全 文 :前 (P <0.05 , P <0.01), 见表
1。
2.2 肝组织细胞学变化:实验
末 , 对照组:肝缺血 —再灌注后
部分区域肝细胞肿胀 , 胞浆疏松
化 , 空泡变性及局灶性坏死 , 肝
小叶中心部分肝细胞脂肪变性。
实验组:使用 ZYC 灌胃后复制
HIRI 模型 , 肝细胞肿胀程度明
显轻于对照组 , 肝中央小静脉 、
窦周间隙及小叶间静脉明显扩
张 、 充血 , 肝窦内皮细胞 、枯否
氏细胞明显增生 , 可见较多双核
再生肝细胞。
3 讨论
近年研究证实 , NO 水平下
降和O2 水平升高而引发的脂质
过氧化反映是 HIRI 的主要发病
机制〔4〕 。刺激细胞的 NO可来自
细胞自身或邻近细胞 , 理论上可
达到细胞 、组织内的任何部位 ,
在生物体内 NO 可中和 O2 而拮
抗过氧化作用〔5〕 。对照组 , 缺血
—再灌注 45min , 血清 NO 含量
较灌胃前 、 灌胃 7天下降 , 肝细
胞形态学改变显著异常 , 这与再
灌注损伤及 NO 含量减少有关 。
ZYC对肝脏疾病的疗效早在公元
8世纪 《四部医典》 有记载 , 其
中齐墩果酸 、芒果甙 、藏茵陈酮
为主要活性成分 , 故有保肝再生
之功效 , 本实验结果显示 , ZYC
灌胃 7 天 , 缺血 —再灌 45min ,
血清 NO 含量明显高于灌胃前
(P <0.05 , P <0.05), 肝细胞
形态学异常变化减轻 , 血管扩张
充血 。表明 ZYC 对 HIRI有明显
保护作用 。其作用可能为 ZYC
诱导肝细胞 、血管内皮细胞释放
NO , 使血管扩张 , 改善微循环 ,
保证了再灌后肝脏的血供和营养
物质的供给 , 减轻血小板的聚
集 , 线粒体损伤 , 调节枯否氏细
胞的代谢 , 从而对肝脏的血液动
力学及形态结构 、 功能 、代谢起
到调节和保护作用 。
参考文献
1 郭继明 , 淮虎银.藏药研究的新进
展.中国民族医药杂志 .1997;3 (1):
30—32
2 Hasselgren Po , Bilber B , Fomander
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the post ischemic liver following intusion of
dopamine [ J] , JSurg Res 1983;34 (1):44
-52
3 沈定树.一氧化氮的研究进展.国
外医学临床生物学与检验学分册 , 1996:
17:20-22
4 王万铁 , 徐正祁 , 林丽娜 , 等.脂
质过氧化反应在家兔肝缺血再灌注损伤中
的作用 [ J] .中国应用生理学杂志 , 1998;
14 (3):214—216
5 许建明 , 徐树云 , 梅俏 , 等.褪黑
色素抑制—氧化氮生成在小鼠免疫性肝损
伤中的意义.中国药理学通报 , 1998;14
(6):533—535
(收稿日期:2001年 12月 13日)
薄层扫描测定蒙药 4味土木香散中苦
参碱及氢化苦参碱的含量
王丽君1 白春洁1 温雅琴1 吴志英2
(1 通辽市药检所 , 内蒙古 通辽 028000;2 通辽市药监局 , 内蒙古 通辽 028000)
摘 要 用薄层扫描法测定蒙成药 4 味土木香散中苦参 (苦参碱及氢化苦参碱)的含量。本法有简便 、 快
速 、 结果准确 、 回收率高等优点。
关键词 蒙成药 苦参 含量
4味土木香散是由土木香 、
苦参 、珍珠杆 、 山奈等经粉碎而
制成的蒙药制剂〔1〕。具有清瘟解
表之功效 。其含量测定方法尚未
见报道 , 本文以苦参中苦参碱及
氢化苦参碱为主要指标 , 对其进
行薄层扫描测定〔1〕 , 本法简便 、
快速 、结果准确 。
1 仪器与试药
日本岛津 CS-930型双波长
薄层扫描仪;硅胶G (青岛海洋
化工厂);苦参碱及氢化苦参碱
(中国药品生物制品检定所提
供);4 味土木香散 (内蒙古蒙
医研究所提供), 批号分别为
20000608 , 20001121 , 20001207。
2 溶液制备
2.1 对照品溶液
精密称取苦参碱及氢化苦参
碱对照品 12.5mg , 36mg 分别置
25ml量瓶中 , 加无水乙醇溶解
并稀释至刻度摇匀 , 即得。苦参
碱及氢化苦参碱分别为 0.48mg·
ml-1及 1.44mg·ml-1 。
2.2 样品溶液
取本品 3 包混匀 , 称取约
4g , 精密称定 , 置具塞的三角烧
瓶中 , 精密加入氯仿 25ml , 浓
氨试液 1ml , 密塞 , 称重 , 超声
提取 20min , 取出放冷 , 用氯仿
110 中国民族民间医药杂志 2002年总第 55期
补足减失的重量 , 摇匀 , 过滤 ,
精密量取续滤液 20ml置蒸发皿
中 , 水浴蒸干 , 残渣加无水乙醇
入5ml量瓶中并稀释至刻度 , 摇
匀 , 即得 。
3 实验条件
3.1 色谱条件
取硅胶 G 加 0.15%CMC -
Na溶液研磨 , 湿法铺制 20cm ×
20cm的薄层板 , 105℃活化 1h;
展开剂苯-丙酮-醋酸乙酯-浓
氨 (15∶30∶45∶2), 展距为 17cm。
3.2 扫描条件
λs=480nm、 XR=650nm、 SX
=3 , 狭缝 1.2mm ×1.2mm , 反
射法锯齿形扫描 。
4 实验方法与结果
4.1 线性范围
精密量取上述苦参碱及氢化
苦参碱对照液 2 , 3 , 4 , 5 , 6μl
分别点于同一块薄层板上 , 展
开 , 凉干 , 按样品测定项下测其
各自的峰面积值 , 以对照品浓度
(C)与其相应的峰面积 (A)求
得苦参碱及氢化苦参碱的回归方
程分别为
A=2710.49×C-608.26
r=0.9994
A=2719.47×C-690.00
r=0.9995
线 性 范 围:0.48mg ~
3.36mg 、 1.44mg~ 12.96mg 。
4.2 稳定性考察
精密量取供试品 4μl 3份点
于薄层板上 , 依法测定峰面积
值 , 并每隔 1h测定1次 , 连续4
次 , 结果在 4h 内苦参碱及氢化
苦参碱的峰面积值无显著性变
化 , RSD 分别为 2.7% (苦参
碱)、 2.1%(氢化苦参碱)。
4.3 回收率及精密度试验
称取未加苦参的阴性对照
(由内蒙古蒙医研究所提供)约
4g , 5 份 , 置具塞的三角烧瓶
中 , 分别精密加入苦参碱及氢化
苦参碱对照品各 3ml , 按样品溶
液制备及含量测定项下测定 , 计
算回收率 , 结果见表 1。
4.4 样品测定
精密吸取样 品溶液 4μl、
8μl , 对照品溶液 2μl、 4μl 分别
交叉点于同一薄层板上 , 依法展
开 , 取出 , 晾干 , 喷碘化铋钾试
液 , 再喷 5%NaNO2 溶液至斑点
显色清晰 , 在薄层上覆盖同样大
小的玻璃板 , 周围用胶带固定 ,
放置 2h , 扫描外标 2 点法计算
含量 , 结果见图 1 、表 2。
表 1 回收率及精密度测定结果 (n=5)
序号 苦参碱测得量
mg
回收率
%
RSD
%
氢化苦参碱测得量
mg
回收率
%
RSD
%
1 1.436 97.7 4.342 100.5
2 1.452 100.8 4.238 98.1
3 1.390 96.5 2.4 4.203 97.3 2.1
4 1.460 101.4 4.186 96.9
5 1.388 96.4 4.385 101.5
▲苦参碱加入量 1.44mg 、 氢化苦碱加入量 4.32mg
表 2 苦参碱及氢化苦参碱含量测定结果 (n=3)
批号 苦参碱 (%) RSD (%) 氢化苦参碱 (%) RSD (%)
20000608 0.031 1.75 0.135 1.40
20001121 0.028 2.40 0.144 1.10
20001207 0.034 1.98 0.149 0.90
111中国民族民间医药杂志 2002年总第 55期
图 1 4味土木香散中苦参碱及氢化苦参碱
的薄层色谱
1.阴性对照;2.样品;3.苦参碱对照品;
4.氢化苦参碱对照品
5 讨论
本文对样品超声提取时间进
行 考 察 , 分 别 提 取 10min 、
20min 、 30min , 结果表明 20min
足以使苦参碱及氢化苦参碱提取
完全。通过对本品中苦参碱及氢
化苦参碱的含量测定 , 发现氢化
苦参碱的含量明显高于苦参碱 ,
通过对苦参原药材的含量考察也
证实了这一结论。0.15%CMC -
Na 研磨制板 , 即不影响显色 ,
同时又能使斑点十分清晰圆整 ,
便于定量 。实验表明 , 本法测定
蒙药四味土木香散中 , 苦参碱及
氢化苦参碱的含量 , 方法简便 ,
快速 , 准确重现性好 、 对复方制
剂苦参中的苦参碱及氢化苦参碱
的定量具有一定的参考价值 。
参考文献
1 中华人民共和国药典.2000:一
部:161
(收稿日期:2001年 12月 14日)
新疆和田菟丝子中多糖含量的测定
刘 海 孟 磊 张 惠 孙 莲
(新疆医科大学化学教研室 , 新疆 乌鲁木齐 830054)
摘 要 采用苯酚—硫酸法测定新疆和田产的菟丝子中的多糖含量。其回归方程为:A=51.65C—0.00448
线性范围 r=0.9995 菟丝子多糖的换算因子:f=1.25
关键词 菟丝子 苯酚—硫酸法 多糖含量
菟丝子是旋花科植物菟丝子
(Cuscuta chinensis Ham)的成熟
种子 , 具有补肝肾 、 益精 、 明
目 、 安胎等功效 。有关多糖成分
及含量的研究未见报道。采用苯
酚—硫酸法对其多糖的含量进行
了测定。
1 仪器与药品
721型分光光度计 (上海),
5%苯酚液 (取苯酚 100g 加铝片
0.1g 与碳酸氢钠 0.05g , 蒸馏 ,
收集 182℃馏分 , 称取 10g , 加
水 190g , 置棕色瓶中冷藏备
用)。 D—葡 萄 糖 、 D—果 糖
(AR)、 菟丝子购于和田 , 经本
院中医学院高级中药师孙维民教
授鉴定 , 其它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的制备:精密称
取105℃时干燥至恒重的葡萄糖
标准品 100mg , 置于 100ml 容量
瓶中 , 用水稀释至刻度。精密移
取此葡萄糖标准品溶液 10ml 于
100ml容量瓶中 , 用水稀释至刻
度 , 摇匀 , 分别精密吸取此溶液
( 0.1g/ml ) 0.4ml , 0.6ml ,
0.8ml , 1.0ml , 1.2ml , 1.4ml 分
别置于干燥的 25ml具塞试管中 ,
各加水至2.00ml , 再分别加苯酚
试剂 1.00ml , 摇匀 , 迅速加入
5.00ml浓 H2SO4 , 即刻摇匀 , 放
置 5min 后 , 于沸水浴中加热
15min , 冷至室温于 490nm 处测
定吸光度 。得回归方程:A =
51.65C —0.00448 r=0.9995。
2.2 多糖的提取:取干净的菟
丝子 , 干燥研磨后 , 加 80%乙
醇回流 5h。药渣干燥后 , 水煎
提取 3次 。提取液浓缩至原体积
的 1/3。加乙醇 , 其醇含量为
80%, 放置过滤 , 沉淀物以无水
乙醇 、 丙酮洗涤 2 次 , 挥干溶
媒 , 溶于水后 , 再加乙醇至醇含
量为 80%, 静置 , 过滤。沉淀
用无水乙醇 、 丙酮洗涤多次 , 得
灰白色粗多糖 (cuscutu chinensis
Lam.polysaccharide.简称CCLP)。
2.3 样品含量的测定:用分析
天平精密称取 5.5100g CCLP 4份
置烧瓶中 , 加 95%乙醇 100ml回
流提取 4h , 挥干乙醇 , 残渣先
用 200ml蒸馏水提取 2h , 残渣再
用 100ml蒸馏水提取 2次 , 每次
1h , 合并 3 次溶液转入 1000ml
容量瓶中 , 取 20ml 溶液置于
100ml容量瓶中 , 稀释至刻度备
用 , 精密吸取上述试样 1.0ml ,
按标准曲线项下操作 (见表 1)。
2.4 加标回收率
精密吸取供试样 0.5ml , 准
确加入葡萄糖标准品 0.05mg ,
按标准曲线项下操作 , 测得回收
率如表 2。
112 中国民族民间医药杂志 2002年总第 55期