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响应面法优化山杏核壳总黄酮提取工艺及其抗氧化性的研究



全 文 :工 艺 技 术
2015年第6期
Vol . 36 , No . 06 , 2015
响应面法优化山杏核壳总黄酮
提取工艺及其抗氧化性的研究
杨 喆,万 山,张乔会,董施彬,宁亚萍,王建中*
(北京林业大学,北京林业大学林业食品加工与安全北京市重点实验室,北京 100083)
摘 要:以山杏核壳为原料,采用闪式提取技术对山杏核壳中的总黄酮进行提取,在单因素实验的基础上,采用响应
面分析法对闪提工艺进行优化,并通过体外抗氧化实验,测定其抗氧化能力。最终得到较优提取工艺参数为:乙醇溶
液体积分数62%,闪提时间4min,液料比13∶1,温度53℃。此条件下山杏核壳总黄酮得率为12.93mg/g。抗氧化实验表明,
山杏核壳总黄酮有很好的还原性,对羟基自由基、DPPH·和超氧阴离子都有较好的清除能力,具有良好的抗氧化性。
关键词:山杏核壳,总黄酮,响应面法,抗氧化性
Study on optimization of extraction of total flavonoids from shell of
wild apricot by response surface methodology and its antioxidant activity
YANG Zhe,WAN Shan,ZHANG Qiao-hui,DONG Shi-bin,NING Ya-ping,WANG Jian-zhong*
(Beijing Key Laboratory of Forest Food Processing and Safety,Beijing Forestry University,Beijing 100083,China)
Abstract:The shell of wild apricot were used as the raw material to extract total flavonoids by flash-extraction,
based on single factor experiments,extraction condition was optimized by response surface methodology. The
results showed that the optimum conditions of extraction of the total flavonoids from shell of wild apricot were
as follows :62% ethanol concentration ,4min extraction time ,13 ∶1 liquid/material ratio and 53℃ extraction
temperature. Under this condition,the maximal content of total flavonoids was up to 12.93mg/g. Results of
antioxidation showed that the total flavonoids from shell of wild apricot had a good ability to scavenge hydroxyl
radicals,DPPH,superoxide anion,it had good antioxidant activity.
Key words:shell of wild apricot;total flavonoids;response surface methodology;antioxidant activity
中图分类号:TS201.1 文献标识码:B 文 章 编 号:1002-0306(2015)06-0279-06
doi:10.13386/j.issn1002-0306.2015.06.053
收稿日期:2014-07-15
作者简介:杨喆(1990-),男,硕士研究生,研究方向:天然产物提取。
* 通讯作者:王建中(1951-),男,硕士研究生,教授,研究方向:林产品加工利用。
基金项目:林业公益性行业科研专项(201004081)。
黄酮类化合物广泛存在于自然界,其功能性和
保健作用早已被人们熟知。大量研究表明,黄酮类物
质种类繁多,具有非常好的抗氧化、降血压、降血糖、
抗癌及防癌等功效[1]。近年来从植物中提取黄酮类物
质已得到广泛的重视和深入的研究。山杏(Prunus
armeniaca.ansu)属蔷薇目、蔷薇科、杏属植物,主要分
布于亚洲。山杏在我国主要分布于黑龙江、辽宁、内
蒙古、河北、山西等地,是我国北方干旱山地丘陵区
特有的经济林树种[2],分布广泛,资源蕴藏量大。山杏
仁被广泛应用于面包、糖果、饮料等食品加工业,其
核壳在山杏加工利用的过程中作为废料被大量丢
弃,造成了极大的资源浪费。山杏核壳约占杏核质量
的60%,目前对于山杏核壳的利用研究仅有极少数
关于活性炭制备[3]及黑色素提取[4]方面的报道,还未
见对其黄酮类物质提取及抗氧化性的研究。闪式提
取技术是一种用于植物软、硬组织破碎的新型提取
技术。它依靠高速机械剪切力和超动分子渗滤技术,
在室温及溶剂存在下数秒内将物料破碎至细微颗
粒,并使有效成分迅速达到组织内外平衡,通过过滤
达到提取目的。闪式提取能最大限度保留地植物有
效成分,具有不受热破坏,溶剂用量小,提取时间段,
效率高等特点。本研究以山杏核壳为原料,利用闪式
提取技术对其中黄酮类物质进行提取[5],通过响应面
分析法优化提取条件,并对其抗氧化性进行研究,为
山杏核壳的开发利用提供研究依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
山杏核壳 购自北京延庆;芦丁标准品 国药
集团化学试剂有限公司;DPPH·(二苯基苦味酰基苯
肼,1,1-dipheny,1-2-picrylhydrazyl)(AR) 阿法埃
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Science and Technology of Food Industry 工 艺 技 术
2015年第6期
莎(天津)化学有限公司;无水乙醇、盐酸、亚硝酸钠、
氢氧化钠、硝酸铝、邻苯三酚、抗坏血酸、三氯乙酸、
水杨酸、硫酸亚铁、铁氰化钾、三氯化铁、磷酸氢二
钠、磷酸二氢钠、Tris等 均为分析纯。
ZK200型手提式多功能粉碎机 上海广沙工贸
有限公司;FA2004型电子天平 上海上平仪器有限
公司;DZF型真空干燥箱 上海龙跃仪器设备有限
公司;JHBE-50S型闪式提取器 北京金鼐科技发展
有限公司;R-210型旋转蒸发仪 上海申顺生物科技
有限公司;SHZ-III型循环水式多用真空泵 上海知信
实验仪器技术有限公司;TD5A型台式低速离心机 湖
南赫西仪器装备有限公司;T6型新世纪型紫外分光
光度计 北京普析通用仪器有限责任公司。
1.2 实验方法
1.2.1 标准曲线的制作[6] 精密称取120℃真空干燥
至恒重的芦丁标准品10mg,用70%乙醇溶液溶解,定
容至50mL,摇匀,即得浓度为0.2mg/mL的芦丁标准品
溶液。精密吸取芦丁标准品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0、6.0mL分别置于25mL容量瓶中,加入70%乙醇溶
液补充至6.0mL,然后加入5%亚硝酸钠溶液1mL,摇
匀,静置6min,再分别加入10%硝酸铝溶液1mL,摇
匀,静置6min,最后加入4%氢氧化钠溶液10mL,用
70%乙醇定容至刻度,摇匀,静置15min。以第一个样
品为空白样,在509nm波长处测定其余样品吸光度
A,以浓度C为横坐标,以吸光度值A为纵坐标,绘制
标准曲线。
1.2.2 山杏核壳总黄酮得率测定 将山杏核壳用粉
碎机粉碎,过60目筛,制成山杏核壳粉。准确称取
10.0g本品粉末,加入一定量乙醇溶液,在一定条件下
进行闪式提取,然后进行减压抽滤,得到黄色透明滤
液,测定滤液体积。取2mL上述滤液于25mL容量瓶
中,以制备标准曲线的方法,即亚硝酸钠-硝酸铝-氢
氧化钠显色法显色,在509nm处测定其吸光度,并利
用回归方程C=12.393A-0.0313(R2=0.9992)得到山杏
核壳样品中总黄酮得率,计算公式如下:
山杏核壳总黄酮得率(mg/g)=C×V×n/m
式中,C为提取液中总黄酮浓度(mg/mL);n为
提取液的稀释倍数;V为提取液体积(mL);m为原料
质量(g)。
1.2.3 单因素实验设计 以溶剂的体积分数、液料比
例、提取温度、提取时间四个因素为研究对象,以山
杏核壳中总黄酮的得率为指标,进行单因素实验。
1.2.3.1 乙醇的体积分数对得率的影响 为探究实
验中所用溶剂的体积分数在闪式提取中对得率的影
响,分别准确称取山杏核壳粉5份,每份10.0g,分别加
入体积分数为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶
液,在温度50℃条件下,以12∶1的液料比,闪提2min。
比较结果确定最佳乙醇体积分数。
1.2.3.2 提取时间对得率的影响 为探究实验中提
取时间在闪式提取中对得率的影响,分别准确称取
山杏核壳粉5份,每份10.0g,以液料比12∶1加入体积
分数为60%的乙醇溶液,在50℃的温度条件下,利用
闪式提取仪分别闪提1、2、3、4、5min。比较结果确定
最佳提取时间。
1.2.3.3 液料比对得率的影响 为探究实验中液料
比在闪式提取中对得率的影响,分别准确称取山杏
核壳粉5份,每份10.0g,分别以液料比8∶1、10∶1、12∶1、
14∶1、16∶1加入体积分数为60%的乙醇溶液,在温度50℃
条件下,闪提4min。比较结果确定最佳料液比。
1.2.3.4 提取温度对得率的影响 为探究实验中提
取温度在闪式提取中对得率的影响,分别准确称取
山杏核壳粉5份,每份10.0g,以液料比12 ∶1加入体
积分数为60%的乙醇溶液,分别在30、40、50、60、70℃
的温度条件下,闪提4min。比较结果确定最佳提取
温度。
1.2.4 响应面实验设计 为分析各影响因素间的交
互作用对山杏核壳总黄酮得率的影响,在单因素实
验的基础上,根据Box-Benhnken中心组合实验设计
原理,运用Design Expert 7.0软件设计响应面实验,分
别选取以液料比、闪提时间、提取温度、乙醇体积分
数为实验因素,以山杏核壳总黄酮得率为响应值,确
定最佳实验条件[7-9]。实验因素及水平见表1。
1.2.5 山杏核壳总黄酮抗氧化性实验
1.2.5.1 总还原能力的测定[10] 将样品配制成一定
浓度梯度的待测溶液,分别取1mL不同浓度的样品
溶液于10mL离心管中,加入pH6.6的0.2mol/L的磷酸
盐缓冲液2mL和1%铁氰化钾溶液2mL,摇匀,50℃水
浴20min,取出后迅速冷却,加入10%三氯乙酸溶液
2mL,摇匀。取上述溶液2mL于10mL离心管中,加入
2mL去离子水和0.1%三氯化铁溶液0.4mL,摇匀,测
定其在700nm处的吸光度,以去离子水为空白,以A700nm
表示样品还原能力,以抗坏血酸为对照。
1.2.5.2 对DPPH·清除率的测定 [11-12] 将样品配制
配制成一定浓度梯度的待测溶液,配制浓度为2×
10-4mol/L的DPPH溶液,备用。分别取不同浓度的样
品溶液4mL,加入浓度为2×10-4mol/L的DPPH溶液
4mL,摇匀,室温下避光反应30min,以无水乙醇作对
照,于517nm波长处测定吸光度A。对照组以无水乙
醇代替DPPH溶液,与样品混匀,于517nm波长处测定
吸光度A1,空白组以上述DPPH溶液与无水乙醇混合
后测定于517nm波长处的吸光度A0,以抗坏血酸为对
照。按下式计算其清除率:
清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100
式中,A为样品组吸光度值;A1为对照组吸光度
值;A0为空白组吸光度值。
1.2.5.3 对超氧阴离子自由基(O2-·)清除率的测定[13]
水平
因素
A 液料比
(mL/g)
B 闪提时间
(min)
C 提取温度
(℃)
D 乙醇体积
分数(%)
-1 10∶1 3 40 50
0 12∶1 4 50 60
1 14∶1 5 60 70
表1 响应面实验因素与水平
Table 1 Factors and levels of response surface methodology
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工 艺 技 术
2015年第6期
Vol . 36 , No . 06 , 2015
采用邻苯三酚自氧化法,将样品配制成一定浓度梯
度的待测溶液,备用。取50mmol/L的Tris-HCl缓冲液
(pH=8.2)2.25mL,加入2mL不同浓度的待测样品,然
后加入5mmol/L的邻苯三酚溶液1mL,混匀,室温下反
应20min,最后加入10mol/L浓盐酸1滴,终止反应,以
蒸馏水调零,在420nm处测定吸光度A。对照组以蒸
馏水代替邻苯三酚溶液,于420nm处测定吸光度A1,
空白组以蒸馏水代替样品溶液,于420nm处测定吸光
度A0,以抗坏血酸为对照。按下式计算其清除率:
清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100
式中,A为样品组吸光度值;A1为对照组吸光度
值;A0为空白照组吸光度值。
1.2.5.4 对羟基自由基(·OH)清除率的测定[14-15] 将
样品配制成一定浓度梯度的待测溶液,备用。向
10mL离心管中分别加入浓度为9mmol/L的FeSO4溶液
1mL,浓度为9mmol/L的水杨酸-乙醇溶液2mL,不同
浓度的样品溶液2mL,混匀,加入0.01%的H2O2溶液
1mL启动反应,于室温下反应1h,以蒸馏水调零,于
510nm处测定吸光度A。对照组以蒸馏水代替H2O2溶
液,于510nm处测定吸光度A1,空白组以蒸馏水代替
样品溶液,于510nm处测定吸光度A0,以抗坏血酸为
对照。按下式计算其清除率:
清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100
式中,A为样品组吸光度值;A1为对照组吸光度
值;A0为空白组吸光度值。
1.3 数据处理
采用Microsoft Excle(Office 2003)软件整理数据,
Design Expert 7.0软件和SPSS软件进行数据分析。
2 结果与分析
2.1 标准曲线制作
得到标准曲线,如图1所示,得到回归方程:C=
12.393A-0.0313(R2=0.9992)。
2.2 单因素实验结果
2.2.1 乙醇体积分数的选择 乙醇体积分数对山杏
核壳总黄酮得率的影响如图2所示。实验结果表明,
随着乙醇体积分数的增大,山杏核壳总黄酮得率不
断上升,当乙醇体积分数达到60%时,得率最高,之
后随着乙醇体积分数的升高,得率不断下降,这可能
是由于乙醇浓度不同,极性也不同,60%乙醇的极性
与山杏核壳黄酮类化合物极性相似,当乙醇浓度超
过60%时,一些脂溶性物质的溶出量增加,各类杂质
增多,从而影响了黄酮类物质的浸出[16],进而影响得
率。运用SPSS分析,通过LSD分析得到,乙醇浓度为
60%时与乙醇浓度为40%、50%、80%时比较差异极
显著(p<0.01),与乙醇浓度为70%时比较差异显著
(p<0.05)。因此,选择60%的乙醇溶液为最佳溶剂体
积分数。
2.2.2 闪提时间的选择 不同闪提时间对山杏核壳
总黄酮得率的影响如图3所示。提取时间低于4min
时,总黄酮得率随提取时间的延长而增加,4min时得
率达到最高,超过4min后略有降低,可能是因为提取
时间过长,闪式提取器刀头高速旋转产生热量,破坏
了黄酮类物质,从而使得率下降。运用SPSS分析,通
过LSD分析得到,闪提时间为4min时与其他闪提时间
比较均为差异极显著(p<0.01)。因此,选择最佳提取
时间为4min。
2.2.3 液料比的选择 不同液料比对山杏核壳总黄
酮得率的影响如图4所示。随着液料比的增大,山杏
核壳总黄酮的得率不断上升,当液料比达到12∶1时
得率达到最大,继续增大液料比对得率影响不大。运
用SPSS分析,通过LSD分析得到,液料比为12∶1时与
液料比为8∶1和10∶1时比较均为差异极显著(p<0.01),
与液料比为14 ∶1和16 ∶1时比较p值分别为0.579和
0.149,均为差异不显著(p>0.05)。因此,实际操作中
的最佳选择为12∶1的液料比。
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
芦丁标准液浓度(mg/mL)




图1 芦丁标准曲线
Fig.1 Standard curves of rutin
14
12
10
8
6
4
2
0
30 40 50 60 70 80 90
乙醇体积分数(%)






m
g/
g)
图2 乙醇体积分数对总黄酮得率的影响
Fig.2 Effect of ethanol concentration on extraction rate of
total flavonoids
14
12
10
8
6
4
2
0
0 1 2 3 4 5 6
闪提时间(min)






m
g/
g)
图3 提取时间对总黄酮得率的影响
Fig.3 Effect of extraction time on extraction rate of
total flavonoids
281
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14
12
10
8
6
4
2
0
8∶1 10∶1 12∶1 14∶1 16∶1
液料比(mL/g)






m
g/
g)
图4 液料比对总黄酮得率的影响
Fig.4 Effect of liquid/material ratio on extraction rate of
total flavonoids
实验号 A B C D Y:总黄酮得率(mg/g)
1 1 0 -1 0 8.74±0.02
2 0 0 0 0 12.93±0.08
3 0 1 0 1 12.05±0.07
4 0 -1 1 0 12.19±0.11
5 1 1 0 0 11.74±0.05
6 1 0 0 -1 11.26±0.03
7 0 1 0 -1 11.45±0.08
8 0 0 0 0 12.81±0.13
9 0 0 -1 -1 8.41±0.04
10 -1 0 0 -1 10.69±0.06
11 0 0 -1 1 8.85±0.09
12 0 1 1 0 12.01±0.10
13 -1 1 0 0 11.07±0.04
14 0 0 1 -1 11.58±0.05
15 -1 0 1 0 11.74±0.09
16 0 -1 -1 0 8.71±0.02
17 0 -1 0 -1 11.25±0.14
18 0 0 0 0 12.68±0.13
19 0 -1 0 1 12.13±0.06
20 -1 -1 0 0 10.28±0.11
21 0 1 -1 0 8.44±0.08
22 1 -1 0 0 11.38±0.07
23 0 0 1 1 12.66±0.10
24 1 0 1 0 12.42±0.12
25 1 0 0 1 11.42±0.03
26 -1 0 0 1 11.05±0.09
27 -1 0 -1 0 8.97±0.06
表2 响应面设计方案及结果
Table 2 Program and experimental results of
response surface methodology
2.2.4 提取温度的选择 不同提取温度对山杏核壳
总黄酮得率的影响如图5所示。随着温度的上升,总
黄酮得率不断提高,当温度达到50℃时得率达到最
高,继续升高温度得率略有下降,可能是由于过高的
温度会对黄酮类物质的结构造成破坏,造成得率下
降。运用SPSS分析,通过LSD分析得到,提取温度为
50℃时与提取温度为30、40、70℃比较均为差异极显
著(p<0.01),与提取温度为60℃时比较p值为0.127,
差异不显著(p>0.05)。因此,选择最佳的温度为50℃。
2.3 响应面法实验结果
2.3.1 总黄酮闪提工艺回归模型的建立及方差分析
根据单因素实验结果,以乙醇体积分数(A)、闪提
时间(B)、液料比(C)、温度(D)为自变量,以山杏核
壳总黄酮得率(Y)为响应值设计响应面实验,结果如
表2所示。
采用Design Expert 7.0软件,对表2中的实验数
据进行回归分析,得出山杏核壳总黄酮得率的回归
方程:
Y=12.81+0.26A+0.068B+1.71C+0.29D-0.11AB+
0.23AC-0.050AD+0.023BC-0.070BD+0.16CD-0.91A2-
0.67B2-1.67C2-0.66D2。
对上述方程进行方差分析,结果如表3所示。
结果显示,模型显著性检验p<0.0001,为极显
著,失拟项p值为0.1006>0.05,无失拟因素存在,因此
可证明该模型与实验拟合度良好。该回归方程相关
系数R2=0.9726,校正决定系数R2Adj=0.9406,说明该模
型能够解释97.26%的变化,因变量与所选自变量之
间的线性关系显著,进一步说明该模型具有较好的
拟合度,可用该回归方程代替实验真实点对实验结
果进行预测和分析。
模型的二次项A2、C2和一次项C达到极显著水
平,二次项B2、D2达到高度显著水平,一次项A、D达到
显著水平,说明响应值变化复杂,各实验因素对响应
值的影响不是简单的线性关系。通过回归分析可知,
各因素对总黄酮得率的影响大小顺序为:液料比(C)
>温度(D)>乙醇体积分数(A)>闪提时间(B)。
2.3.2 响应面分析 采用Design Expert 7.0软件,将
四种因素两两进行分析比较,根据回归方程,各因素
间交互作用的响应面图见图6所示。响应曲面反映每
两个影响因素之间的交互作用,考察响应面可进一
步确定液料比对总黄酮得率的影响最大,温度次之,
乙醇的体积分数和闪提时间对其影响相对较小。
2.3.3 最佳闪提工艺条件的确定 为进一步确定最
佳提取条件,利用Design Expert 7.0软件对提取的工
艺条件进行优化,得到山杏核壳总黄酮闪式提取较
优工艺参数为:乙醇体积分数为62.02%,提取温度为
52.81℃,闪提时间为4.03min,液料比为13.08∶1,此条
件下,山杏核壳总黄酮得率的预测值为13.34mg/g。在
14
12
10
8
6
4
2
0
20 30 40 50 60 70 80
温度(℃)






m
g/
g)
图5 温度对总黄酮得率的影响
Fig.5 Effect of temperature on extraction rate of total flavonoids
282
工 艺 技 术
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实际中为方便操作,将提取工艺参数修正为:乙醇体
积分数为62%,提取温度为53℃,闪提时间为4min,液
料比为13∶1,在此条件下进行三次平行实验,实际测
得山杏核壳总黄酮的平均得率为12.93mg/g,十分接
近软件分析得到的预测值,证明实验模型选择可靠,
与实际情况拟合度好,可用于山杏核壳总黄酮闪式
提取工艺进行回归分析和参数优化。
2.4 山杏核壳总黄酮抗氧化性实验
2.4.1 总还原能力实验结果 如图7所示,在低浓度
时,样品与VC还原能力相近,随着浓度上升,VC的还
原能力先大幅度增强,当浓度达到20μg/mL后逐渐变
缓,而样品的还原能力随浓度的增大不断增强,且增
幅逐渐增大,有明显接近VC还原能力的趋势,可见山
杏核壳黄酮具有非常强的还原力。
2.4.2 清除DPPH·实验结果 如图8所示,VC清除
DPPH·能力随浓度上升而增大,当浓度为15μg/mL
时,清除率已达到94.63%,继续增大浓度后清除率无
显著变化,山杏核壳黄酮样品对DPPH·的清除能力
随浓度的增大呈明显线性增长,可见山杏核壳黄酮
对DPPH·有极强的清除能力。
2.4.3 清除超氧阴离子自由基(O2-·)实验结果 如
图9所示,VC在0.2~1.0mg/mL的浓度范围内,对超氧阴
离子(O2-·)始终保持很高的清除能力,清除率几乎达
到100%,而样品在低浓度范围时对于超氧阴离子
(O2-·)的清除能力增长缓慢,当浓度达到0.4mg/mL
时,随着样品浓度的增大,其清除能力显著增强。
2.4.4 清除羟基自由基(·OH)实验结果 如图10所
示,VC在0.3~0.7mg/mL的浓度范围内,对羟基自由基
方差来源 平方和 自由度 均方 F值 p值 显著性
模型 52.85 14 3.77 30.39 <0.0001 **
A 0.83 1 0.83 6.70 0.0237 *
B 0.056 1 0.056 0.45 0.5145
C 34.95 1 34.95 281.41 <0.0001 **
D 1.03 1 1.03 8.31 0.0137 *
AB 0.046 1 0.046 0.37 0.5532
AC 0.21 1 0.21 1.67 0.2210
AD 0.010 1 0.010 0.081 0.7814
BC 2.025E-003 1
2.025E-
003 0.016 0.9005
BD 0.020 1 0.020 0.16 0.6982
CD 0.10 1 0.10 0.82 0.3818
A2 4.44 1 4.44 35.72 <0.0001 **
B2 2.39 1 2.39 19.25 0.0009 **
C2 14.82 1 14.82 119.33 <0.0001 **
D2 2.30 1 2.30 18.54 0.0010 **
残差 1.49 12 0.12
失拟差 1.46 10 0.15 9.33 0.1006
纯误差 0.031 2 0.016
总和 54.34 26
表3 回归方程方差分析表
Table 3 Variance analysis of mathematical regression model
注:*代表0.05显著水平;**代表0.01显著水平。
图6 实验因素对总黄酮得率交互影响的响应面图
Fig.6 Responsive surface graph of interactive effects of factors
on extraction rate of total flavonoids
13
3.00B:闪提时间(min)



m
g/
g) 12.3
11.6
10.9
10.2
3.50
4.50
5.00
4.00
50.00
55.00
65.00
60.00
70.00
A:乙醇体积分数(%)
a
C:液料比(mL/g)



m
g/
g)
13.3
50.00
55.00
65.00
60.00
70.00
A:乙醇体积分数(%)
b
12.075
10.85
9.625
8.4
40.00D:温度(℃)



m
g/
g)
50.00
55.00
65.00
60.00
70.00
A:乙醇体积分数(%)
c13
12.4
11.8
11.2
10.6
45.00
55.00
50.00
60.00
10.00C:液料比(mL/g)



m
g/
g)
13.3
B:闪提时间(min)
d
12.075
10.85
9.625
8.4
3.00
3.50
4.50
5.00
4.00
11.00
12.00
13.00
14.00
10.00
11.00
12.00
13.00
14.00
40.00D:温度(℃)



m
g/
g)
e13
12.4
11.8
11.2
10.6
45.00
55.00
50.00
60.00
B:闪提时间(min)3.00
3.50
4.50
5.00
4.00



m
g/
g)
13.3
C:液料比(mL/g)
f
12.075
10.85
9.625
8.4
10.00
11.00
12.00
13.00
14.00
40.00D:温度(℃)
45.00
55.00
50.00
60.00
283
Science and Technology of Food Industry 工 艺 技 术
2015年第6期
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 5 10 15 20 25 30 35
浓度(μg/mL)



图7 样品与VC还原能力比较
Fig.7 Comparison of reducing power on sample with vitamin C
样品
VC
100
80
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30 35
浓度(μg/mL)




%)
图8 样品与VC清除DPPH·能力比较
Fig.8 Comparison of DPPH·radical scavenging activity on
sample with vitamin C
样品
VC
100
80
60
40
20
0
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
浓度(μg/mL)




%)
图9 样品与VC清除超氧阴离子自由基(O2-·)能力比较
Fig.9 Comparison of superoxide radical scavenging activity on
sample with vitamin C
样品
VC
100
90
80
70
60
50
40
0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
浓度(μg/mL)




%)
图10 样品与VC清除羟基自由基(·OH)能力比较
Fig.10 Comparison of hydroxyl radical scavenging activity on
sample with vitamin C
样品
VC
(·OH)始终保持很高的清除能力,清除率几乎达到
100%,山杏核壳黄酮样品在低浓度时对羟基自由基
(·OH)的清除能力与VC相差较多,但随着浓度的上
升,其清除能力显著增强,在浓度为0.7mg/mL时清
除率达到93.21%,可见山杏核壳黄酮对羟基自由基
(·OH)有较强的清除能力。
3 结论
3.1 本实验采用闪式提取法,并通过Box-Benhnken
的中心组合实验设计原理建立了山杏核壳总黄酮闪
式提取工艺的优化回归方程模型,经方差分析该模
型拟合度良好。得到最佳提取工艺参数为:乙醇体
积分数为62%,提取温度为53℃,闪提时间为4min,
液料比为13 ∶1,此条件下山杏核壳总黄酮得率为
12.93mg/g。
3.2 抗氧化性实验显示,山杏核壳总黄酮具有很好
的还原能力,对自由基具有较好的清除能力,对DPPH·
和羟基自由基(·OH)具有很强的清除能力,对于超
氧阴离子自由基(O2-·)也具有一定的清除能力。
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284