全 文 ：　药物定性定量研究　
RP-HPLC 法测定蒙药材小白蒿(艾给)中绿原酸的含量
内蒙古赤峰市医院(赤峰 024000)　　　　　　图布新　颈　松
内蒙古自治区药品检验所(呼和浩特 010020)　王旭梅　齐曼丽
摘　要:目的:提高蒙药材质量标准。方法:采用高效液相色谱法 , 用外标法对小白蒿中绿原酸进行含量测定。结果:绿原酸
在 0.2048 ～ 0.7168μg范围内呈良好线性关系。回归方程:Y=7E+06X-50095 , r=0.9999。结论:分离度大于 1.5 , 理论板数
按绿原酸峰计算不低于 5000。检测方法具有分离效果好 、灵敏 、准确等优点 ,结果满意。
关键词:高效液相色谱法;小白蒿;绿原酸
中图分类号:R291.2　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2007)12-0042-02
　　小白蒿为菊科植物冷蒿(Artemisiafrigida Willd)的干燥地
上部分。具有止血 、消肿 、消“奇哈”之功效〔1〕。用于各种出
血 、关节肿胀 、肾热 、月经不调 、疮痛。据文献报道〔2〕, 小白
蒿主要含挥发油 、多烯炔衍生物类 、黄酮类 、萜类化合物 、香
豆精类 、生物碱类等化学成分 , 绿原酸为其主要活性成分。
本课题参照《中国药典》 2005 年版一部〔3〕相关 品种项下的
方法与条件进行了含量测定的分析试验。分别进行了用索
氏提取器提取 、加热回流提取 、超声波提取等 3 种方法对含
量测定的影响。试验结果表明:索氏提取方法繁琐 , 超声波
提取造成绿原酸分解 ,回流提取方法简单易行 , 提取副产物
少 ,故选用回流提取法。
1　仪器与试药
1.1　仪器:美国 Alltech 高效液相色谱仪 , M626 输液泵 , U-
VIS-201型检测器;美国Alltech 高效液相色谱仪;Alltech U-
VIS200 Detector 检 测器;Alltech426HPLC Pump 泵;Alltech
Chromstation 色谱工作站;岛津 UV-250 型紫外可见分光光
度仪;KQ3200DB型数控超声波清洗器。
1.2　试剂:甲醇为色谱纯试剂 , 水为重蒸馏水 , 其他试剂均
为分析纯。
1.3　对照品:绿原酸为中国药品生物制品检定所提供(批
号:953-200111)。
1.4　样品:采自阿拉善盟 、锡林郭勒盟 、呼伦贝尔盟 , 经内
蒙古自治区药品检验所蒙药室康双龙主任鉴定为蒙医常用
小白蒿(艾给)。
1.5　色谱条件:Alltech RP-C18色谱柱(4.6mm×250mm ,
5μm),ODS 预柱;检测波长 328nm;流动相:0.1mol/ L磷酸二
氢钠缓冲液[ 取磷酸二氢(NaH2PO4·2H2O)15.6g , 加水至
1000ml , 制成 0.1mol/ L的溶液 , 用磷酸调节 pH 值为 2.7] -
甲醇(70:30);流速:1.0mol/min;柱温:30℃;进样量:10μl。
1.6　检测波长的选择:参照《中国药典》 2005 年版一部〔3〕
“菊花” 项下方法 , 制备绿原酸对照品溶液 , 在 280 ～ 360nm
波长范围内进行光谱扫描 , 绿原酸在 328nm 有最大吸收 , 故
确定检测波长为 328nm。
1.7　对照品溶液的制备:取绿原酸对照品适量 , 加水制成
每 1ml含 0.5mg 的溶液 ,即得。
1.8　供试品溶液的制备:取本品粉末(过 1号筛)0.4g ,精密
称定 ,置锥形瓶中 ,精密加入甲醇 50ml , 称定重量 , 加热回流
2小时 , 放冷 ,再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤
过 ,精密量取续滤液10ml ,蒸干 , 残渣加三氯甲烷 5ml , 浸渍3
分钟 , 弃去三氯甲烷液 , 挥干 , 加水适量使溶解 , 定量转移至
5ml量瓶中 ,加水至刻度 , 摇匀 ,即得。
2　方法学考察
2.1　线性关系考察:精密称取绿原酸对照品 5mg , 置 50ml
量瓶中 , 加甲醇使溶解并稀释至刻度 , 摇匀。分别精密吸取
42　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2007 年 12月第 12 期
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2007.12.029
2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 、7.0ml置 10ml量瓶中 ,加水稀释至刻
度 ,摇匀 ,以 10μl进样 , 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 , 以绿
原酸进样量(μg)对峰面积积分值(A)进行线性回归 , 结果绿
原酸在 0.2048 ～ 0.7168μg范围内呈良好线性关系。回归方
程:Y=7E+06X-50095 , r=0.9999(Y为峰面积积分值 , X为
对照品进样量)。结果见表 1。
表 1　标准曲线测定结果
进样量(μg) 0.2048 0.3172 0.4096 0.5120 0.6144 0.7168
峰面积积分值 1469287 2244602 2997939 4450354 5231415 5231415
2.2　精密度试验:取供试品溶液 , 连续重复进样 6 次 , 测得
供试品中绿原酸的峰面积积分值 , RSD<2%。结果见表 2。
表 2　精密度试验结果
序号 1 2 3 4 5 6 RSD(%)
峰面积积分值 4233955 4249606 4267759 4261907 4256478 4225646 0.38
　　试验表明 ,精密度良好。
2.3　稳定性试验:取供试品溶液 ,分别在 0 、2、4、6、8、10、12
小时进样 10μl ,供试品中绿原酸的峰面积积分值基本不变 ,
RSD<2%。结果见表 3。
表 3　稳定性试验结果
测定时间
(h)
0 2 4 6 8 10 12 24 RSD
峰面积
积分值
4059778 4062909 4085467 4042080 3984817 4083267 4070981 4041080 0.79
　　试验结果表明 ,供试品在 24 小时内稳定性良好。
2.4　重复性试验:取样品 ,按上述供试品溶液制备方法平
行制备 5 份 ,每份进样 2 针 , 测得峰面积积分值 ,含量平均
值的 RSD<2%。结果见表 4。
表 4　重复性试验结果
序号 取样量(g)
峰面积
积分值
含量
(mg/g)
平均含量
(mg/g)
RSD
(%)
1 0.4138 1273161 4.27
2 0.4120 1259231 4.24
3 0.4059 1223480 4.18 4.21 0.98
4 0.4140 1258227 4.22
5 0.4042 1215540 4.17
2.5　加样回收试验:取已知绿原酸含量的样品 5 份 , 每份
0.5g ,精密称定 , 分别精密加入约 1ml(0.81mg/ml)的对照
品 ,按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定 ,计算回收
率。结果平均回收率为 99.75%, RSD<2%。结果见表 5。
表 5　回收率试验结果
序
号
取样量
(g)
含量
(mg)
对照品加
入量(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.2096 0.88 0.81 1.66 96.3 96.8 1.45
2 0.2202 0.93 0.81 1.73 98.8
3 0.2154 0.91 0.81 1.70 97.5
4 0.2087 0.88 0.81 1.65 95.1
5 0.2100 0.88 0.81 1.66 96.3
　　试验结果表明 , 加样回收良好。
2.6　样品含量测定:分别取两批不同产地的白花杜鹃叶样
品 ,按上述拟定的含量测定方法制备供试品溶液测定。 结
果见表 6。
表 6　样品中绿原酸含量测定结果
样品名 取样量(g) 峰面积积分值 含量(%)平均含量(%)
锡盟含量 0.4122 1039014 0.34 0.33
0.4085 999070 0.33
呼盟含量 0.4136 1014070 0.33 0.33
0.4149 1024884 0.34
阿盟含量 0.4151 1315943 0.43 0.43
0.4133 1311546 0.43
3　结　果
3.1　拟定的小白蒿中绿原酸的 HPLC方法具有分离效果理
想 、灵敏度高 、准确 、稳定 、重现性好 , 可以作为小白蒿的含
量测定方法。
3.2　含量测定试验结果:绿原酸在 0.2048 ～ 0.7168μg范围
内呈良好线性关系 , 相关系数 r=0.9998;精密度试验的 RSD
=0.38%;稳定性试验的 RSD=0.79%, 供试品在 24 小时内
稳定性良好;重复性试验的 RSD=0.98;加样回收的平均回
收 96.8%, RSD=1.45%。
3.3　对照品溶液和供试品溶液应放置于棕色量瓶 , 试验表
明 , 随着放置时间的延长 , 温度 、光照等的变化对含量有一
定影响 , 导致含量稍有下降。因此本试验最好在低温 、避光
条件下操作。
参考文献
〔1〕内蒙古自治区卫生厅.内蒙古药材标准〔S〕.内蒙古科技
出版社 , 1986.147.
〔2〕四川医学院.中草药学〔M〕.人民卫生出版社 , 367.
〔3〕国家药典委员会.中国药典一部〔M〕.化学工业出版社 ,
2005.246.
2006 年 11月 6 日收稿
432007年 12 月第 12 期　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志