全 文 ：东风菜皂甙生物活性的研究Ⅱ＊
黑龙江中医药大学　匡海学　肖洪彬　张腾　张鹏　蒋立范
摘要　对东风菜根部的总皂甙进行荷瘤小鼠炭粒廓清 、T 淋巴细胞及其亚群的免疫研究 , 结果证明 ,小鼠
按 300mg/ kg 口服给药 ,可增加炭粒廓清速率 、吞噬活性α值和 T 淋巴细胞总数及其亚群的百分率。抑瘤
实验证明 ,小鼠按 150 、300 、600mg/ kg口服给药 , 对 S180和 HAC 实体瘤有明显的抑制作用 , 对肝癌腹水型
荷瘤小鼠的生命延长率有明显的增加作用。故认为东风菜根总皂甙具有一定的增加机体免疫功能及抗肿
瘤的生物活性。
关键词　东风菜　总皂甙　生物活性　免疫作用　抗肿瘤
　　东风菜 Aster scaber thunb 是菊科多年生草本
植物。前文我们曾报道从其根部分离出总皂甙及
其单体皂甙 S-Ⅰ、S-Ⅱ具有明显提高细胞免疫及体
液免疫的作用[ 1] 。本文报道东风菜总皂甙对荷瘤
小鼠的免疫作用及抗肿瘤作用的研究结果。
1　实验材料
　　受试药物:东风菜根总皂甙由黑龙江中医药大
学药学院提供。
　　动物:昆明种小白鼠由黑龙江中医药大学实验
动物中心提供。
　　试剂与药品:①抗小鼠 Thy-1 、L3T 4 、Ly t2单
克隆抗体:北京医科大学免疫教研室提供。 ②胎牛
血清(Fcs):哈尔滨兽医研究所产品。 ③氟尿嘧啶
注射液:上海普海药厂 , 批号:920902。 ④注射用环
磷酰胺:上海第十二制药厂 , 指号:920520。
　　瘤株:小鼠肉瘤 S180和小鼠肝癌 HAC:均由哈
尔滨医科大学肿瘤研究所提供。
2　方法和结果
2.1　对 HAC 实体瘤炭粒廓清速率的影响[ 2]
　　取昆明种雄性小鼠 30 只 , 按常规方法接种
HAC 实体瘤 , 接种次日 , 随机分为三组 , 空白对照
组 、阳性药环磷酰胺组及东风菜根总皂甙组 , 连续
口服给药 8d , 次日按 0.05ml/ 10g 尾静脉注射 1:2
用生理盐水稀释的印度墨法 , 分别于注入墨汁后
5min 和 20min 从鼠眼眶静脉丛取血 0.025ml ,放入
含有 2ml 0.1%碳酸钠溶液试管中 , 在 650nm 处测
定光密度值 ,最后根据鼠体重 、肝重 、脾重求出吞噬
活性(α), 结果见表 1。
表 1　东风菜根总皂甙对荷瘤小鼠
炭粒廓清作用的影响
组别 动物数剂量(mg/ kg)α值(X±SD) P 值
空白对照 10 — 3.848±0.321
总 皂甙 10 300 5.031±0.326 <0.01
环磷酰胺 10 25 3.115±0.264 <0.01
表 1　不同工艺冲剂中葛根素的含量
样品 批号 葛根素的含量(g/ g) RSD% n
原工艺 960502 0.04 1.0 3
50%乙醇 960506 0.07 0.9 3
75%乙醇 960512 0.10 1.2 3
85%乙醇 960519 0.14 0.4 3
95%乙醇 960523 0.14 0.8 3
　　从上表可以看出 ,水煎煮法提出的葛根素含量
低 ,而 85%及 95%乙醇工艺制备的冲剂含量较高 ,
考虑成本 ,选用 85%乙醇回流提取较适宜。
3.4　回收率考察　精密称定已知含量的通脉冲剂
5份 , 精密加入葛根素对照品 , 按供试液制备方法制
备,依法测定,平均回收率为 97.81%, RSD为0.99%。
4　小结与讨论
　　采用 85%乙醇提取葛根新工艺制备的冲剂 ,
葛根素含量高 ,溶化性好。由于《部颁标准》中的制
备是水煎煮提取 , 没有加醇沉淀 , 容易导致溶化性
不合格。考虑到醇沉可能使有效成份失去 ,影响药
效 ,而不溶的白色小片是由粉葛引起 , 所以 ,改用乙
醇提取葛根 ,而保留丹参 、川芎的水煎煮法 ,既提高
药效 ,又保证了冲剂的质量。另外 , HPLC 法测定
通脉冲剂中葛根素的含量 ,方法简便 、专属性强 , 可
作为该制剂的质量标准。
　　＊黑龙江省自然科学基金 、黑龙江省教育委员会资助项目
　　　收稿日期:1998-02-20
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　　　　　中　医　药　学　报
ACTA CHINESE M EDICINE AND PHARMACOLOGY
　　　　　　　　　　　
1998年　第 3期
　　表 1表明 ,东风菜根总皂甙能增加荷瘤小鼠炭
粒廓清速率 ,使吞噬活性α值明显增加 , 而环磷酰
胺可使α值明显降低。
2.2　对荷瘤小鼠 T 淋巴细胞及其亚群的影响
　　取昆明种小鼠 20 只 , 雌雄各半 , 常规接种
HAC 实体瘤。次日随机分为空白对照组和东风菜
根总皂甙组 ,连续给药 8 天 , 每天 1 次 ,次日颈椎脱
臼处死动物 ,无菌取脾剪碎制成脾细胞悬液 , 并用
含 5%FCS 的 Hank s 液调细胞浓度为 2×106/ml
(染色法证明细胞活力在 95%以上)。 用Hank s液
稀释抗小鼠 Thy-l、L3T4 、Lyt2及豚鼠补体(1:5)。 在
40孔板上加 4孔 50μl 2×106/ml细胞悬液。试验
组分别加 20μl单克隆抗体 、对照组加 20μlHank s
液。 37℃30min 孵育取出各孔加入 20μl补体 37℃
60min孵育。实验结束后 , 每孔加入 1%伊红 15μl
和0.8%戊二醛 15 混匀后滴于载玻片上 , 计数
200 个细胞并计算赤染细胞的百分数 ,结果见表 2。
表 2　东风菜根总皂甙对荷瘤小鼠
T 细胞及其亚群的影响(X±SD)
组别 剂量(mg/kg) Thy-1 L3T4 Ly t2 L3 T4/ LyT2
空白对照 — 35.76±4.89 25.13±3.98 17.36±3.24 1.418±0.197
总 皂 甙 300 42.12±5.83 33.25±4.41 22.14±3.69 1.579±0.203
　P 值　 <0.01 <0.01 <0.05 >0.05
　　注:空白对照与总皂甙均为 10例。
　　表 2 表明 , 总皂甙组 T 细胞总数及其亚群百
分率 均明 显 高于 空白 对照 组 , 且 给药 组
L3T 4/ LyT 2比值在正常范围之中(正常为1 .5 ～
2.5之间)。
2.3　对荷瘤小鼠抑瘤作用的影响[ 3]
　　实验用荷瘤小鼠均按常规方法接种肿瘤细胞。
取传代 8天 ,生长良好的乳白色腹水 , 以 1:2 无菌
生理盐水稀释 , 肉瘤 S1 80和肝癌 HAC 实体瘤细胞
分别接种于腋下 ,每只鼠 0.2ml , 接种次日 , 随机分
为五组 ,均为口服给药 , 每天一次 , 连续 8 天 , 停药
次日 , 分别将两批动物(肉瘤 S180和 HAC 实体瘤)
处死。剥取皮下实体瘤瘤块 , 分别称重 , 计算出瘤
重及抑瘤率 ,结果见表 3 、表 4。
表 3　东风菜根总皂甙对小鼠
肉瘤 S180的抑瘤作用
组别 例数(只)
给药剂量
(mg/ kg)
平均瘤重
( X±SDg)
抑瘤率
(%) P 值
空白对照 14 — 2.11±0.213
总 皂甙 14 150 1.24±0.199 41.04 <0.01
总 皂甙 14 300 0.99±0.195 52.84 <0.01
总 皂甙 14 600 0.95±0.188 55.07 <0.01
环磷酰胺 14 25 0.63±0.169 70.33 <0.01
表 4　东风菜根总皂甙对小鼠
肝癌 HAC 的抑瘤作用
组别 例数(只)
给药剂量
(mg/ kg)
平均瘤重
( X±SDg)
抑瘤率
(%) P 值
空白对照 14 — 1.75±0.179
总 皂甙 14 150 1.13±0.215 35.77 <0.01
总 皂甙 14 300 0.83±0.182 52.48 <0.01
总 皂甙 14 600 0.63±0.176 64.00 <0.01
环磷酰胺 14 25 0.48±0.132 72.45 <0.01
　　表 3 、表 4 结果证明 , 总皂甙各剂量组同空白
对照组相比 ,对 S180和 HAC 实体瘤均有明显的抑
制作用 ,抑瘤率均大于 30%。
2.4　对肝癌腹水型荷瘤小鼠生命延长率的影响
　　取生长良好的肝癌 HAC 小鼠腹水 , 以 1:2 无
菌盐水稀释 ,每只小鼠腹腔接种 0.2ml , 接种次日 ,
随机分为 5 组。分组及给药剂量见表 5 , 每天口服
给药 , 连续 8 天 , 停药后 ,观察各组小鼠存活天数 ,
计算各组的平均生存时间 , 并求出生命延长率 , 结
果见表 5。
表 5　东风菜根总皂甙对肝癌 HAC 腹水型
小鼠生命延长率的影响
组别 例数(只)
给药剂量
(mg/kg)
平均存活天数
( X±SD 天)
延长率
(%) P值
空白对照 14 — 13.27±3.64
总 皂甙 14 150 20.68±4.26 55.84 <0.01
总 皂甙 14 300 23.24±4.98 75.13 <0.01
总 皂甙 14 600 25.32±3.78 90.81 <0.01
氟尿嘧啶 14 25 18.98±4.13 43.03 <0.01
　　表 5 结果证明 ,总皂甙三个剂量组生命延长率
均大于 50%, 与空白对照组相比均具有明显的差
异性(P<0.01)。
3　小结
　　上述研究证明 ,东风菜总皂甙可增加荷瘤小鼠
炭粒廓清速率 ,使吞噬活性α值明显增加 , 使荷瘤
小鼠 T 细胞总数及其亚群百分率明显增加;对 S180
和 HAC 实体瘤有明显的抑制作用;对肝癌腹水型
荷瘤小鼠的生命延长率有明显增加作用。综合上
述结果 ,可认为东风菜根总皂甙具有一定的增强机
体免疫功能及抗肿瘤的生物活性。
4　参考文献
1　肖洪彬 ,等.中医药学报 , 1997 , 25(6):57
2　陶义训 ,等主编.临床免疫学检验 , 上册.上海科技出
版社 , 1983:124
3　徐叔云主编.药理实验方法学 , 第一版 ,人民卫生出版
社, 1982:946 、1116
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1998年　第 3期　　　
　　　　　中　医　药　学　报
ACTA CHINESE MEDICINE AND PHARMACOLOGY