全 文 ：收稿日期：２０１１－１０－２０
基金项目：南阳师范学院ＳＴＰ项目（ＳＴＰ２００９００３）
作者简介：周　索（１９７０－），女，河南镇平人，副教授，硕士，主要从事植物遗传育种方面的教学和科研工作。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｕｓｕｏ２０４６＠１６３．ｃｏｍ
不同激素组合和附加物对翠菊下胚轴
愈伤组织诱导的影响
周　索
（南阳师范学院 生命科学与技术学院，河南 南阳４７３０００）
摘要：用翠菊下胚轴作外植体，研究不同激素组合和附加物对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响。结
果表明，在初代培养过程中，以 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　２．０ｍｇ／Ｌ对翠菊愈伤组织诱导具有较
好的促进作用，愈伤诱导率最高，为８６．６７％。培养基中同时加入５００ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白和１　０００
ｍｇ／Ｌ的Ｌ－脯氨酸可显著提高胚性愈伤组织的诱导率，诱导率达８６．６７％；甘露醇和ＡｇＮＯ３对胚性愈
伤组织诱导率提高无明显作用，但愈伤组织生长更加旺盛，较致密，更有利于以后继代和分化。
关键词：翠菊；愈伤组织；激素；附加物
中图分类号：Ｓ６８２．１＋１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３２６８（２０１２）０５－０１１３－０４
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｅｎｄａｇｅｓ　ｏｎ
Ｃａｌｕｓ　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｏｆ
Ｃａｌｌｉｓｔｅｐｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ＺＨＯＵ　Ｓｕｏ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｙａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｙａｎｇ　４７３０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｏｆ　Ｃａｌｌｉｓｔｅｐｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｎ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅ－
ｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｌａｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ
ｆｏｒ　ｄｉｒｅｃｔ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　２．０ｍｇ／Ｌ，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｒａｔｅ　ｏｆ　８６．６７％．Ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　５００ｍｇ／Ｌ　ｃａｓｅｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ　ａｎｄ　１　０００ｍｇ／Ｌ　Ｌ－ｐｒｏｌｉｎｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ．Ｄ－ｍａｎｎｉｔｏｌ　ａｎｄ　ＡｇＮＯ３ｈａｄ　ｎｏ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｒａｔｅ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｕｓ　ｂｕｔ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｆａｖｏｕｒｅｄ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｒ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｌｌｉｓｔｅｐｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ｃａｌｕｓ；ｈｏｒｍｏｎｅ；ａｐｐｅｎｄａｇｅｓ
　　翠菊（Ｃａｌｌｉｓｔｅｐｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ），属菊科多年生草
本植物，叶卵圆形至披针形，边缘具粗大锯齿或深
裂。秋季开花、头状花序顶生。翠菊为多年生宿根
草本花卉，栽培历史悠久，分布广泛，是人们比较喜
欢的一种花卉［１］。随着生活水平的不断提高，人们
在工作之余，赏花、观花、养花的越来越多，因而各种
花卉也在不断被开发利用。翠菊作为一种观赏植物，
还可以用来布置花坛、用作切花。另外，翠菊还具有
一定的药用价值，具有清热解毒、平肝凉血之功效。
翠菊的繁殖常用分株、扦插、嫁接等方式进行，
其中分株较易，但繁殖数量少，速度慢［２］。而采用组
织培养的方法，并利用组培过程中的外部环境条件，
如外源激素及附加物来控制愈伤组织的形成，对于
翠菊的快速繁殖具有重要的意义［３］。目前，对影响
翠菊下胚轴诱导愈伤组织产生的不同激素配比的研
究报道较少。因此，探讨不同植株组织分化的培养
条件，特别是培养基中适宜的不同激素组合及附加
物仍具有重要价值［４－５］。鉴于此，以翠菊为材料，研
　河南农业科学，２０１２，４１（５）：１１３－１１６
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
DOI:10.15933/j.cnki.1004-3268.2012.05.031
究不同激素组合配比及附加物对翠菊愈伤组织诱导
频率的影响，以期找出适合翠菊愈伤组织诱导的最
佳激素组合及附加物的培养基，为其集约化生产提
供理论依据。
１　材料和方法
１．１　试验材料
取翠菊的下胚轴，用自来水冲洗，去除其表面黏
附物。然后在超净工作台上用７５％的乙醇浸泡
３０ｓ，再用０．１％的升汞消毒５ｍｉｎ，之后使用无菌
水洗３遍。取灭过菌的滤纸，吸干外植体表面水分，
在超净工作台上将外植体切成长度约０．５ｃｍ，即得
无菌外植体。将其接种于添加不同激素组合的 ＭＳ
培养基上，接种密度为每皿（直径９．０ｃｍ的培养皿）
１５个，每种培养基４皿。
１．２　培养基
以 ＭＳ为基本培养基，研究添加不同激素（６－
ＢＡ、ＩＡＡ、ＮＡＡ）质量浓度组合的配比（表１）和附加
物（表２）对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响。培养
基ｐＨ值均调至６．０，保持１２１℃灭菌２０ｍｉｎ，琼脂
粉为７．７ｇ／Ｌ，蔗糖为３０ｇ／Ｌ。
表１　初代培养基中６－ＢＡ、ＩＡＡ、ＮＡＡ质量浓度组合
ｍｇ／Ｌ　
培养基编号 ６－ＢＡ　 ＩＡＡ　 ＮＡＡ
１　 ０．２　 １．５　 ０
２　 ０．２　 ２．０　 ０
３　 ０．２　 ２．５　 ０
４　 ０．２　 ０　 ０．１
５　 ０．２　 ０　 ０．２
６　 ０．２　 ０　 ０．３
７　 ０．２　 ０　 ０
８　 ０．５　 １．５　 ０
９　 ０．５　 ２．０　 ０
１０　 ０．５　 ２．５　 ０
１１　 ０．５　 ０　 ０．１
１２　 ０．５　 ０　 ０．２
１３　 ０．５　 ０　 ０．３
１４　 ０．５　 ０　 ０
１５　 ０．８　 １．５　 ０
１６　 ０．８　 ２．０　 ０
１７　 ０．８　 ２．５　 ０
１８　 ０．８　 ０　 ０．１
１９　 ０．８　 ０　 ０．２
２０　 ０．８　 ０　 ０．３
２１　 ０．８　 ０　 ０
表２　培养基中不同附加物组合 ｍｇ／Ｌ　
培养基编号 水解酪蛋白 Ｌ－脯氨酸 甘露醇 ＡｇＮＯ３
Ａ　 ０　 ０　 ０　 ０
Ｂ　 ５００　 ０　 ０　 ０
Ｃ　 ５００　 １　０００　 ０　 ０
Ｄ　 ５００　 １　０００　 １０　 ０
Ｅ　 ５００　 １　０００　 １０　 １．５
１．３　外植体培养条件
外植体的培养条件设２个处理，处理１：在
（２５±２）℃，光照强度为１　０００ｌｘ，光照时间１０ｈ／ｄ
的条件下培养；处理２：在（２５±２）℃，光照强度为
１　５００ｌｘ，光照时间２４ｈ／ｄ的条件下培养。１０ｄ之
后统计诱导愈伤组织率及愈伤组织质量。每个处理
采用３０个外植体。愈伤组织诱导率＝诱导出愈伤
组织的下胚轴数／接种的下胚轴×１００％。
２　结果与分析
２．１　６－ＢＡ对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响
在含６－ＢＡ的诱导培养基上，３～５ｄ后开始长
出愈伤组织，１０ｄ左右出现大量愈伤组织。表３表
明，在一定范围内，随着６－ＢＡ质量浓度的增加，愈
伤组织产生的数量增多，增殖速度快，愈伤产芽的数
量增加；当６－ＢＡ质量浓度达到０．５ｍｇ／Ｌ时，产生
的愈伤组织生长情况最好；在６－ＢＡ质量浓度达到
０．８ｍｇ／Ｌ时，多数愈伤组织产生玻璃化现象。因
此，添加０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ的 ＭＳ培养基是最适宜的
培养基。
表３　不同质量浓度的６－ＢＡ对翠菊下胚轴愈伤
组织诱导的影响（接种１０ｄ）
培养基
代号
６－ＢＡ质量
浓度／（ｍｇ／Ｌ）
外植体
数／个
产生愈伤的外
植体数／个
愈伤组织
诱导率／％
７　 ０．２　 ３０　 １２　 ４０．０
１４　 ０．５　 ３０　 ２４　 ８０．０
２１　 ０．８　 ３０　 １９　 ６３．３
２．２　不同激素组合对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的
影响
由表４可见，以 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ
２．０ｍｇ／Ｌ组合对下胚轴愈伤组织的诱导率最高，为
８６．６７％，且愈伤组织生长情况最好。说明细胞分裂
素（６－ＢＡ）与ＩＡＡ配合使用，有利于翠菊下胚轴诱
导愈伤组织的产生。同时可以看出，培养基附加的
ＩＡＡ在一定程度上起到了协助６－ＢＡ诱导愈伤组织
分化的作用。
４１１ 河南农业科学 第４１卷　
表４　不同种类激素组合对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响（接种１０ｄ）
培养基编号 外植体数／个
产生愈伤的外植体
个数／个
愈伤组织
诱导率／％
长势　　　　　
１　 ３０　 ８　 ２６．６７ 愈伤组织团小
２　 ３０　 １０　 ３３．３３ 愈伤组织团小
３　 ３０　 １０　 ３３．３３ 愈伤组织团小
４　 ３０　 １４　 ４６．６７ 愈伤组织团略大，颜色较深
５　 ３０　 ８　 ２６．６７ 愈伤组织团小
６　 ３０　 １１　 ３６．６７ 紧凑的小愈伤组织团
８　 ３０　 １９　 ６３．３３ 愈伤组织明显增多
９　 ３０　 ２６　 ８６．６７ 愈伤组织量最多，长势最佳
１０　 ３０　 １８　 ６０．００ 愈伤组织量较多
１１　 ３０　 １８　 ６０．００ 个别外植体两端都有愈伤产生
１２　 ３０　 ２３　 ７６．６７ 愈伤组织量较多
１３　 ３０　 ２０　 ６６．６７ 愈伤组织团体积较大
１５　 ３０　 １４　 ４６．６７ 愈伤组织团体积较大
１６　 ３０　 １６　 ５３．３３ 愈伤组织有玻璃化
１７　 ３０　 １５　 ５０．００ 愈伤组织有玻璃化
１８　 ３０　 １９　 ６３．３３ 愈伤组织颜色较深，紧凑
１９　 ３０　 １６　 ５３．３３ 愈伤组织团大，色深，紧凑
２０　 ３０　 １６　 ５３．３３ 愈伤组织团大，色深，紧凑
２．３　不同附加物对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响
表５表明，培养基Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ的愈伤组织诱导
率均高于培养基Ａ；培养基Ｃ的愈伤组织诱导率明
显高于培养基 Ａ、Ｂ；培养基Ｃ、Ｄ、Ｅ的愈伤组织诱
导率相差不大。说明附加物的加入确实提高了愈伤
组织诱导率，其中５００ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白和１　０００
ｍｇ／Ｌ的Ｌ－脯氨酸配合使用能明显提高愈伤组织
表５　不同附加物对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响
培养基
编号
外植体个数／个
产生愈伤组织的
外植体个数／个
愈伤组织
诱导率／％
Ａ　 ３０　 ２０　 ６６．６７
Ｂ　 ３０　 ２３　 ７６．６７
Ｃ　 ３０　 ２６　 ８６．６７
Ｄ　 ３０　 ２５　 ８３．３３
Ｅ　 ３０　 ２５　 ８３．３３
的诱导率（８６．６７％）；甘露醇和ＡｇＮＯ３的加入对提
高愈伤组织诱导率的作用不大，但是甘露醇和
ＡｇＮＯ３能提高愈伤组织的质量，愈伤组织生长更加
旺盛，较致密，更有利于以后继代和分化。
２．４　不同培养条件对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的
影响
培养３～５ｄ后，在外植体边缘切口处均有黄绿
色颗粒状愈伤组织出现。培养７ｄ时，在光照强度
为１　５００ｌｘ，光照２４ｈ／ｄ条件下（处理２）培养的外
植体切口处有黄绿色的愈伤组织形成，但明显不如
处理１（１　０００ｌｘ，１０ｈ／ｄ）所形成的愈伤组织多（表
６），并且处理１在形成愈伤组织的同时即伴有不定
芽的发生。在处理１条件下形成的愈伤组织培养
１０ｄ时生长旺盛，长势最佳，而处理２在１０ｄ后不
再有新的愈伤组织发生。由此结果可知，翠菊下胚
轴愈伤组织的诱导适宜在弱光条件下进行。
表６　不同培养条件对翠菊愈伤组织诱导的影响
培养时间／ｄ
处理１
愈伤组织诱导率／％ 长势
处理２
愈伤组织诱导率／％ 长势
３～５　 ２３．３３ 出现颗粒状愈伤组织 １３．３３ 有少许颗粒状愈伤组织
７　 ４６．６７ 愈伤组织增多，生长旺盛 ３３．３３ 愈伤组织有所增加
１０　 ７６．６７ 愈伤组织明显增多，长势最佳 ５３．３３ 愈伤组织量较多
１５　 ８６．６７ 愈伤组织量继续增加 ５６．６６ 愈伤组织长势不明显
３　讨论
６－ＢＡ对愈伤组织的诱导和生长非常有效，在培
养基中加入６－ＢＡ，主要是为了促进细胞分裂及愈伤
组织的形成［６－７］，在组织培养中一般常用其作为培养
基中的生长激素。据报道，培养基中不附加或附加
低质量浓度６－ＢＡ无法刺激产生愈伤组织［８］，所以，
本试验中选取６－ＢＡ质量浓度在０．２ｍｇ／Ｌ和０．８
５１１　第５期 周　索：不同激素组合和附加物对翠菊下胚轴愈伤组织诱导的影响
ｍｇ／Ｌ之间。在试验中观察到，培养基中的激素质
量浓度组合为 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　２．０
ｍｇ／Ｌ时对愈伤组织诱导率最高。以上试验结果表
明，激素ＩＡＡ与６－ＢＡ组合的质量浓度适当时较激
素ＮＡＡ与６－ＢＡ组合诱导效果好。所以，ＭＳ＋６－
ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼
脂７．７ｇ／Ｌ培养基的成分及激素组合对翠菊的组织
培养是很适合的，而且中间不需要更换培养基，可以
直接在初代培养基上诱导出愈伤组织，对于翠菊的
快速繁殖具有重要意义。
愈伤组织的诱导是一个极其复杂的生理、生化
过程，是植物细胞工程研究的开端［９］。诱导出高质
量的愈伤组织将为下一步细胞培养研究奠定良好的
基础。胚性愈伤组织是组织培养中最理想的愈伤组
织类型，是基因转化的良好受体和获得再生植株所
必需的愈伤组织［１０］。据报道，水解酪蛋白、Ｌ－脯氨
酸、甘露醇、ＡｇＮＯ３ 等对胚性愈伤组织的诱导和胚
性的保持都起到关键作用［１１］。本试验结果表明，在
ＭＳ培养基中添加５００ｍｇ／Ｌ的水解酪蛋白和１　０００
ｍｇ／Ｌ　Ｌ－脯氨酸时愈伤组织诱导率最高，这与
Ａｍｓｔｏｎｇ等［１２］和付凤玲等［１３］的试验结果基本一致。
但试验结果表明，添加 ＡｇＮＯ３ 对翠菊愈伤组织的
诱导作用并不明显，这与Ｓｏｎｇｓｔａｄ等［１４］的结果不
太一致。有关ＡｇＮＯ３ 的作用和用量已有的报道不
尽相同，还需要进一步研究。
组织培养是植物快速繁殖的有效方法，更是种
质资源保存和创新的重要工具［１５－１６］。众多学者就愈
伤组织诱导进行了大量的研究。但是针对翠菊下胚
轴愈伤组织诱导方面的报道较少，研究结果在拥有
共性的同时也存在着差异。本试验结果为翠菊系统
化组织培养提供了有效的数据资料，进而为翠菊品
种改良及广泛种植提供理论依据。
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ｎｏｂｏｒｎａｄｅｉｎｅ　ｏｎ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｍａｉｚｅ　ｃａｌｕｓ
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６１１ 河南农业科学 第４１卷