全 文 ：高压而继发右室肥厚 [ 3, 5] , 故此模型被广泛用于非原发于心脏的
右心室肥厚和心力衰竭的研究。文献报道 [ 3] , 野百合碱单次皮
下或腹腔注射 1周即形成肺动脉高压 , 2周左右发生右室肥厚 ,
模型周期较短 , 成功率可达 90 %以上 ,大鼠存活时间长 , 可达 1
个月以上。我们的实验显示 , 野百合碱单次皮下注射 60 mg/kg,
18d时大鼠右心 、肺已呈明显心肌肥厚的重构特征。吴茱萸提取
物连续灌胃给药 18d,与模型组比较右室收缩压 、右室肥厚指数 、
右室重 /体重均见明显减轻;肺内肌型动脉中膜平滑肌增生和增
厚受到明显抑制 , 管腔增宽。实验结果表明 , 吴茱萸提取物能明
显抑制野百合碱引起的大鼠右心室肥厚。实验已表明 ,吴茱萸所
含生物碱能抑制血管平滑肌的增殖 [ 6] , 提示吴茱萸提取物抑制
大鼠右室肥厚的机制与其抗血管平滑肌的增殖 , 减轻肺动脉重
构 , 降低肺动脉压力有关。但非血流动力学因素不能排除 , 值得
深入研究。
参考文献:
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收稿日期:2009-02-19;　修订日期:2009-07-02
基金项目:赣南医学院人才引进科研项目(No.2006064, 2006069)
作者简介:李加林(1971-),男(汉族),安徽和县人 ,现任赣南医学院药学
院讲师 ,硕士学位 ,主要从事天然药物资源及活性成分研究工作.
兔儿伞不同溶剂提取物的体外抗氧化作用研究
李加林1 ,刘丽华 2 , 吴素珍2 ,范启兰 1 , 陈水亲2
(1.赣南医学院·药学院 ,江西 赣州 　341000;
2.赣南医学院 ·基础医学院 ,江西 赣州　341000)
摘要:目的 探讨兔儿伞乙醇 、丙酮 、醋酸乙酯 、水提取物体外抗氧化能力。方法 利用微波辅助提取法分别得到了兔儿伞
乙醇提取物 、丙酮提取物 、醋酸乙酯提取物和水提取物 ,采用 Fonton反应体系产生羟基自由基和邻苯三酚自氧化产生超
氧阴离子自由基。结果 4种提取物对羟自由基 、超氧阴离子自由基(O
2
-· )均有清除作用 ,其中以乙醇提取物的效果最
佳。结论 兔儿伞可作为抗氧化物质资源 , 有一定的开发利用价值。
关键词:兔儿伞;　自由基;　抗氧化活性
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)01-0145-02
　　自由基(freeradical)也称活性氧 , 很多情况下 , 它都缺少一
个电子 , 处于不稳定的状态。不稳定的自由基会从周围的物质中
夺取电子配对 , 这种行为就是自由基的氧化作用。被夺走电子的
物质 , 又去抢夺其它物质的电子。就这样 , 争夺电子的连锁反应
逐渐扩散到各处 , 细胞一个一个被氧化 , 从而失去了其正常功能。
越来越多的科学研究证实自由基是人体疾病和衰老的直接制造
者。人只要活着 , 自由基就在不断生成。自由基一旦大量产生 ,
超过身体内酶所能处理的程度 , 人的健康就会亮起红灯 , 出现癌
症 、动脉硬化 、糖尿病 、白内障 、风湿性关节炎 、巴金森氏症等多种
疾病 [ 1] 。
动物实验也指出 ,寿命的长短与自由基的产生及人体内抗氧
化剂的浓度确实有密切的关联;流行病学与临床研究报告也显
示 , 如果人体内有足够的抗氧化剂 , 则可降低多种疾病的罹患几
率。然而研究发现 , 合成抗氧化剂对人体具有潜在的威胁 , 如
BHA可造成大鼠前胃增生 、乳状瘤甚至癌变 , 在日本已被禁用;
BHT能使人的 Wl-38胚胎细胞分裂后期发生阳性的染色体异
常 , 甚至导致死亡 , 因此在美国和日本已经停止使用。随着消费
者自身健康意识的提高 , 天然抗氧化剂日益受到重视 [ 2 ～ 4] 。因
此 , 研究开发广谱 、高效 、安全的天然抗氧化剂 , 已经成为当今的
研究热点之一。
兔儿伞 Syneilesisaconitifolia(Bunge)Maxim.为菊科兔儿伞
属多年生草本植物 [ 5] , 含有黄酮 、维生素 、多糖等多种保健活性
成分和营养成分 ,其嫩叶和幼苗在我国民间许多地方都作为一种
药食两用食品 ,很受欢迎 [ 6] 。研究表明兔儿伞中黄酮类化合物
及生物碱含量较高 [ 7, 8] ,现代药理学对其抗炎镇痛作用进行了探
讨 [ 9] , 而对兔儿伞进行自由基清除的抗氧化研究未见报道 ,本文
首次对兔儿伞提取物(水提取物 、乙醇提取物 、丙酮提取物和醋
酸乙酯提取物)的抗氧化活性进行了探讨 , 以期为兔儿伞作为一
种天然的抗氧化物得到推广和利用。
1　材料与仪器
1.1　材料 兔儿伞由安徽师范大学张中信老师于 2007-06采自
安徽黄山 ,经安徽师范大学张小平教授鉴定为兔儿伞 Syneilesis
aconitifolia(Bunge)Maxim.。
1.2　仪器与试剂 WF-4000微波快速反应系统(上海屹尧分析
仪器有限公司);UV1900PPC紫外可见分光光度计(上海亚研电
子科技有限公司);电子天平(北京赛多利斯天平仪器厂)。所有
试剂均为分析纯。
2　方法
2.1　兔儿伞不同溶剂提取物制备 将一定量的兔儿伞干燥粉末
置于微波反应釜中 ,分别以水 、乙醇 、丙酮 、醋酸乙酯为溶剂 ,料液
比为 1∶60,微波功率 800 W,提取 3次 , 15 min/次 ,合并提取液 ,
减压浓缩 ,真空干燥备用。
2.2　羟自由基(· OH)的清除能力 采用亚铁离子催化 H2O2产
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生· OH(Fonton反应)的方法 [ 10 , 11] 。取 0.75 mol/L邻二氮菲溶
液 lml, PBS液 2 ml和蒸馏水 1 ml,充分混匀后 , 加 0.75 mmol/L
硫酸亚铁 Iml,混匀 , 加 0.01%的 H2O2 lml, 37℃水浴 60min,以
PBS液调零 , 536 nm处测定吸光度 , 其值记为 AP;用 lml蒸馏水
代替 lmlH
2
O
2
,以 PBS调零 , 测得吸光度记为 AB;用 1ml试样代
替 1 ml蒸馏水 , 以同浓度不加 H
2
O
2
的加试样管调零 , 测得吸光
度记为 As。 · OH清除率(d%)计算公式:d(%)=(As-AP)/
(AB-Ap)×100%。
2.3　超氧阴离子自由基(O2 -· )清除能力 取 0.05 mol/LpH
8.2的 Tris一 HCl缓冲液 4.5 mol于试管中 , 置 25℃水浴预热 20
min,加入供试样品 0.1ml, 2.5 mmol/L邻苯三酚 0.4 ml, 混匀后
在 25℃水浴反应 4 min加 8 mmol/L盐酸两滴终止反应 , (299 ±
1)nm处测定吸光度 , 空白组以 0.1 ml蒸馏水代替供试样品 , 并
按下式计算清除率 [ 12] 。 d% =(A空白 -A样品)/A空白 ×100%。
3　结果
3.1　不同溶剂提取物对羟自由基的清除作用 兔儿伞不同溶剂
提取物对· OH的清除作用如图 1所示。乙醇提取物对羟自由
基清除率的回归方程是:Y= 1.576 79 + 13.629 04X(R=
0.996 69), 丙酮提取物对羟自由基清除率的回归方程是:Y=
0.43101 + 9.935 53X(R= 0.999 8),水提取物对羟自由基清除
率的回归方程是 Y=0.007+5.033 5X(R=0.997 36),醋酸乙酯
提取物对羟自由基清除率的回归方程是 Y=6.729+5.614 5X(R
=0.969 9),由回归方程可求出兔儿伞的乙醇 、丙酮 、水 、醋酸乙
酯提取物对· OH清除率为 50%时的提取物浓度(IC50)分别为:
3.55, 4.99, 9.93, 7.70 mg/ml。由此可见 , 4种溶剂提取物对羟
自由基均有一定的清除作用 ,其中乙醇提取物对羟自由基的清除
效果最好。
图 1　兔儿伞不同溶剂提取物对羟自由基的清除作用
3.2　不同溶剂提取物对超氧阴离子自由基的清除作用 兔儿伞
不同溶剂提取物对 O2 -·的清除作用如图 2所示。乙醇提取物对
超氧阴离子自由基的清除率回归方程是:Y= 1.972 04 +
14.423 11X(R=0.996 5), 丙酮提取物对超氧阴离子自由基的清
除率回归方程是:Y=3.492 98 +10.304 75X(R=0.992 44), 水提
取物对超氧阴离子自由基的清除率回归方程是 Y=6.24X-1.02
(R=0.999 08),醋酸乙酯提取物对超氧阴离子自由基的清除率回
归方程是 Y=8.748+6.823X(R=0.971 74), 由曲线方程可求出
兔儿伞的乙醇 、丙酮 、水 、醋酸乙酯提取物对超氧阴离子自由基的
清除率为 50%时的提取物浓度分别为:3.33, 4.51, 8.18, 4.94mg/
ml。由此可见 ,兔儿伞 4种提取物对超氧阴离子都有一定的清除
作用 ,其中乙醇提取物对超氧阴离子自由基的清除效果最好。
图 2　兔儿伞不同溶剂提取物对超氧阴离子自由基的清除作用
4　讨论
人体内的氧自由基如游离羟基 、超氧阴离子等的过量产生 ,
是人体细胞衰老凋亡和癌变的重要原因。 · OH是毒性最大的
活性氧 ,它可以加成至碱基双键中 , 破坏碱基 , 从而破坏细胞内
DNA的结构 , 导致基因突变 [ 13] 。研究发现黄酮类物质 、花色苷
等可作为抗氧化药物对心血管起保护作用 [ 14] 。研究发现兔儿伞
4种提取物均有一定的清除 O2-·和· OH的作用 ,这可能与其含
有的黄酮类化合物有关 ,其中乙醇提取物对自由基的清除效果最
好 , 可能是因为以乙醇为提取剂时其中黄酮类化合物含量最高所
致。因此 , 兔儿伞作为一种潜在的抗氧化功能食品有待进一步深
入研究 。
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