全 文 ：图 6 pH值对 α － AI活性的影响
4 结论
本研究从植物鹰嘴豆中提取 α －淀粉酶抑制剂是一种纯天
然的糖蛋白类物质，相对分子质量约为 40． 4k Da，其抑制常数 Ki
= 3． 14 × 10 －6 mol·L －1，鹰嘴豆 α － AI对温度及 pH值有较高的
稳定性，且安全无毒，可以有效地预防和治疗糖尿病，作为天然的
降糖药物具有良好的开发前景。
参考文献:
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收稿日期:2010-06-09; 修订日期:2011-01-05
基金项目:广西壮族自治区自然科学基金(No． 0731066)
作者简介:张士军(1974-) ，男(汉族) ，安徽望江人，现任广西医科大学副
教授，博士学位，主要从事抗肝病药物研究工作．
* 通讯作者简介:黄仁彬(1955-) ，男(汉族) ，广西灵山人，现任广西医科
大学教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事抗病毒性肝炎药、抗老年
性痴呆药、抗心血管药和抗肿瘤药物研究工作．
复方六月青对鸭乙型肝炎病毒
诱导肝损伤的保护作用研究
张士军，陈兆霓，林 兴，黄建春，李勇文，黄仁彬*
(广西医科大学，广西 南宁 530021)
摘要:目的 研究复方六月青(CLYQ)对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)诱导麻鸭肝损伤的保护作用。方法 采用 DHBV诱导广
西麻鸭乙型肝炎病毒肝损伤模型。于用药前(T0)、用药 7 d(T7) ，14 d(T14)及停药后 3 d(P3)分别检测鸭血清的丙氨酸
氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织病理变化。结果 用药后 CLYQ 中、高剂量组鸭血清 ALT 和
AST的含量显著降低(P ＜ 0． 01) ，并且有量效和时效关系。鸭肝脏病理学检查表明 CLYQ对 DHBV引起肝损伤有显著的
保护作用。结论 CLYQ可有效地保护 DHBV诱导麻鸭肝损伤。
关键词:复方六月青; 鸭乙型肝炎病毒; 丙氨酸氨基转移酶; 门冬氨酸氨基转移酶
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 07． 015
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)07-1582-02
Protective Effect of Compound Liuyueqing against Duck Liver Injury Induced by Duck
Hepatitis B Virus
ZHANG Shi-jun，CHEN Zhao-ni，LIN Xing，HUANG Jian-chun，LI Yong-wen，HUANG Ren-bin*
(Guangxi Medical University，Nanning 530021，China)
Abstract:Objective To study the protective effect of traditional Chinese medicine Compound Liuyueqing(CLYQ)on duck liver
injury induced by duck hepatitis B virus(DHBV)．Methods Liver injury induced by DHBV in Guangxi brown spotted ducks was
used as animal model． Alanine aminotransferase (ALT)and Aspartate Aminotransferase (AST)in serum were detected before
treatment(T0) ，7days(T7)and 14days(T14)after treatment． Liver histopathological examination was done． Results The serum
ALT and AST contents were decreased significantly by the treatment with the high dose and middle dose of CLYQ (P ＜ 0． 01) ，
and its effects were dose － and time － dependent． Liver histopathological examination confirmed that CLYQ had significant protec-
tive effects against liver injury induced by DHBV． Conclusion CLYQ can effectively protect the duck liver injury induced by DH-
BV．
Key words:Compound Liuyueqing (CLYQ) ;Duck hepatitis B Virus (DHBV) ;Alanine aminotransferase (ALT) ;As-
partate aminotransferase (AST)
六月青系爵床科(Acanthaceae)肖鸡笼属植物肖鸡笼 Tara-
phochlamys affinis(Giff)Bremekhu 的干燥地上部分［1］，为广西民
族特色草药。由六月青、白花蛇舌草、栀子花根等组成的复方六
月青(CLYQ，又称复方六月雪) ，是根据长时期的临床观察而拟
定的治疗急慢性乙型肝炎的验方，民间常用于治疗急性黄疸性肝
炎的湿热黄疸等证。本课题组首次对该方进了大量的研究，我们
发现 CLYQ体外和体内均可有效地抑制乙型肝炎病毒 DNA的复
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 7
制，显著降低 HBsAg 和 HBeAg 的滴度［2 ～ 5］，此外，研究尚发现
CLYQ对小鼠急性化学性肝损伤均有明显的保护作用［6］，我们的
实验结果初步显示 CLYQ在抗乙肝病毒、保护肝脏方面具有良好
的作用。本实验是前期系列研究的一部分，采用 DHBV 诱导广
西麻鸭肝损伤模型，研究 CLYQ 对 ALT 和 AST 及肝组织病理变
化的影响，进一步完善 CLYQ 的药效学研究，为把该方开发成抗
乙肝病毒中药新药提供实验依据。
1 材料与仪器
1． 1 药物 CLYQ，由广西医科大学药理学教研室采用醇水双提
的最佳工艺提取［7］。
1． 2 动物 广西麻鸭，体质量(50 ± 5)g，1 日龄，雌雄不拘，广西
畜牧良种养殖场提供。
1． 3 试剂 阿昔洛韦(aciclovir ACV) :湖南迪诺制药有限公司医
药工业研究所产品;ALT，AST改良赖式法检测试剂盒(四川省迈
克科技有限责任公司)。
1． 4 仪器 DU －640 紫外 －可见分光光度计:美国 Beckman 公
司。
2 方法
2． 1 鸭乙型肝炎病毒肝损伤模型的建立 参照本课题组前期已
成功建立的研究方法，采用 DHBV诱导广西麻鸭建立模型［3］。
2． 2 实验分组及用药 经 PCR 法检测筛选出感染阳性鸭，饲养
至 13 日龄作为实验动物进行药物治疗试验。将 50 只鸭随机分
为 5 组，每组 10 只。①模型对照组:等量的生理盐水;②阳性对
照组:ACV，0． 1 mg·kg －1·d －1;③CLYQ 高剂量组:6． 6 g·kg －1
·d －1;④CLYQ中剂量组:3． 3 g·kg －1·d －1;⑤CLYQ低剂量组:
1． 7 g·kg －1·d －1。各组动物在同样条件下饲养，均以每日 2 次，
早晚各 1 次，空腹灌胃给药 14 d。于用药前(T0)、用药 7 d(T7)、
用药 14 d(T14)、停药 3 d(P3)时，分别从胫静脉采血，每只 0． 5 ml
左右，分离血清，于 － 20℃保存备用。
2． 3 鸭肝功能检查 分别检测鸭血清 ALT及 AST的变化情况。
严格按照试剂盒说明书进行操作。
2． 4 鸭肝脏病理检查 于停药后 3 d将实验动物麻醉处死，立即
摘取肝脏，各组取肝右叶同一部位 1 cm × 0． 5 cm大小的肝组织用
酒精醋酸甲醛混合溶液固定，石蜡包埋切片，HE染色光镜观察。
2． 5 统计学处理 应用 SPSS11． 0 统计软件进行分析。数据以
珋x ± s表示，采用 t检验进行统计处理。等级资料采用 ridit分析。
3 结果
3． 1 CLYQ对肝损伤鸭血清 ALT 和 AST 的影响 各用药组与
模型组相比较，用药 7 d(T7)、用药 14 d(T14)、停药 3 d(P3)ALT
及 AST 有下降趋势，CLYQ 高剂量组有显著性差异意义(P ＜
0． 01)。且随着药物浓度和作用时间的增加，其抑制作用逐渐增
强，呈现明显的量效和时效反应关系。结果见表 1 ～ 2。
表 1 CLYQ对鸭血清 ALT的影响(珋x ± s) U·L －1
组别 T0 T7 T14 P3
模型对照 75． 80 ± 23． 85 78． 00 ± 21． 02 68． 70 ± 23． 85 69． 80 ± 22． 67
阳性对照 78． 55 ± 18． 62 42． 33 ± 13． 88＊＊35． 20 ± 7． 52＊＊ 49． 47 ± 8． 68＊＊
CLYQ高剂量 79． 65 ± 12． 40 52． 76 ± 9． 49＊＊ 36． 30 ± 7． 95＊＊ 29． 17 ± 7． 67＊＊
CLYQ中剂量 78． 55 ± 15． 90 57． 15 ± 15． 83＊＊47． 82 ± 15． 04＊＊58． 25 ± 13． 05
CLYQ低剂量 77． 45 ± 19． 56 66． 48 ± 17． 58 61． 54 ± 16． 57 66． 48 ± 14． 68
与模型组比较，* P ＜0． 05;＊＊P ＜0． 01;n =10
表 2 CLYQ对鸭血清 AST的影响(珋x ± s) U·L －1
组别 T0 T7 T14 P3
模型对照 194． 64 ±39． 62 185． 20 ±37． 88 178． 11 ±36． 19 182． 05 ±36． 43
阳性对照 199． 36 ±39． 27 135． 62 ±27． 46＊＊ 89． 98 ±23． 81＊＊132． 47 ±25． 38＊＊
CLYQ高剂量 203． 30 ±29． 86 141． 91 ±25． 70＊＊ 104． 14 ±20． 25＊＊ 99． 42 ±16． 67＊＊
CLYQ中剂量 201． 72 ±34． 24 160． 01 ±31． 27 145． 85 ±36． 58 158． 44 ±32． 86
CLYQ低剂量 206． 44 ±23． 98 177． 33 ±24． 95 173． 39 ±20． 32 174． 97 ±20． 92
与模型组比较，* P ＜0． 05;＊＊P ＜0． 01;n =10
3． 2 CLYQ对鸭肝组织病理的影响 病毒性肝炎主要病理改变
是肝细胞变性(中、重度水变性或脂肪变性)及坏死，间质性炎。结
果显示:模型对照组肝细胞出现弥漫性重度脂变;CLYQ高剂量组
肝组织病变与阳性对照组组相似，组织结构基本完整，说明有保肝
作用;CLYQ中剂量组肝细胞弥漫性轻度脂变，CLYQ 低剂量组肝
病变稍重，出现弥漫性中度脂变。结果提示 CLYQ 对肝组织无明
显毒性作用。通过 Ridit法统计分析，CLYQ高剂量组与阳性对照
组 u ＞2． 58(P ＜0． 01) ，CLYQ中剂量组 u ＞ 1． 96(P ＜ 0． 05)都有显
著意义，疗效的 3 个等级由低到高是按“差”到“好”排列，说明
CLYQ高剂量组的疗效显著高于中、低剂量组。结果见表 3。
表 3 CLYQ对鸭肝组织病理的影响
组别 1 级 2 级 3 级 4 级
模型对照 － 1 2 7
阳性对照 2 4 4 0
CLYQ高剂量 1 6 2 1
CLYQ中剂量 － 6 2 2
CLYQ低剂量 － 1 3 6
将病理变化分为 4 级;n =10
4 讨论
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的，以肝脏炎性病
变为主的一种传染性疾病。尽管已有干扰素及核苷类等各种抗
病毒药物，但其疗效均不理想。目前中草药抗病毒已成为国内外
的研究热点。乙型肝炎抗病毒药物的开发和评价中的重要环节
之一就是建立一种方便有效的体内病毒感染模型。HBV 是比较
严格的嗜肝 DNA病毒，其感染的宿主范围狭窄，具有明显的种属
特异性，很难在普通实验动物中建立疾病模型。
本课题组前期做了大量的调查研究工作，我们发现广西南宁
地区成年麻鸭对 DHBV 易感，是研究抗乙肝药物较理想的动物
模型［8］。并且，采用 DHBV诱导建立的广西麻鸭乙肝模型，其病
程较规律，病毒血症持续时间较长且较稳定，无明显的自然转阴
现象，保证了模型的稳定性和可靠性［3］。本实验采用该实验动
物模型研究 CLYQ对鸭乙肝病毒诱导肝损伤的保护作用，实验结
果表明，CLYQ 能够明显地降低鸭血清 ALT 和 AST 水平 (P ＜
0． 01) ，且呈现明显的量效和时效反应关系;病理学检查表明
CLYQ可减轻 DHBV引起肝损伤。本研究结果进一步提示 CLYQ
对 DHBV引起的肝损伤具有良好的保护作用，和我们前期研究
的结果相一致，即从多方面、多个指标的检测结果均说明 CLYQ
具有较好的抗 HBV的作用，值得进一步研究开发。
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