全 文 ：第 2 期
收稿日期:2016 － 12 － 07
基金项目:广东省科技计划项目(2013B091604003)，广东省科技计划项目(2015B090906023)，广东省省级科技计划项目
(2014B070705001)
作者简介:通讯作者:王和平(1984—)，甘肃天水人，中国广州分析测试中心，本科，助理工程师。
高效液相色谱法测定辣木叶中的维生素 A
王和平* ，郑家概，张 飞 ，张志舟，蔡群娣，梁柳泳，丁少曼，陈 轶
(中国广州分析测试中心 广东省化学危害应急检测技术重点实验室，广东 广州 510070)
摘要:建立了测定辣木叶中维生素 A的高效液相色谱法。样品经过皂化提取后采用石油醚萃取，采用 C18柱(4． 6mm × 250mm，5μm)进
行分离检测，流动相为甲醇 /水 = 95 /5，流速 1． 0mL /min，荧光检测器:激发波长 325 nm，发射波长 485 nm，外标法定量。结果表明:维生
素 A在 1． 0 ～ 25． 0mg /L范围内线性良好，相关系数为 0． 9998，回收率为 87% ～ 102%，ＲSD为 3． 04 %，检出限为 0． 02mg /kg。该方法准
确可靠、灵敏度高，能够满足实际样品检测需要。
关键词:维生素 A;辣木叶;高效液相色谱法
中图分类号:O657． 7 文献标识码:B 文章编号:1008 － 021X(2017)02 － 0061 － 03
Determination of Vitamin A in Moringa Oleifera Leaves by
High Performance Liquid Chromatography
Wang Heping，Zheng Jiagai，Zhang Fei，Zhang Zhizhou，
Cai Qundi，Liang Liuyong，Ding Shaoman，Chen Yi
(Guangdong Provincial Key Laboratory of Emergency Test for Dangerous Chemicals，China
National Analytical Center(Guangzhou)，Guangzhou 510070． China)
Abstract:To develope a method for determination of Vitamin A in moringa oleifera leaves by high performance liquid
chromatography． The Vitamin A was extracted by ethanol and followed by saponification with 50%KOH solution，then extracted
with petroleum ether． HPLC separation of Vitamin A was conducted on a C18 column (4． 6mm × 250mm，5μm )with a mobile
phase of methanol and water(95 /5)at a flow rate of 1． 0 mL /min and quantified by the external standard method． Excation
wavelength was 325 nm and emission wavelength was 485 nm． The linearity were obtained in the range of 1． 0 ～ 25． 0mg /L with
correlation coefficients 0． 9998． The average recoveries of samples was in the range of 87% ～ 102% and ＲSD was 3． 04% ． The
determination of limit was 0． 02mg /kg． This method is found to be convenient、reliable and good linearity with low relative
standard deviation，and could meet the determination of Vitamin A in moringa oleifera leaves．
Key words:vitamin a;moringa oleifera leaves;high － performance liquid chromatography (HPLC)
辣木(Moringa oleifera )属辣木科植物，是一种营养价值很
高的热带植物，原产印度和非洲。辣木与灵芝、西洋参并称为
世界植物三宝［1］。辣木营养丰富，功效成分齐全，富含维生素、
氨基酸、活性酶和多种矿物质等［2］。其中，辣木叶营养价值很
高，是引起社会普遍关注辣木的重要原因之一［3］。辣木叶粉含
有丰富的维生素，特别是维生素 A 的含量较高，对人体有着独
特的营养价值［4 － 5］。目前，辣木叶粉已经被广泛用于多种食品
的研制和开发中，常见的有:辣木叶片剂、辣木茶、辣木强化食
品等［6 － 8］。
维生素 A(又称视黄醇)，具有保障大脑和视网膜的功
能，是人体生长发育过程中不可或缺的营养物质之一，对胎儿
和新生儿神经系统的发育起着至关重要的作用。缺乏维生素
A，易患夜盲症，引起免疫功能异常等问题［9 － 10］。维生素 A 为
脂溶性维生素，性质不稳定，前处理过程中避免接触强光。
目前，关于辣木叶中维生素 A 含量测定的研究报道很少。
本实验参照相关标准方法，建立了高效液相色谱法测定辣木叶
中维生素 A的分析方法，填补了相关检测的空白［11 － 12］，为其它
植物中维生素 A的检测提供方法参考。
1 实验部分
1． 1 实验仪器
Agilent 1260 高效液相色谱仪 －荧光检测器(FLD)(安捷伦
科技(中国)有限公司);KQ － 2200 型超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上海浦东荣丰科学仪器有
限公司)。XFB － 200 高速中药粉碎机(吉首市中诚制药机械
厂);KL512 型氮吹仪(北京康林科技有限责任公司);BT125D
电子天平(Sartorius)
1． 2 标准与试剂
维生素 A(≥99． 0%，Sigma);抗坏血酸;氢氧化钾(广州化
学试剂厂，分析纯);甲醇(Merck 色谱纯);无水乙醇(广州化学
试剂厂，分析纯);石油醚(广州化学试剂厂，分析纯);去离子
水;无水硫酸钠(广州化学试剂厂，分析纯)。
1． 3 标准溶液配制
准确称取维生素 A对照品 25． 0 mg于 100 mL无水乙醇中，
·16·王和平，等:高效液相色谱法测定辣木叶中的维生素 A
DOI:10.19319/j.cnki.issn.1008-021x.2017.02.026
山 东 化 工
作为标准储备液。移取储备液 1． 0mL于 100mL容量瓶中，用无
水乙醇定容。稀释后的溶液用 1cm 的比色皿在 325nm 处测吸
光度来标定浓度。以无水乙醇为空白，平行测定 3 次，取平均
值。计算方法如下:
C = AE ×
1
100
式中:C———维生素 A浓度，单位为 g /mL;
A———为维生 A的平均紫外吸光值;
E———为维生 A 1%比吸光系数(E1%am为 1835)。
1． 4 样品预处理
将样品剪碎后用高速粉碎机粉碎，过 40 目筛。
样品皂化:准确称取样品约 2 g 于 250 mL 皂化瓶中，加入
10mL 10%抗坏血酸，50 mL 无水乙醇后混合均匀，再加 20mL
50%氢氧化钾溶液，于沸水浴中皂化回流 30min，皂化后立即放
入冰水浴中冷却。
样品萃取:将上述溶液移入分液漏斗中，用 50mL水分 2 ～ 3
次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中，加入 100 mL 石油醚，轻轻
振摇萃取，静置分层，弃去水层。再重复萃取一次，合并萃取
液。用去离子水洗至中性。
过滤:将萃取液过无水硫酸钠脱水，用少量石油醚洗涤无
水硫酸钠合并于滤液中。
浓缩定容:将滤液用氮气吹至近干，立即加入 5mL甲醇，在
超声波清洗器中轻摇超声溶解，用 0． 45μm 滤头过滤后上机测
试。
1． 5 色谱条件
色谱柱:Agilent C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm);流速:1． 0
mL /min;进样量:20 μL;柱温 40 ℃;荧光检测器:激发波长 325
nm，发射波长 485 nm;流动相:甲醇 /水 = 95 /5。
2 结果与讨论
2． 1 样品前处理方法的选择
样品中维生素 A的前处理方法主要有皂化法、超声提取法
和固相萃取法。现行标准方法中主要采用加热回流皂化法提
取维生素 A。由于辣木叶中蛋白、纤维含量较高 ，采用皂化法，
不仅可以充分提取维生素 A，而且还可以免除基质中蛋白质和
纤维素的干扰。因此，选用加热回流皂化法。为了减少维生素
A的氧化损失，皂化过程加入抗坏血酸。
2． 2 流动相的优化
采用反相高效液相色谱测定维生素 A 时，常用流动相体系
主要有:甲醇 －水体系、乙腈 －水体系。因为甲醇成本较低，而
且毒性较小。维生素 A 流动相首选甲醇 －水体系。本实验分
别考察了甲醇、甲醇 －水(95:5)、甲醇 －水(90:10)和甲醇 －水
(80:20)对维生素 A分离的影响。结果表明流动相为甲醇 －水
(95:5)时，色谱峰形较好，出峰时间合适，作为最终流动相。色
谱图见图 1。
图 1 标准溶液的液相色谱图
Fig． 1 The chromatogram of standard
2． 3 辣木叶维生素 A的测定
辣木叶的前处理过程见“1． 4”，制得样品提取液，上机进行
测定，色谱条件同“1． 5”，得到的色谱图见图 2。
图 2 辣木叶样品的液相色谱图
Fig． 2 The chromatogram of sample
2． 4 线性范围
用无水乙醇将维生素 A 标准储备液稀释成浓度分别为 1．
0、5． 0、10． 0、15． 0、20． 0、25． 0 mg /L，上机测定，以维生素 A色谱
峰面积为纵坐标(Y)，标准浓度(X)为横坐标，求得线性方程为
Y =20． 596X + 3． 766，Ｒ2 = 0． 9998，可知维生素 A 在 1． 0 ～ 25． 0
mg /L范围内，线性良好。维生素 A 检出限为 0． 02mg /kg(信噪
比 S /N = 3)。
2． 5 精密度试验
选定浓度为 15． 0 mg /L的维生素 A标准工作液，进样量为
20 μL，连续进样 6 次，求得相对标准偏差 ＲSD为 2． 27%。结果
表明仪器的精密度良好。
2． 6 重现性实验
准确称量样品 6 份，按照“1． 4”进行样品前处理，上机测
定，求得相对标准偏差(ＲSD)为 3． 04 %。结果表明方法重现
性良好。
2． 7 稳定性试验
选定浓度为 20． 0 mg /L的维生素 A标准工作液，在室温避
·26· SHANDONG CHEMICAL INDUSTＲY 2017 年第 46 卷
第 2 期
光条件下，分别放置 0、2、4、6、8、10、12 h 后进样 20 μL，测量标
准峰面积，求得相对标准偏差 ＲSD为 2． 69%，表明维生素 A标
准工作液在 12 h内较稳定。
2． 8 加标回收率
准确称取样品 6 份，加入维生素 A 标准储备液，加标量为
0． 50 mg /kg。按照1． 4进行处理，采用外标法定量，求得样品
加标回收率为 87% ～102 %。方法的准确度较好，可满足测定
要求。
3 结论
本研究建立了辣木叶中维生素 A 的高效液相色谱测定方
法。该方法灵敏度高，重现性良好，适用于辣木叶中天然维生
素 A的提取测定，可为食品企业和相关检测机构提供方法参
考。
参考文献
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(本文文献格式:王和平，郑家概，张 飞，等．高效液相色谱法
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63．
檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯檯
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图 3 桶装水中亚硝酸根含量随加热时间的变化
Fig． 3 Bottled water nitrite content varied with the heating time
从图 1、图 2 和图 3 中可知，本实验所用饮水机在加热过程
中水温没有超过 85℃，加热到 14d 时，水中已经出现了亚硝酸
根。众所周知，亚硝酸盐(主要指亚硝酸钠和亚硝酸钾)是一种
极易溶于水、极不稳定和易分解的剧毒无机盐，食入 0． 3 ～ 0． 5 g
的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡，半致死量为 22mg /kg［4］。
所以桶装饮用水不宜长时间加热，最好尽快饮用完，饮水机加
热内胆也要经常清洗，防止其中死角内停留时间过长的水产生
亚硝酸盐。
3 结论
市售瓶装饮用水分为矿泉水和纯净水两类，矿泉水类中无
机盐含量远远高于纯净水类。但它们含量均符合 GB5749 －
2006《生活饮用水卫生标准》中的规定。
饮用水长时间反复加热会产生亚硝酸盐，长期饮用反复加
热的水不利于健康。
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(本文文献格式:吕墨钰，姚 强．瓶(桶)装饮用水水质分析与
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·36·王和平，等:高效液相色谱法测定辣木叶中的维生素 A