、稍细
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
0.2
0.5
1.0
1.5
0.2
0.5
0.8
1.2
1.5
2.0
0.1
0.1
0.1
0.1
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
3.07
3.28
4.2
4.4
1.99
2.8
2.97
3.17
3.71
4.01
表 2 6- BA浓度对平卧菊三七增殖培养的影响
图 1 6-BA对增殖的影响
序号
6-BA浓
度/ mg/L
NAA浓
度/ mg/L
增殖
倍数
生长状况
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好、粗壮
苗长势好粗壮,基部稍有愈伤
苗长势好粗壮,基部有愈伤
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
0.5
0.5
0.5
0.5
0.7
0.7
0.7
0.7
0.7
0.7
0
0.1
0.2
0.5
0
0.1
0.2
0.3
0.5
1.0
2.94
3.29
2.55
2.31
3.11
3.62
2.98
2.71
1.86
2.03
表 3 NAA浓度对平卧菊三七增殖培养的影响
图 2 NAA对增殖的影响
序号
NAA浓度/
mg/L
根原基出
现时间/ d
单株根数
量/ 条
生根
率/ %
苗生长情况
1
2
3
4
5
0
0.1
0.2
0.3
0.6
6
6
10
12
/
7~11
7~11
6~10
6~10
假根
根粗壮、生长旺盛
根粗壮、生长旺盛
根粗壮、生长旺盛
根粗壮、生长旺盛
/
99.9
99.9
99.7
99.7
表 4 平卧菊三七的生根培养
12· ·
试验[1]。本试验得到的增殖倍数达到 4以上,满足了大
规模生产的要求。
添加 0.1~0.6 mg/L NAA的 1/2 MS培养基进行生
根培养,生根率近乎 100%,而空白 1/2 MS培养基中不
能长出有效根。然而,菊三七(Gynura segetum)1/2 MS0
培养基生根率 100%[2],由此可见,菊三七不同种源的
生根培养条件有很大的差异。
本试验完成了平卧菊三七的诱导、增殖、生根及栽
培的组培快繁全部过程,获得了很好的成果,对它的生
产推广有很好的指导作用。
参考文献:
[1]宋锡全,吴晓英,朱书晟,等.平卧菊三七茎段组织培养快速繁
殖[J].贵州师范大学学报/自然科学版,2011,29(4):1- 3.
[2]杨桦,邓小梅,龙蔚.菊三七的组织培养[J].江西林业科技,2000
(6):11- 12.
图 3 平卧菊三七生根苗 图 4 平卧菊三七移栽苗
Tissue Culture of the Gynura procumbens
HUANG Baoxiang, NIE Wei, ZHU Peilin, Gong Bin
(Jiangxi Academy of Forestry, Nanchang Jiangxi 330013, China)
Abstract: Tissue culture and cultivation of the Gynura procumbens was tested with its stem used as explants, the result showed
that the proliferation multiple is over 4, with the media MS + 6-BA 0.5 ~1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L; rate of rooting up 99%,
with the media 1/2 MS + NAA 0.1~0.5 mg/L; After 30 days, its height was over 4 cm, survival rate over 98%, when it is planted
in the media of red earth mixed 15% sand.
Key words: Gynura procumbens; tissue culture
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