全 文 ：新 疆 农 业 大 学 学 报 2005 ,28(3):82 ～ 85
Journal o f Xinj iang Agricultural University
文章编号:1007-8614(2005)03-0082-04
野生蔬菜龙蒿的组织培养技术研究
包建平 , 秦 勇 ,刘 娟 , 何贵香
(新疆农业大学 园艺学院 ,乌鲁木齐 830052)
摘 要: 以龙蒿的茎 、叶 、花为外植体 , 将其置于 MS 附加不同浓度 BA 和 NAA 的培养基上 , 诱导分化 、增殖。结
果表明 ,最佳的增殖培养基为 MS+ 0 ～ 0.3mg/ L BA+0 ～ 0.04mg/ L NAA , 增殖率高。在生根培养基筛选中发
现 ,用 NAA , IAA , IBA 三种激素处理龙蒿之后 , 激素 IBA 比 IAA , NAA 促进龙蒿生根的效果好。
关键词: 龙蒿;组织培养
中图分类号: Q949.783.5 文献标识码: A
Study on Technique of Plant Tissue Culture of Wild
Vegetable Artemisia dracunculus L.
BAO Jian-ping , QIN Yong , LIU Juan , HE Gui-xiang
(Co lleg e of Ho rticul ture , Xinjiang Ag ricultural University , U rumqi , 830052)
Abstract: Leaf and flower of tarragon as primary explants were si ted on nutriments of M S wi th BA
1.0mg/ Land NA A0.02 mg/ L etc in period of cultiva tion , and w ere aroused to dividing and breeding .The
results show ed that the optimum propagat ing medium was M S+0 ～ 0.3mg/L BA+0 ～ 0.04mg/L NAA ,
plant o f regene ra tion ef ficiency w as high.During select ing roo ting generation , the ef fect of roo ting genera-
tion o f IBA was the best of the three ho rmones af ter t reatment wi th NA A , IAA and IBA.
Key words: tarragon;tissue culture
龙蒿(Artemisia dracuncuLus L.)又名狭叶青
蒿 、蛇蒿 、椒蒿等 ,为菊科多年生草本植物。在法国 、
美国等地 ,当龙蒿未开花时割取绿叶及嫩茎的顶端
部分 ,置于阴凉处阴干 ,以片状或粉状用于肉 、禽 、蛋
类和番茄制品中作香辛料供食用。从龙蒿中提取的
龙蒿油可作香料 ,主要用于肉糜 、法国甜酒 、调味品 、
糖果 、饮料等食品中 ,是一种优良的食品添加剂。龙
蒿可用于治疗风寒感冒 、胃胀 、消化不良 ,还曾经用
于治疗水肿和抗坏血病等 。龙蒿在我国分布较广 ,
全国大部分地区均有分布 ,尤以北部及西北部较多 ,
主要野生于河边 、路边 、草地 、山坡等[ 1] 。在新疆 ,龙
蒿主要分布于海拔 500 ～ 2500 m 的地区 ,其嫩茎叶
可供食用 ,新疆温泉 、吉木萨尔 、巴里坤等县已对龙
蒿进行加工并制成软包装销售 。由于龙蒿采收的是
其嫩茎叶 ,再加上牛羊的采食 ,使龙蒿植株难以正常
开花结果;另外 ,野外采收的龙蒿种子秕子率高 ,发
芽率低 ,用种子进行繁殖存在一定的困难 ,而通过组
织培养 ,可以加速龙蒿的无性繁殖 ,为龙蒿的繁殖方
法开辟一种新的途径 ,也为开发利用龙蒿这一资源
提供基础性的研究结果 。
1 材料与方法
1.1 材 料
实验材料采自新疆农业大学园艺学院科研教学
实习基地 。
1.2 方 法
1.2.1 建立无菌体系
在晴天的中午从健壮的植株上取材 ,取材时不
能取有伤口或有病虫害的材料作为外植体 。将龙蒿
茎 、叶片 、花剪下 ,放在流水中冲洗 1 ～ 2 h 。培养基
为 MS基本培养基 ,加入 0.3%蔗糖 ,0.7%的琼脂 ,
收稿日期:2005-02-23
通讯作者:秦 勇 , E-mail:xjndqinyong@sina.com
第 3 期 包建平 , 等:野生蔬菜龙蒿的组织培养技术研究
另加入 BA1.0 mg/L 和 NAA0.02 mg/L , pH 值为
5.3 ～ 6.0[ 2 ～ 4] 。在超净工作台中 , 紫外线灭菌
20 min。将叶片剪成约 0.5 cm2 大小 ,不带芽的茎段
剪成 1 cm 长的小段 ,从中剖开 ,用 70%～ 75%酒精
浸泡茎 、叶片 、花 30 s ,再用 0.1%HgCl2 浸泡 6 ～
8 min。再用无菌水冲洗 3 ～ 4次 ,接入培养基中 ,使
叶片的背面和茎段的剖开面与培养基接触 ,花直接
接入培养基中 ,放在温度为 25 ～ 28 ℃, 光照强度
2 000 ～ 3 000 lx ,光照时间 14 ～ 16 h/d 的条件下
培养 。
培养基的消毒:培养基分装于三角瓶中 ,用塑料
薄膜封口 , 置于高压灭菌锅中 , 在 121 ～ 126 ℃
(1.1 kg/cm2)条件下消毒 20 min[ 5] 。
1.2.2 增殖培养
选择经初代培养长势整齐一致的茎段接入 MS
培养基中 ,加入不同的激素 ,激素范围是 BA 0 ～
0.4 mg/L ,NAA 0 ～ 0.10mg/ L (表 1)。茎段长度
为 1 ～ 1.5 cm ,每处理 25株 , 30 d后统计其平均嫩
茎增殖系数。培养条件同上。
1.2.3 生根培养
分别以 MS 及 1/2M S为基本培养基 ,分别加入
IAA 0 ～ 1.0 mg/L , IBA 0 ～ 1.0 mg/L ,NAA 0 ～
1.0 mg/L ,进行对比实验。每处理接种 25株 ,30 d
后统计其生根率 、平均生根数以及平均根长。
2 结果与分析
2.1 不同激素组合对增殖的影响
通常来说 ,最优化的增殖体系不但要求有较高
的增殖率 ,而且还要有正常的形态 、颜色以及便于转
接所需要的茎高 。细胞分裂素 BA 与生长素 NAA
结合使用时 ,若生长素的相对浓度较高 ,则有利于细
胞的增殖和根的分化;若生长素和细胞分裂素的相
对浓度较高 ,则促进芽的分化[ 6] 。实验中发现在激
素的刺激下 ,龙蒿形成大量的侧芽 ,当 BA 浓度过高
时 ,易形成愈伤组织 ,引起侧芽丛生或产生玻璃化现
象。在 BA 0 ～ 0.3mg/ L 范围内 ,龙蒿的平均嫩茎
增殖率随着 BA 浓度的增大而呈上升趋势 ,且在同
样的 BA 浓度下 ,附加 NAA 可明显提高平均嫩茎
增殖率。单纯加入 NAA 对侧芽增殖作用不明显 ,
但比对照仍有一定提高 ,平均嫩茎增殖率从 2.21提
高 4.4。而 BA 和NAA 在适当范围内使用 ,BA 0 ～
0.3 mg/ L+NAA 0 ～ 0.04 mg/L 的 MS 培养基的
增殖率高(表 1),并且表现出茎较粗 ,叶色浓绿 、节
间长度适中;而其它激素水平组合增殖倍数较低 ,茎
节间极短 、叶片针状 、叶片向上长 ,不利于下一步取
材。因而认为龙蒿对激素比较敏感 ,在增殖过程中 ,
需要较低的激素水平 ,尤其是对细胞分裂素 。
表 1 不同浓度的激素组合对龙蒿增殖的影响
Table 1 Inf luence of dif ferent combination and type of hormone on tarragon
培养基
序号
激素浓度(mg/ L)
BA NAA
平均嫩茎
增殖率
培养基
序号
激素浓度(mg/ L)
BA NAA
平均嫩茎
增殖率
1 0 0.00 2.21 14 0.2 0.04 6.20
2 0 0.02 2.65 15 0.2 0.06 5.63
3 0 0.04 2.93 16 0.2 0.08 5.54
4 0 0.06 3.21 17 0.3 0.00 6.33
5 0 0.08 4.32 18 0.3 0.02 6.28
6 0 0.10 4.40 19 0.3 0.04 6.64
7 0.1 0.00 4.20 20 0.3 0.06 7.42
8 0.1 0.02 6.92 21 0.3 0.08 6.31
9 0.1 0.04 7.10 22 0.4 0.00 5.04
10 0.1 0.06 7.13 23 0.4 0.02 6.68
11 0.1 0.08 7.00 24 0.4 0.04 8.61
12 0.2 0.00 5.33 25 0.4 0.06 9.50
13 0.2 0.02 6.52 26 0.4 0.08 7.11
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新 疆 农 业 大 学 学 报 2005年
2.2 生根培养基
诱导生根的方法有:降低培养基中盐类含量(如
用减半的无机元素), 减少糖含量(如用 0.5%～
1.0%),降低培养温度到 20 ℃,培养的前 10 d黑暗
处理以后再光照 ,施用生长素等[ 7 ～ 9] 。实验选用三
种激素促使龙蒿生根 ,结果表明激素 IBA 比 IAA ,
NAA促进龙蒿生根的效果好。在MS培养基上 ,添
加 NAA 可导致龙蒿生根 , 当 NAA 浓度超过
1.0 mg/L时 ,易形成愈伤组织或根细而少;而在
1/2M S培养基上 , IBA0.2 ～ 0.8 mg/L 范围内 ,生根
数量增多 ,侧根数量也增加 , 但当 IBA 浓度超过
0.6 mg/L时 ,根多而细。用 NAA , IAA , IBA 三种
激素处理龙蒿之后 ,综合生根率 、平均根长 、平均根
数三项指标 ,适宜生根培养的三种激素浓度范围是
0.2 ～ 0.6 mg/ L(表 2)。
表 2 培养基对龙蒿生根的影响
Table 2 Effect of media on rooting of tarragon
培养基 激素浓度(mg/ L)
生根率
(%)
平均根数
(条)
平均根长
(cm)
1/2MS+ IAA
0.2 93.0 4.6 3.79
0.4 93.0 5.0 5.36
0.6 90.0 7.8 4.57
0.8 96.0 7.2 4.38
1.0 90.0 5.4 4.4
1/ 2MS+NAA
0.2 92.0 4.8 3.98
0.4 86.0 4.8 3.81
0.6 88.0 4.0 5.53
0.8 88.0 4.75 4.94
1.0 90.0 5.0 4.06
1/2MS+IBA
0.2 93.0 9.2 5.28
0.4 95.0 7.6 4.02
0.6 95.0 9.3 4.48
0.8 89.0 9.0 5.92
1.0 89.0 6.0 4.56
MS+NAA
0.0 100.0 3.9 3.20
0.2 81.0 5.4 5.45
0.4 73.0 4.4 4.40
0.8 76.0 7.8 4.15
1.0 80.0 7.6 3.63
实验中发现 1/2MS 基本培养基比 MS 培养基
更适合龙蒿生根 。在龙蒿生根蔗糖浓度筛选过程中
可以明显看出 ,龙蒿的生根受到培养基中蔗糖浓度
的影响 ,当培养基中的蔗糖浓度为 1%时 ,平均根
长 、平均根数都是最高的 。随着蔗糖浓度的增高 ,其
根长 、根数都在降低(表 3)。
表 3 不同蔗糖浓度对龙蒿生根的影响
Table 3 Influence of different combination sugar on rooting
of tarragon
培养基 NAA(mg/ L)
平均根长
(cm)
平均根数
(条)
生根率
(%)
1/ 2MS+蔗糖 10 g 0.4 7.62 9.8 95
1/ 2MS+蔗糖 20 g 0.4 5.91 7.0 88
1/ 2MS+蔗糖 30 g 0.4 4.30 4.5 76
2.3 练苗移栽
试管苗是在无菌 、有营养供给 、适宜的光照 、温
度和相对湿度环境中生长的 ,并有适宜的植物激素
以调节其生长代谢等生理需要 ,一旦出瓶移栽 ,环境
发生了不利于其生长的变化 。要使试管苗大量移栽
成活 ,就应尽可能地创造出适宜于它生存的环
境[ 10] 。为此 ,在练苗过程中 ,可首先揭去封口膜 ,用
镊子轻轻地将植株取出 ,用清水洗净根部黏附的培
养基 ,放在装有少量清水的瓶中 ,每天进行换水 。在
气温较高 ,空气干燥时 ,对小苗进行叶面喷水 ,以提
高空气湿度 ,减少叶片蒸腾 ,尽量接近培养瓶中的条
件 ,使小苗始终保持挺拔的姿态 。炼苗 3 d后 ,逐渐
增加光照时间 ,一般早 、晚让苗见光 ,中午前后适当
遮荫 ,同时随时注意小苗叶片的变化 ,适时喷水 。等
到有新根长出后再移栽。在移栽实验过程中 ,每种
处理移栽 5棵 ,重复三次。首先筛选出适合龙蒿生
长的基质 。从表 4中可以看出 ,锯末的成活率最高 ,
达到了 100%,但是它的根系发育不是最好的。在
其它基质中 ,龙蒿的成活率都达到了93.3%本实验
中还观察到 ,以沙子为基质 ,龙蒿的幼苗生根比较多
且长 ,最长达 22.5 cm ,尤其是产生了大量的侧根;
山土+珍珠岩(1∶1)和山土+蛭石(1∶1)的根较
少 、粗 、短 ,移栽 45d 后 ,根只长了几毫米;锯末的生
长势居中(表 4)。
表 4 不同基质和幼苗消毒对龙蒿移栽的影响
Table 4 The inf luence of different matrix and seedling dis-
infection on transplant of tarragon
处 理 成活率(%)
平均根重
(g)
平均根长
(cm)
锯 末 100 0.090 7.22
沙 子 93.3 0.194 11.82
珍珠岩 93.3 0.088 7.30
山土+蛭石(1∶1) 93.3 0.062 6.88
山土+珍珠岩(1∶1) 93.3 0.062 4.58
500 mg/ L 多菌灵消毒 100 0.049 5.58
未消毒 93.3 0.030 4.10
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第 3 期 包建平 , 等:野生蔬菜龙蒿的组织培养技术研究
在无菌苗出瓶时 ,仔细洗去附着在其上的培养
基。将洗净的苗在一定浓度的杀菌剂中浸泡几分
钟 ,可有效地保护无菌苗不受病菌的侵染 ,提高移栽
成活率[ 11 ～ 13] 。本实验结果表明 ,用 500 mg/L 多菌
灵溶液浸泡小苗 3 ～ 5 min ,可明显提高成活率 ,而
且小苗叶色浓绿 、茎粗 ,根较多也比较粗;未消毒的
小苗则叶色淡黄色 、生长势弱 ,根少且短(表 4)。
龙蒿幼苗经过一段时间的驯化后 ,移栽到基质
中 , 2 d 后浇一次营养液 ,以后每隔一周左右浇一
次 ,约 20 d苗生根后 ,即可移栽到大田中 。本实验
移栽了 30 株 , 成活了 28 株 ,成活率达到了 93%
以上 。
3 小结
前人的龙蒿组织培养实验用带腋芽的茎段作为外植
体[ 14] ,而本文首次用龙蒿的茎 、叶片 、花作为外植
体 ,探讨了通过愈伤组织培养途径进一步诱导分化
形成幼苗的可能性.实验结果表明 ,龙蒿的增殖可以
用 MS基本培养基 ,培养基中的激素成分 、浓度对龙
蒿增殖都会有影响。BA 在增殖过程中起主要作
用 ,易促进侧芽的形成 , BA 和 NAA 配合使用 ,增殖
效果更明显。最佳增殖培养基是 BA0 ～ 0.3 mg/L
+NAA0 ～ 0.04 mg/L 。龙蒿适宜的生根培养基为
1/2MS+IBA0.2 ～ 0.8 mg/ L , 1/2MS +IAA0.2 ～
0.8 mg/ L , 1/2MS +NAA0.2 ～ 0.8 mg/ L ,还可以
通过降低培养基中的蔗糖浓度来提高生根率。在龙
蒿炼苗移栽过程中发现 ,龙蒿幼苗在沙子中生长的
较好 ,用 500 mg/L 多菌灵处理的效果较佳;同时选
择适宜的时间 ,也可以提高移栽成活率 。
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