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HPLC法同时测定田基黄中 4 个黄酮类成分含量
彭 维，王永刚，苏薇薇*
(中山大学广州现代中药质量研究开发中心，广东 广州 510275)
摘要 目的:建立同时测定田基黄中 4 个黄酮类成分(异槲皮苷、槲皮苷、田基黄苷、槲皮素)含量的 HPLC 方
法。方法:采用 HPLC法，色谱柱为 Agilent HC C18(250 mm × 4. 0 mm，5 μm) ，流动相为甲醇-2. 5%冰醋酸溶液(36
∶ 64) ，检测波长为 255 nm，流速为 1. 0 mL /min;分别采用外标测定法(以槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素对照
品为对照)、一测多评法(以槲皮苷对照品为内标)测定含量。结果:外标测定法 4 个黄酮类成分在标准曲线范围内
均呈良好线性关系(r ＞ 0. 9990) ;平均加样回收率分别为:异槲皮苷 101. 66%、槲皮苷 98. 21%、田基黄苷 100. 98%、
槲皮素 99. 00%，RSD分别为 1. 42%、2. 61%、1. 99%、2. 29%。一测多评法异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素相对槲皮苷
对照品的校正因子 f分别为 1. 155、0. 993、0. 737，RSD分别为 0. 52%、0. 10%、1. 77%。两种方法测得的含量相对偏
差小于 0. 5%，无显著差异。结论:本实验建立的以槲皮苷对照品为内标的一测多评法具有可行性，只需一个对照
品，经济实用，可替代外标测定法用于田基黄的质量分析，为全面评价田基黄药材的质量提供了依据。
关键词 异槲皮苷;槲皮苷;田基黄苷;槲皮素;高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2 文献标号:A 文章编号:1001-4454(2011)08-1229-03
收稿日期:2011-03-13
作者简介:彭维(1971-) ，女，副主任药师，主要从事天然药物分析;Tel:020-84112398。
* 通讯作者:苏薇薇，Tel:020-84110808。
田基黄又名地耳草，为藤黄科金丝桃属植物田
基黄 Hypercum japonicum Thunb. 的干燥全草，具有
清热利湿、解毒消肿、散瘀止痛的功效，用于急、慢性
肝炎〔1〕。现代药理研究表明:总黄酮类化合物是田
基黄发挥药效的主要物质基础〔2〕，其中的黄酮成分
主要为槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素，均以槲
皮素为母核。本文采用 HPLC 法对田基黄中槲皮
苷、异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素 4 个黄酮同时定量
分析，比较以槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素 4
个黄酮对照品为对照的外标测定法与以槲皮苷对照
品为内标测定异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素校正因
子，计算 4 个黄酮含量的一测多评方法的区别。结
果表明:本研究方法简便、快速，专属性强，重复性及
加样回收率好，两种方法测得的含量相对偏差小于
0. 5%，无显著差异。说明本实验建立的以槲皮苷对
照品为内标的一测多评方法具有可行性，只需一个
对照品，经济实用，可替代外标测定法用于田基黄的
质量分析，为全面评价田基黄药材的质量提供了科
学依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 DIONEX 高效液相色谱仪(P680 四元
梯度泵、真空脱气机、自动进样器、PDA-100 检测器
及 Chromeleon 工作站) ;ELMA T660 /H 超声波清洗
器(功率 360 W，频率 35 kHz) ;Sartorius BP211D 电
子分析天平。
1. 2 材料 甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为
超纯水。槲皮苷(批号:111538-200504)、槲皮素(批
号:100081-200406)对照品均由中国药品生物制品
检定所提供;异槲皮苷、田基黄苷对照品自制(经结
构确证及 HPLC法检测，面积归一化质量分数分别
为 97. 45%、98. 04%) ;田基黄药材为自采及购买，
来源见表 2，经中山大学生命科学学院廖文波教授
鉴定为藤黄科金丝桃属植物田基黄 Hypercum japoni-
cum Thunb. 的干燥全草。
·9221·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.08.025
2 方法与结果
2. 1 外标测定法
2. 1. 1 色谱条件:Agilent HC C18色谱柱(250 mm
×4. 0 mm，5 μm) ;流动相:甲醇-2. 5%冰醋酸溶液
(36∶ 64) ;检测波长:255 nm;流速:1. 0 mL /min;柱
温:30 ℃;进样量:10 μL。
2. 1. 2 对照品溶液的制备:分别精密称取五氧化
二磷真空干燥至恒重的异槲皮苷、槲皮苷、田基黄
苷、槲皮素对照品，加甲醇分别制成对照品母液，再
制成含异槲皮苷 150. 6 μg /mL、槲皮苷 205. 1 μg /
mL、田基黄苷 269. 0 μg /mL、槲皮素 151. 0 μg /mL
的混合对照品溶液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备:取田基黄药材粗粉
1. 0 g，精密称定，置 100 mL 具塞三角瓶中，精密加
水 50 mL，称定重量，沸水浴回流提取 30 min，放冷，
再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密
量取续滤液 25 mL，减压回收至近干，残渣加 50%甲
醇超声使溶解，定量转移至 10 mL 容量瓶中，加
50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤膜
滤过，作为供试品溶液。
2. 1. 4 系统适用性试验:分别量取对照品溶液、供
试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，结果异槲皮
苷、槲皮苷、田基黄苷及槲皮素色谱峰均能与样品中
其他成分峰分离良好。理论板数按槲皮苷峰计算应
不低于 6 000，田基黄苷与槲皮素色谱峰达到基线分
离，分离度大于 1. 5。色谱图见图 1。
图 1 4 种对照品(A)和田基黄供试品(B)色谱图
1. 槲皮苷 2. 异槲皮苷 3. 田基黄苷 4. 槲皮素
2. 1. 5 线性关系考察:精密吸取对照品溶液 1、2、
6、10、14、18 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件
测定色谱峰面积，以对照品进样量 X(μg)为横坐
标，峰面积 Y 为纵坐标，进行线性回归。线性关系
见表 1。结果表明各黄酮成分在各自进样量范围内
线性关系良好。
表 1 4 种黄酮成分对照品的线性关系
成分 回归方程 r 线性范围 /μg
异槲皮苷 Y1 = 39. 824X1 － 0. 2402 0. 9999 0. 1506 ～ 2. 7108
槲皮苷 Y2 = 45. 855X2 － 0. 4107 0. 9999 0. 2051 ～ 3. 6918
田基黄苷 Y3 = 50. 063X3 － 3. 5731 0. 9996 0. 2690 ～ 4. 8420
槲皮素 Y4 = 64. 866X4 － 2. 4101 0. 9999 0. 1510 ～ 2. 7180
2. 1. 6 精密度试验:取混合对照品溶液，按
“2. 1. 1”项下色谱条件，进样 10 μL，平行测定 5 次，
测得异槲皮苷、槲皮苷、田基黄苷、槲皮素峰面积
RSD 分别为 0. 18%、0. 15%、0. 26%、0. 48%，表明
仪器精密度良好。
2. 1. 7 稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，按
“2. 1. 1”项下色谱条件，分别在 0、6、12、24、48 h各进
样 10 μL，测定峰面积，测得异槲皮苷、槲皮苷、田基黄
苷、槲皮素峰面积的 RSD 分别为 0. 15%、0. 15%、
0. 30%、0. 57%，表明供试品溶液在 48 h内稳定。
2. 1. 8 重复性试验:取同一批号的田基黄药材粉
末各 6 份，精密称定，照“2. 1. 3”项下方法制备供试
品溶液，按“2. 1. 1”项下色谱条件，进样 10 μL，测定
异槲皮苷、槲皮苷、田基黄苷、槲皮素 4 个黄酮成分
的含量并计算 RSD 值分别为 1. 93%、2. 82%、
2. 90%、2. 24%，表明该法重复性好。
2. 1. 9 加样回收率试验:精密称取已知异槲皮苷、
槲皮苷、田基黄苷、槲皮素含量分别为 4. 33、7. 90、
16. 64、3. 65 mg /g的田基黄药材粉末按高、中、低浓
度各 3 份，再分别精密加入一定量的对照品，按
“2. 1. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 1. 1”项下
色谱条件，进样 10 μL，测定异槲皮苷、槲皮苷、田基
黄苷、槲皮素 4个黄酮成分的含量并计算平均加样回
收率分别为 101. 66%、98. 21%、100. 98%、99. 00%;
RSD值分别为 1. 42%、2. 61%、1. 99%、2. 29%，表明
此方法回收率较好。
2. 1. 10 外标法含量测定:取田基黄药材粉末样
品，精密称定，照“2. 1. 3”项下方法制备供试品溶
液，分别精密吸取 4 个黄酮混合对照品、供试品溶液
各 10 μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图。根据异
槲皮苷、槲皮苷、田基黄苷、槲皮素对照品色谱峰的
峰面积及供试品对应的色谱峰的峰面积计算 4 个黄
·0321· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月
酮成分的含量，结果见表 2。
表 2 外标法测定田基黄中 4 种黄酮含量 /(mg/g)
批号 产地 异槲皮苷 槲皮苷
田基
黄苷 槲皮素 总计
1 广西桂林 4. 33 7. 90 16. 64 3. 65 32. 52
2 广西梧州 5. 01 9. 19 17. 55 4. 04 35. 78
3 广西南宁 3. 63 6. 92 11. 71 3. 18 25. 44
4 广东花都 5. 33 11. 30 7. 99 2. 82 27. 44
5 湖南郴州 2. 28 8. 81 4. 46 1. 53 17. 09
6 福建龙岩 1. 55 2. 51 2. 70 1. 74 8. 51
2. 2 一测多评法 以槲皮苷对照品为内标的一测
多评法是以槲皮苷主峰的保留时间为 1. 0，计算异
槲皮苷、田基黄苷、槲皮素相对保留时间，根据它们
的相对保留时间确定各成分色谱峰的位置。通过测
定异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素的校正因子，计算这
3 个成分的含量，达到多指标(4 个黄酮的含量)同
步测定法的目的。
2. 2. 1 色谱条件、对照品溶液的制备、供试品溶液
的制备、系统适用性试验:分别同“2. 1. 1”、
“2. 1. 2”、“2. 1. 3”、“2. 1. 4”项下内容。
2. 2. 2 校正因子的测定:将已知浓度的异槲皮苷、
槲皮苷、田基黄苷、槲皮素对照品混合溶液低、中、高
浓度 2、10、18 μL(n = 3)注入液相色谱仪，记录色谱
图，以槲皮苷色谱峰为内标，计算相对响应值作为校
正因子。结果表明:异槲皮苷、田基黄苷、槲皮素对
槲皮苷对照品的相对校正因子分别为 1. 155、
0. 993、0. 737。结果见表 3。
表 3 校正因子测定结果(n =3)
成分 浓度 校正因子f值 f平均值
RSD
/%
异槲皮苷 低 1. 162
中 1. 150 1. 155 0. 52
高 1. 152
田基黄苷 低 0. 994
中 0. 992 0. 993 0. 10
高 0. 992
槲皮素 低 0. 752
中 0. 733 0. 737 1. 77
高 0. 727
2. 2. 3 一测多评法含量测定结果:取田基黄药材
粉末样品，精密称定，照“2. 1. 3”项下方法制备供试
品溶液，分别精密吸取槲皮苷对照品、供试品溶液各
10 μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图。根据相对
校正因子，计算样品中各成分的含量，结果见表 4。
表 4 一测多评法测定田基黄中 4 种黄酮含量 /(mg/g)
批号 产地 异槲皮苷 槲皮苷
田基
黄苷 槲皮素 总计
1 广西桂林 4. 35 7. 90 16. 65 3. 67 32. 57
2 广西梧州 5. 03 9. 19 17. 56 4. 06 35. 84
3 广西南宁 3. 64 6. 92 11. 72 3. 20 25. 48
4 广东花都 5. 35 11. 30 7. 99 2. 84 27. 49
5 湖南郴州 2. 29 8. 81 4. 47 1. 54 17. 11
6 福建龙岩 1. 55 2. 51 2. 70 1. 76 8. 53
3 讨论
3. 1 田基黄中以槲皮素为母核的异槲皮苷、槲皮
苷、田基黄苷、槲皮素 4 个黄酮类成分在 255 ± 1 nm
处均有最大吸收峰，故外标法及一测多评法均可以
255 nm为检测波长，同时测定其含量。
3. 2 外标测定法与一测多评法测定结果的相对偏
差小于 0. 5%，表明上述两种方法无显著差异，说明
本实验建立的以槲皮苷对照品为内标的一测多评法
具有可行性，只需用槲皮苷对照品，即可进行多指标
同步测定，可替代外标测定法用于田基黄的质量分
析。
3. 3 本研究建立的方法简便、快速，专属性强，重
复性及加样回收率好，在外标法基础上建立的一测
多评法，经济实用，为全面评价田基黄药材的质量提
供了更简便、科学的方法。
参 考 文 献
［1］广东省食品药品监督管理局 . 广东省中药材标准［S］.
第一册 . 广州:广东化学工业出版社，2004:73-75.
［2］陈丽云，杨立伟，苏薇薇 . 田基黄及其注射液的研究进
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525-526.
《中药材》杂志为中国自然科学核心期刊。
·1321·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月