全 文 ：第 1 卷 第 4 期
Vol． 1 No． 4
郑州师范教育
Journal of Zhengzhou Normal Education
2012 年 8 月
Aug． 2012
不同类型生长素及浓度对翠菊叶片
愈伤组织诱导的影响
周 索，李 景 照
(南阳师范学院 生命科学与技术学院，河南 南阳 473000)
收稿日期:2012 － 02 － 10
作者简介:周索(1970 －) ，女，河南南阳人，南阳师范学院副教授，主要研究方向:植物遗传育种。
基金项目:河南省科技厅基础与前沿资助项目(112300410122)。
摘 要:用翠菊叶片作外植体，以 MS为基本培养基，设计不同类型的生长素及不同浓度梯度的生长素对翠菊叶
片进行愈伤组织诱导。结果表明:在初代培养过程中，1． 0 mg /L的 IBA ，0． 1 mg /L的 NAA和 0． 1 mg /L的 2，4 － D对
翠菊叶片愈伤组织诱导具有较好的促进作用，但愈伤诱导率最好的培养基为 MS + NAA 0． 1 mg /L，诱导率为 81． 3%。
关键词:翠菊叶片;组织培养;生长调节物质
中图分类号:S682 文献标识码:A 文章编号:2095 － 3488(2012)04 － 0052 － 02
翠菊(Callistephus chinensis)为菊科翠菊属多年
生草本花卉，叶卵圆形至披针形，边缘具粗大锯齿或
深裂，秋季开花，头状花序顶生。其栽培历史悠久，
分布广泛，色彩丰富艳丽，是优良的花坛花卉和切花
材料;同时它还有一定的药用价值，具清热解毒，平
肝凉血之功效［1］。翠菊常用分株、扦插、嫁接等方式
进行繁殖。虽然分株较容易，但繁殖数量少、速度
慢。采用组织培养的方法对翠菊的快速繁殖具有重
要的意义。组织培养是提高植株优良记忆型的选择
效率、加速优良基因型纯合过程的有效手段和途径，
但由于受基因型的影响，不同的品种之间的组织培
养特性表现出一定的差异［2］。目前以翠菊叶片为外
植体进行组织培养的报道少见。因此，探讨不同植
株组织分化的培养条件，特别是对探讨培养基中何
种生长素为宜和最适的浓度仍具有重要价值［3］。采
用翠菊幼嫩叶片为材料在不同类型生长素和不同浓
度生长素的培养基中进行离体培养，找出适合翠菊
叶片愈伤组织诱导的最佳类型的生长素和最适浓度
的培养基，以期获得再生植株，为翠菊的离体繁殖提
供一条值得参考的途径，同时为大量扩繁集约化的
生产提供一定的参考依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
先用流水冲洗翠菊叶片 1 ～ 2 h，去除其表面粘
附物。然后在超净工作台上用 75%酒精浸泡 30 s，
随即用 0． 1%氯化汞消毒 5 min，然后再用无菌水冲
洗 3 次。取灭过菌的滤纸，吸干外植体表面水份，在
超净工作台上切取合适大小的叶片作为外植体进行
组织培养，接种于添加不同类型的生长素和不同浓
度梯度的培养基上。
1． 2 培养基
以 MS为基本培养基，在实验中添加不同类型
的生长素和不同浓度梯度的生长素(见表 1)。所有
培养基在保持 121 oC 灭菌 20 min 之前 pH 均调至
6． 0，琼脂粉为 7． 7 g /L，蔗糖为 30 g /L。
表 1 初代培养基中生长素类型及浓度
生长素类型 培养基编号 生长素浓度
NAA 1 0． 1
2 0． 5
3 1． 0
IBA 4 0． 1
5 0． 5
6 1． 0
2，4 － D 7 0． 1
8 0． 5
9 1． 0
注:每皿 10个外植体，每种处理 40 个外植体。
1． 3 外植体接种及培养方法
按常规在超净工作台上将已消毒的叶片切成边
长为 0． 5 cm的小正方形，接种于诱导培养基上。接
种密度均为每皿(直径 9． 0 cm培养皿)10 个，在(25
± 1)℃，光强为 1500 ～ 2000 lx，光周期为 14 h 光 /
10 h暗的条件下培养。每天观察实验结果，1 ～ 2 周
后记录结果，调查愈伤组织诱导率。该实验每个处
理采用 40 个外植体。
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2 结果与分析
2． 1 不同类型的生长素对翠菊叶片愈伤组织诱导
的影响
由表 2 可见，含有 2，4 － D的培养基对翠菊叶片
的平均诱导率最低，为 55． 9%，而含有 IBA 的培养
基对翠菊叶片愈伤组织的诱导明显好于含有
2，4 － D的培养基，但是含有 NAA的培养基对翠菊叶
片愈伤组织的诱导效果最好。
表 2 不同类型不同浓度的生长素对愈伤组织的影响
生长素
(mg /L)
接种
个数
成活
个数
成活率
(%)
产生愈伤
个数
愈伤组织
诱导率(%)
NAA(0． 1) 40 32 80 26 81． 3
NAA(0． 5) 40 38 95 30 78． 9
NAA(1． 0) 40 35 87 22 62． 9
IBA(0． 1) 40 32 80 18 56． 3
IBA(0． 5) 40 34 85 24 70． 6
IBA(1． 0) 40 36 90 27 75． 0
2，4 － D(0． 1) 40 36 90 23 63． 9
2，4 － D(0． 5) 40 30 75 17 56． 7
2，4 － D(1． 0) 40 34 85 16 47． 1
注:结果收集于接种后 10天。
2． 2 不同浓度的生长素对翠菊叶片愈伤组织诱导
的影响
由表 2 可见，NAA对翠菊叶片愈伤组织的诱导
率最高，为 81． 3%。然而不同种类的生长素同一浓
度诱导率有明显的差异，说明不同种类的生长素诱
导翠菊叶片产生愈伤组织的最适浓度不同;然而对
于同一种类的生长素并不是浓度越高诱导率就越
高，从本实验诱导率来看，低等浓度(0． 1 mg /L)的
NAA最适合翠菊叶片愈伤组织的诱导。
综上所述 MS + NAA 0． 1 mg /L 对于翠菊叶片
愈伤组织的诱导效果最好，为最适培养基。
2． 3 外植体的差异对愈伤组织诱导率的影响
翠菊不同生长部位的叶片细胞结构及生理状态
不同，诱导产生愈伤组织的差异很大(见表 3)。用
最优的组合培养基诱导翠菊叶片愈伤组织的产生，1
周后，在叶片四周的切割伤口处，出现了明显的翠绿
色的小的愈伤组织团，但叶片产生愈伤的数量各异。
随后，愈伤组织团的体积变大，更加紧实，叶片边缘
出现褶皱，其余部分无明显变化。培养 1 周左右愈
伤更加清晰可见。但是对于生长比较活跃的外植体
来说，愈伤的变化更加明显，愈伤的生长速度比别的
部位的外植体要快的多，并且长的比较结实，从诱导
率方面来说比别的部位外植体的诱导率要高(见表
3)。由此说明，外植体差异会对愈伤组织诱导产生
重要的影响，叶片越靠近生理的顶部越年轻就越容
易诱导出愈伤组织。因此，组织培养要选择营养充
分生理状况比较活跃的外植体。
3 讨论
实验当中，用不同种类的生长素诱导翠菊叶片
产生愈伤组织，由于不同种类的外植体产生愈伤时
对不同生长素的需要量不同，所以对不同生长素含
量不同，其诱导效应不同。所以，对愈伤诱导率也要
考虑到不同外植体对生长素的敏感度有差异，不能一
概而论，应多设计预实验，分析找出最佳处理条件。
表 3 不同生长部位的叶片对产生愈伤组织的影响
叶片生
长部位
培养基
编号
成活个
数(个)
产生愈伤
个数(个)
愈伤组织
诱导率(%)
植株顶部 1 36 34 94． 4
2 35 32 91． 4
3 32 29 90． 6
植株中部 1 36 30 83． 3
2 34 29 85． 3
3 34 28 82． 4
植株底部 1 34 25 73． 5
2 33 25 75． 8
3 31 22 71． 0
在培养基中加入不同生长素主要是为了促进愈
伤组织的形成;加入不同浓度生长素的目的，主要是
为了发现诱导率差异，找出最适的生长素浓度。本
实验培养基中所用的激素是:NAA 、IBA、2，4 － D，观
察到 MS + NAA 0． 1 mg /L 诱导翠菊叶片产生了较
多的愈伤组织。实验结果表明，各种生长素对不同
的外植体都有各自最适合的浓度。
翠菊离体组织再生方式与其他花卉有一定差
异。有些花卉植株任何部位均有不同程度的分化及
再生能力［4］。而翠菊植株各部分叶片的愈伤组织诱
导率有所不同，茎顶端生长点的分生组织再生能力
明显高于其它部位。
MS培养基是植物组织培养中最常用的培养基，
它的维生素含量较 B5 培养基低。在 MS 大量元素
和铁盐的基础上增加微量元素、维生素、水解酪蛋白
含量对诱导叶柄愈伤组织的产生效果更好。有关高
浓度微量元素对月季［5］、三叶草［6］组织培养诱导愈
伤组织的促进作用已见报道，与本实验结果相似。
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(责任编辑 张云霞)
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