全 文 ：中国农学通报 第 ! 卷 第 # 期 !$ 年 %! 月
!#$%%&’()*+,’-./01’-2)34)*3+ 5 3 3 3 6
太行菊组织培养研究
姚连芳!董美华!毛玉收
!河南科技学院园艺系!河南新乡 #$%&’(
摘 要对太行菊生长期间茎顶芽和带腋芽的茎段进行组培试验# 结果表明!对外殖体应用 &)*+的
,-./0进行表面灭菌!#123 处理茎顶芽和 4123 处理茎段的死亡率和感染率较低# 外殖体组织分化有
直接生成愈伤组织$小植株体!愈伤组织和不定芽同时生成三种形式#
关键词太行菊5!#$%&’()$ %(#&(*+,*$#$&%组织培养%组织分化
!#$% &’ ()**#+ ,#-#.+ &/ (0)10’2 ,1.%*0’1+3#3
’() *+(,-(,./ 0),. 12+34(5 1() ’463)4
7-.*(* /’0(%1’*23.04*10(5 6.(04.7$ 8’55.9.58+,9+(,. $:;;&
45*.067 <32 =+66426 >4?=4@26 ), 6=2A (B29 C4D (,D 6=2A 62>=+), E+=3 (9+??(@F C4D )- <(+3(,. G3@F6(,!
=32A4A E2@2 6=4D+2DH <32 @264?=6 63)E2D =3(= =32 29B?(,=6 )- G3@F6(,=32A4A =@2(=2D CF H%IJ.G?! +,
:A+, 76=2A (B29 C4D6K (,D +, LA+, 76=2(A 62>=+),& >)4?D )C=(+,2D ?)E @(=2 )- D2(D (,D +,-2>=+),H <32 =+6!
642 D+6+,=2.@(=+), )- =32 29B?(,= >)4?D 3(M2 =32 =3@22 -)@A6 =3(= E2@25 >(??46 (,D B?(,=?2= .@)E+,. D+@2>=?F
(,D >(??46 (,D (DM2,=+=+)46 C4D6 .@)E+,. (= =32 6(A2 =+A2H <4C2 N22D?+,. +6 M2@F .))D +, =(O2 @))=H
8+% 9&.:*7 <(+3(,. G3@F6(,=32A4A5 <+6642>4?=4@25 <+6642 D+6+,=2.@(=+),
7777777777777777太行菊 8:1$%4’()$ %(14(*9.*$1$K是菊科菊属的
多年生宿根草本植物!为太行山特有属!仅有 9 种!
主要分布在河南新乡和山西陵川$晋城的太行山区!
河南有 : 种!大多生长在人们难以到达$非常险峻的
悬崖峭壁的石缝中!处于濒危状态 ;:<# 被河南省列为
重点保护植物# 目前尚未对太行菊进行系统科学的
研究# 利用组织培养的方法!对太行菊的茎段$茎顶
芽进行诱导;=<>建立太行菊无性系!对于进一步研究菊
花的分类$进化以及进行育种研究都有重要的意义#
; 材料与方法
*)* 试验材料 试验于 9??= 年 @ 月 A9??B 年 C 月在
河南科技学院园艺系组培室进行! 试验材料采自河
南辉县太行山区#
*)0 试验方法
:)9):7!诱导分化培养
诱 导 分 化 培 养 基 DEFGHH?):IJ%KFCLMH?)
@IJ%K
77777777777777777777DEFGHH?):7IJ%K7FCLMH9)?7IJ%K
7777777777777777从太行菊健壮植株上采新抽生带有顶芽或腋芽
的嫩茎!去掉叶片# 将材料用自来水冲洗干净!洗去
表面尘土!经洗衣粉水洗 9A= 次后!用自来水冲洗干
净# 在超净工作台上用 N?O酒精消毒 :?P!再用无菌
水冲洗 @AC 遍!接着用 ?):OQJR29 分别消毒 @IS’ 和
TIS’!无菌水冲洗 CAN 遍# 用无菌吸水纸将材料上的
水分吸干!把材料放在无菌培养皿中!用解剖刀分别
切取茎顶和茎段 =ABII 长!分别接种于诱导培养基
上!每瓶接两个芽#
:)9)=77生根培养
生根培养基:%9DEFGHH?):7IJ%K
7777777777777777将生长高度在 9*I 以上的无菌苗! 转接到生根
培养基上!
培养室控制温度为 89@U9VW ! 光照强度
9???KX!光照时间为 :B+%Y#每天观察记载外殖体$愈
伤组织$不定芽等的分化$生长$生根状况#
< 结果与分析
0)* 不同灭菌时间对外殖体的影响 不同灭菌时间对
基金项目河南省科技攻关项目& 太行山区野生花卉资源调查与产业化生产技术研究’ !项目编号为 ZZ:?@??=T# 第一作者简介姚连芳!女!:ZZ@@ 年出
生!河南科技学院园艺系副教授# 多年来主要从事花卉组织培养快繁技术研究!& 花卉苗木组培快繁生产技术研究’ 获 9??= 年河南省科技进步贰等奖#
目前!正在进行野生珍稀植物保存及繁育技术的研究# [42?=N=L=?B?NTC!\LI-S2$]0’J0/:?9?^:C=)*/I# 收稿日期9??BL?NL?9!修回日期9??BL?NL?B#
农业生物技术科学 06( (
!#$%&%’()*#+,-.,*/-’0+#%$+%’1,--%.#$’23-45678349’566:’;%+%<=%*
..>?@@A$.=4+#$/B3,*$/-4$%.4+$
7C 7 7 7 7 7
外殖体的影响较大!由表 D 可以看出!E<#$ 处理对茎
尖和茎段都有较大的伤害!由于 F)!-5伤害所造成的
植物材料枯竭! 从而导致的死亡率分别达到 G9HG9I
和 9G49:J K<#$ 处理对茎段有一定的伤害!所造成
的死亡率为 5KJ!但对顶芽所造成的死亡率为零
不同处理时间对外殖体的灭菌效果差别很大!由
表 5 可以看出! 两种处理时间对茎段的感染率分别
为为 :4KKJ和 GG4GGJ! 而对茎顶芽的感染率分别为
554GLJ和 D:45MJ
两种处理时间相比!K<#$ 处理茎顶芽感染率和
死亡率都比较低!E<#$ 处理的茎段的死亡率较低
从灭菌处理前后的试验观察来看!处理前外殖体
茎#芽饱满!色泽鲜绿!处理后!部分外殖体出现不同
程度的失绿和变色现象!有的由绿色转为黄绿色!有
的由绿色转为褐色这可能是 F)!-5表面灭菌对植物
组织和植物组织的表层细胞所造成的伤害所致 将
外殖体接种 EN 后观察到!茎顶芽外殖体从褐色转为
黄绿色!经过一段时间的培养!失绿和变色现象都有
缓解!还有一部分有相互转化的现象!即黄绿$绿或
者由褐$黄绿而转为绿色!经过 KOEN 转绿后的顶芽
开始萌动!继而发育成小植株
!! 外殖体分化生长状况 外殖体接种后 EOG6N!愈
伤组织形成并迅速分化生长 在两种分化培养基上!
愈伤组织的形成状况有很大的差异 接 种 在
P0Q8CC64D <)@RQ9S1C64K <)@R培养基上的外殖
体!经过 EOD6N 的培养!有部分的基部产生不规则#
淡绿色# 带有褐色斑点的愈伤组织 ! 有的生长畸
形 ! 愈伤组织生长缓慢 接种在 P0Q8CC64D T
<)@RQ9S1C546<)@R培养基上的外殖体!一周以后产
生大量绿色 #不透明 #质地致密的块状愈伤组织 !
第三周后旺盛生长 U并且有丛芽发生 第四周达到
生长高峰!G6N 以后生长减缓颜色逐渐变淡! 愈伤
组织干枯
不同类型外殖体愈伤组织的分化形式和分化时
间存在着较大差异茎段外殖体在接种后 EN!基部有
小颗粒状愈伤组织生成! 愈伤组织紧实# 表面呈绿
色!56N 后!绿色颗粒状愈伤组织将外殖体全部包被!
形成片状或不规则状愈伤组织块V图 DW 还有的茎段
外殖体在接种后 KN! 腋芽开始萌动!MN 后开始展出
绿色小叶! 并逐渐转为油绿色!G6N 后形成完整的小
植株体V图 5W
表 ! 不同灭菌时间对外殖体的影响
表 不同处理时间材料感染状况
图 接种 #$% 后萌发生成的太行菊苗图 ! 接种 $% 后生成的愈伤组织块
8min 22 8 36.36% 22 14 63.64%
5min 16 4 25% 26 0 0
(%)
(%)
8min 22 1 4.55 44 10 22.37
5min 21 7 33.33 42 6 14.29
(%
7777777777777777茎顶芽外殖体在接种后 D6N!基部有绿色#块状
疏松的外殖体生成!并很快将茎顶芽包围!形成一个
半球形愈伤组织块!G6N 后分化出绿色不定芽V图 GW
有的茎顶芽外殖体在 KN 后开始萌动 MN 后有新
叶发出! 叶色油绿!G6N 后形成一个生长旺盛的小植
株体
试验观察到!接种 DKN 后!在个别茎段外殖体上
不仅分化出愈伤组织!而且在分化愈伤组织的同时!
还有幼小的不定芽生成!芽体很小!与米粒状愈伤组
织的大小相当! 逐渐将愈伤组织包围!G6N 后形成绿
色丛状不定芽V图 :W
!# 组培苗生根状况 无菌苗接种到生根培养基上!
农业生物技术科学#$% %
中国农学通报 第 ! 卷 第 # 期 !$ 年 %! 月
!#$%%&’()*+,’-./01’-2)34)*3+ 5 3 3 3 6
种如短角牛 7(89):::! 日本黑牛 7(8:);<=! 朝鲜牛
7(8:)>;=?7(?频率高相一致 此种现象可能系秦川牛
早熟性的遗传背景
参考文献
9????@-A4?-’B?C-’?D466) ?E+4C,*-6?*6-FF,G,*-,/’?/G?*-64) ?@144B?H1/05F) ?
??????8’,C-)?@6//B?H1/05F?(,/?*+4C)?H4’4I9;;:JK99L$9M
??????==N=<
Q????王清义)牛血红蛋白多态性的研究与应用)黄牛杂志J9;;:JKRL$QNS
T???? U,BBV? E)8? 1-’F? G411,’F? V54? -’B? 1-’FW,? -(,6,V? G/1? 51/B0*,/’? ,’?
??????X-,1V?Y*,J9;;=JK=>L$9=:9
=????邱怀J涂正超)临夏黄牛血液蛋白多态性的分析)西北农业学报J9;;TJQ
??????KQL$S
??????Q>NT:
??????9;;
图 ! 接种 !# 后在愈伤组织上形成不定芽 !图 $ 接种 !# 后形成的丛状不定芽
绿色叶片增大!植株高度明显增加!整体生长健壮K图
=L
! 小结
植物材料的灭菌是植物组织培养过程中的重要
环节 大量研究表明!在常用的植物材料灭菌剂中!
7ZE6M是一种极有效的杀菌剂[TN>\但在植物组织培养
应用中! 存在着杀菌时间长短对灭菌效果和对植物
组织#组织表层细胞伤害的问题 本试验结果表明!
以氯化汞作为杀菌剂! 对太行菊的茎段和茎顶芽外
植体进行灭菌处理! 以 =C,’ 处理茎顶芽和 >C,’ 处
理茎段效果较好 由于太行菊是草本植物!其幼茎的
茎顶芽和茎段组织比较幼嫩!容易受到杀菌剂的伤害
故灭菌时间应适当短一些
太行菊在组织培养过程中!组织分化有三种不同
的分化形式!在茎顶芽或茎段的基部产生愈伤组织$
愈伤组织和不定芽同时生成$ 茎段腋芽或茎顶芽直
接萌发长出幼芽和分化出小植株体 无菌苗生根状
况良好
参考文献
9????丁保章J王遂义)河南植物志K第三卷L)郑州$河南科技出版社J9;;>)SQM
M????赵长增 J陆璐 J陈佰鸿 )食用仙人掌K米邦塔 L的试管繁殖 )园艺学报 J
??????M::QJK=L$S:;NS99
Q????朱根发)白鹤芋属植物的组织培养和快速繁殖 )中国农学通报JM::QJ
???????KQL$<=N
药杂志JM::MJKSL$T=>NT=;
=????朱广廉)植物组织培养中灭菌和无菌操作的几个问题)植物生理学通
讯JM::MJK=L$Q
??????TTTNTTS
污染率的影响)中国甜菜J9;;;JKTL$>N;
>????魏晓兰)浅析三倍体毛白杨组织培养中外殖体的灭菌)甘肃林业科技J
??????M::QJKML$=TN==
图 % 无菌苗接种到生根培养基 &# 以后生长情况
农业生物技术科学
%上接第 ’ 页&
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
!’ ’