全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　
收稿日期: ２０１６￣０８￣０３ꎻ 修回日期: ２０１６￣０９￣２７
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(Ｎｏ. ３１５４００５０)ꎻ公益性行业(农业)科研专项(２０１３０３０２８)
通讯作者: 牛颜冰ꎬ博士ꎬ教授ꎬ主要从事分子植物病毒学和中药 ＧＡＰ 研究ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｎｉｕｙａｎｂｉｎｇｂｅｓｔ＠１６３.ｃｏｍ
第一作者: 杨 锋ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事分子植物病毒学研究ꎻ Ｔｅｌ: １８４￣０４９８￣１１０７ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｙａｎｇｆｅｎｇｇｏｏｄｌｕｃｋ＠１６３.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.００００９４
锦葵脉明病毒中国蜀葵分离物 ｃｐ基因序列分析
杨 锋ꎬ牛二波ꎬ王德富ꎬ牛颜冰∗
(山西农业大学生命科学学院ꎬ太谷 ０３０８０１)
摘要:本研究利用双链 ＲＮＡ(ｄｏｕｂｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡꎬｄｓＲＮＡ)和非序列依赖性 ＰＣＲ扩增技术( ｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎꎬＳＩＡ)对表现出条斑症状的感病蜀葵进行了病原鉴定ꎬ结果发现侵染蜀葵的病原为锦葵脉明病毒(Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ
ｖｉｒｕｓꎬＭＶＣＶ)ꎬ这是锦葵脉明病毒在国内首次报道ꎮ 为进一步明确锦葵脉明病毒中国蜀葵分离物(ＭＶＣＶ￣ＡＲ)的来源及进
化关系ꎬ克隆获得其外壳蛋白(ｃｏａｔ ｐｒｏｔｅｉｎꎬｃｐ)基因(ＧｅｎＢａｎｋ登录号为 ＫＸ６１９６４９)ꎮ 通过与其他 ＭＶＣＶ分离物的核苷酸
及氨基酸序列比对分析可知ꎬＭＶＣＶ￣ＡＲ与 Ｍｅｘｉｃｏ的 ｔｏｍａｔｏ分离物(ＦＪ５６１２９３)的核苷酸同源性最高为 ９０.５％ꎻ与来自 Ｉｔａ￣
ｌｙ的 ＤＳ￣Ｂａ￣０１分离物(ＦＭ２１２９７２)的氨基酸同源性最高为 ９８.３％ꎮ 系统进化分析表明ꎬＭＶＣＶ￣ＡＲ 与 ＤＳ￣Ｂａ￣０１ 分离物聚
为一簇ꎬ形成独立的分支ꎮ
关键词:蜀葵ꎻ 锦葵脉明病毒ꎻ 病原鉴定
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｐ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ Ａｌｔｈａｅａ ｒｏｓｅａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ
Ｃｈｉｎａ　 ＹＡＮＧ Ｆｅｎｇꎬ ＮＩＵ Ｅｒ￣ｂｏꎬ ＷＡＮＧ Ｄｅ￣ｆｕꎬ ＮＩＵ Ｙａｎ￣ｂｉｎｇ　 (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｔａｉｇｕ ０３０８０１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｖｉｒｕｓｅｓ ｔｈａｔ ｍａｙ ｃａｕｓｅ Ａｌｔｈａｅａ ｒｏｓｅａ ｓｔｒｅａｋ ｄｉｓｅａｓｅꎬ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｄｓＲＮＡ
ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄꎬ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ (ＳＩＡ) . Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ
ｖｉｒｕｓ (ＭＶＣＶ) ｗａｓ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｃａｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｐｌａｎｔ. Ｔｈｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｍａｌｖａ
ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｉｎ Ｃｈｉｎａ. Ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｔｈｉｓ ｉｓｏｌａｔｅꎬ ｔｈｅ ｃｐ ｇｅｎｅ ｏｆ ＭＶＣＶ￣ＡＲ
ｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ: ＫＸ６１９６４９) . Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＶＣＶ￣ＡＲ
ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ＭＶＣＶ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＭＶＣＶ￣ＡＲ ｓｈａｒｅｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ ９０.５％ ｗｉｔｈ ｔｏｍａｔｏ ｉｓｏｌａｔｅｓ
(ＦＪ５６１２９３) ｆｒｏｍ Ｍｅｘｉｃｏ ａｔ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｌｅｖｅｌꎬ ａｎｄ ９８.３％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ＤＳ￣Ｂａ￣０１ ｉｓｏｌａｔｅ (ＦＭ２１２９７２) ｆｒｏｍ
Ｉｔａｌｙ ａｔ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｌｅｖｅｌ. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ＭＶＣＶ￣ＡＲ ａｎｄ ＤＳ￣Ｂａ￣０１ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｔｏｇｅｔｈｅｒ
ａｎｄ ｆｏｒｍｅｄ ａｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｒａｎｃｈ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ａｌｔｈａｅａ ｒｏｓｅａꎻ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓꎻ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
中图分类号: Ｓ４３２. ４１　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　
　 　 蜀葵为锦葵科蜀葵属二年生草本植物ꎬ具有观
赏、药用、食用等诸多价值ꎬ在全国各地均有栽培ꎮ
蜀葵的花朵大、花期长ꎬ花色有红色、白色和粉色ꎬ
是园艺布局中常见的观赏花卉ꎮ 蜀葵的根、花、种
子中富含黄酮[１]、多糖[２ꎬ ３]等成分ꎬ具有抗菌、抗氧
化[４]、抗肿瘤[５]、降血糖[６]的作用ꎮ 随着蜀葵的大
规模种植ꎬ其病毒病的危害也越发严重ꎬ主要包括
小西葫芦黄花叶病毒 ( Ｚｕｃｃｈｉｎｉ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ
ｖｉｒｕｓꎬＺＹＭＶ) [７]、蜀葵叶皱病毒 (Ｈｏｌｌｙｈｏｃｋ ｌｅａｆ
ｃｒｕｍｐｌｅ ｖｉｒｕｓꎬ ＨＬＣｒＶ ) [８]、蜀葵黄脉花叶病毒
( Ｈｏｌｌｙｈｏｃｋ ｙｅｌｌｏｗ ｖｅｉｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎬ
ＨｏＹＶＭＶ) [９]、锦葵脉明病毒(Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ
网络出版时间：2016-09-28 13:11:01
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.2184.S.20160928.1311.001.html
　
植物病理学报 ４７卷
ｖｉｒｕｓꎬＭＶＣＶ) [１０]等ꎮ 其中ꎬＭＶＣＶ 作为马铃薯 Ｙ
病毒属中一员[１１]ꎬ能引起锦葵叶片斑驳、明脉等症
状[１２]ꎮ 朝天大槿、圆叶锦葵[１３]、冬葵[１４]等其他锦
葵科植物中也检测出 ＭＶＣＶꎮ Ｐａｂｌｏ 等[１５]于 ２００９
年利用 ＰＶＹ属病毒的通用引物扩增获得了大小为
１ ８３０ ｎｔ的 ＭＶＣＶ基因组片段ꎬ包含一个 １ ５４２ ｎｔ
的 ＯＲＦ 和 ２８８ ｎｔ 的 ３′ＵＴＲꎬ编码产生分子量约
３５ ｋＤａ的病毒外壳蛋白ꎮ ２０１５ 年ꎬＰａｒｒｅｌｌａ 等[１６]也
利用分子技术从意大利锦葵分离物中扩增获得约
１ ８００ ｎｔ的ＭＶＣＶ基因组 ３′端片段ꎬ由内含体复制
酶(Ｎｕｃｌｅａｒ Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂꎬｎｉｂ)基因ꎬｃｐ 基因
和 ３′ＵＴＲ组成ꎮ
２０１５年笔者在山西农业大学花圃中发现感病
蜀葵ꎬ叶片表面呈现斑驳黄化等症状ꎬ发病率高达
８０％ꎮ 经分子生物学检测ꎬ发现蜀葵病株受到
ＭＶＣＶ的侵染ꎮ 目前ꎬ我国尚未有 ＭＶＣＶ 的相关
报道ꎮ 本研究首次在我国蜀葵中克隆获得 ＭＶＣＶ
的 ｃｐ基因ꎬ并分析了不同分离物间 ｃｐ 基因的核酸
及编码氨基酸序列的同源性及系统进化关系ꎬ可为
研究 ＭＶＣＶ 在我国的传播及遗传变异提供理论
依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 材料
　 　 病样叶片采自山西农业大学花圃ꎬ具有斑驳黄
化等症状ꎬ同时采集无病植株的叶片作为健康对照
(图 １)ꎬ所有样品均保存于￣８０℃冰箱中备用ꎮ
１.２　 方法
１.２.１ 　 植物病原 ｄｓＲＮＡ 的提取 　 参照 Ｋｒａｊａｃｉ ｃ
等[１７]和 Ｔｚａｎｅｔａｋｉｓ等[１８]的方法并加以修改进行植
Ｆｉｇ. １ 　 Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ Ａｌｔｈａｅａ ｒｏｓｅａ ｉｎｆｅｃｔｅｄ
ｂｙ ｖｉｒｕｓｅｓ
Ａ: Ｈｅａｌｔｈｙ ｐｌａｎｔ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ Ｂ: Ｄｉｓｅａｓｅｄ ｐｌａｎｔ.
物病原 ｄｓＲＮＡ的提取ꎬ并对提取的 ｄｓＲＮＡ进行电
泳检测ꎮ
１.２.２　 非序列依赖性 ＰＣＲ 和 ＲＴ￣ＰＣＲ 检测 　 以
ｄｓＲＮＡ为模板ꎬ利用随机引物 Ｍ４Ｔ 反转录得到
ｃＤＮＡꎬ再用随机引物 Ｍ４ 进行 ＳＩＡ 检测ꎬＰＣＲ 反
应体系和程序参照 Ｎｉｕ 等[１９]的方法进行ꎮ 利用琼
脂糖凝胶电泳检测与测序结果明确侵染蜀葵的病
毒病原后ꎬ再根据病毒 ｃｐ 基因设计特异引物进行
ＰＣＲ扩增ꎮ 每次 ＰＣＲ时都要以蜀葵健康叶片为阴
性对照ꎬ所用引物序列见表 １ꎮ
１.２.３　 ＰＣＲ产物克隆及序列分析　 将扩增得到的
目的片段进行纯化回收ꎬ连接 ｐＵＣｍ￣Ｔ 载体ꎬ并转
化至大肠杆菌 ＤＨ５α 中ꎬ阳性克隆通过菌液 ＰＣＲ
和酶切鉴定后ꎬ随机挑选 ３个目的克隆送至上海生
工公司进行测序ꎮ 对测序结果进行 Ｂｌａｓｔ 比对ꎬ利
用 ＤＮＡＭＡＮ 软件对获得的序列与已报道的
ＭＶＣＶ 分离物的序列进行核苷酸、氨基酸同源性
分析ꎬ运用 ＭＥＧＡ ７ 软件构建氨基酸序列的系统
进化树ꎮ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ＳＩＡ ａｎｄ ＲＴ￣ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
　 　 　 　 Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ(５′￣３′)
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｐｒｉｍｅｒｓ Ｍ４Ｔ ＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ(Ｔ) １６
Ｍ４ ＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ
Ｍ１３￣４７ ＣＧＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ
ＲＶ￣Ｍ ＧＡＧＣＧＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＴＣＡＣＡＣＡＧＧ
Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ＭＶＣＶ￣ｃｐ￣Ｆ ＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＡＴＡＣＡＴＡＧＣＴ
ＭＶＣＶ￣ｃｐ￣Ｒ ＧＴＡＣＧＧＧＣＡＡＡＧＴＡＡＡＣＧＣＡ
２
　
　 　 　 杨 锋ꎬ等:锦葵脉明病毒中国蜀葵分离物 ｃｐ基因序列分析
２　 结果与分析
２.１　 ＳＩＡ检测
　 　 以反转录得到的 ｃＤＮＡ 为模板ꎬＭ４ 为引物ꎬ
从病样中均扩增得到长度为 １ １０７ ｂｐ的片段ꎬ而健
康样品中未扩增出任何片段(图 ２)ꎮ 经序列比对
后ꎬ发现此片段与 ＭＶＣＶ 其他分离物的核苷酸同
源性高于 ８０％ꎬ推断感病蜀葵被 ＭＶＣＶ侵染ꎮ
Ｆｉｇ. ２　 Ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ＳＩＡ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
Ｍ: ＤＬ ２０００ＴＭ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎻ Ｌａｎｅ１￣３: Ｄｉｓｅａｓｅｄ
ｐｌａｎｔｓꎻ ＣＫ: Ｈｅａｌｔｈｙ ｐｌａｎｔ.
２.２　 ＭＶＣＶ￣ｃｐ序列扩增
　 　 为进一步确认蜀葵所感染的病毒病原是
ＭＶＣＶꎬ以提取的 ｄｓＲＮＡ为模板ꎬ利用 ＧｅｎＢａｎｋ中
登录的 ＭＶＣＶ￣ｃｐ 保守序列所设计的特异性引物
进行克隆 ꎬ得到大小约１１３０ ｂｐ的片段 (图３ ) ꎬ
Ｆｉｇ. ３ 　 Ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ＲＴ￣ＰＣＲ ｐｒｏｄ￣
ｕｃｔｓ ｏｆ ＭＶＣＶ￣ｃｐ
Ｍ: ＤＬ ２０００ＴＭ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎻ Ｌａｎｅ１￣４: Ｄｉｓｅａｓｅｄ
ｐｌａｎｔｓꎻ ＣＫ: Ｈｅａｌｔｈｙ ｐｌａｎｔｓ.
所有健康样品中均未扩增出相应片段ꎮ 经序列比
对分析ꎬ发现该序列与多个 ＭＶＣＶ 分离物同源性
高于 ９５％ꎬ因此确定侵染蜀葵的病毒病为 ＭＶＣＶꎬ
并将该分离物命名为 ＭＶＣＶ￣ＡＲꎮ
２.３　 ＭＶＣＶ￣ＡＲ序列同源性分析及系统进化分析
　 　 将ＭＶＣＶ￣ＡＲ的 ｃｐ基因核苷酸序列及推导的
氨基酸序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中登录的其他 １０ 个
ＭＶＣＶ分离物进行同源性和相似性比较分析(表
２)ꎮ 结果表明ꎬ本分离物与其他分离物之间的核
苷酸序列同源性在 ８７. ６％ ~ ９０. ５％之间ꎬ其中同
Ｍｅｘｉｃｏ的 ｔｏｍａｔｏ 分离物(ＦＪ５６１２９３)核苷酸同源
性最高为 ９０.５％ꎻ氨基酸序列同源性数据显示ꎬ本
分离 物 与 来 自 Ｉｔａｌｙ 的 ＤＳ￣Ｂａ￣０１ 分 离 物
(ＦＭ２１２９７２)的同源性最高为 ９８.３％ꎮ
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＶＣＶ￣ＡＲ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ＭＶＣＶ ｉｓｏｌａｔｅｓ
Ｉｓｏｌａｔｅ
ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ
Ｈｏｓｔ Ｓｏｕｒｃｅ
Ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ / ％
Ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ / ％
０１ ＥＵ８８４４０５ Ｍａｌｖａ ｓｐ. Ｓｐａｉｎ ８９.７ ９７.０
０２ ＥＵ８８４４０６ Ｍａｌｖａ ｓｐ. Ｓｐａｉｎ ８９.８ ９６.６
０３ ＥＵ８８４４０７ Ｍａｌｖａ ｓｐ. Ｓｐａｉｎ ８９.２ ９７.０
０４ ＥＵ８８４４０８ Ｍａｌｖａ ｓｐ. Ｓｐａｉｎ ８９.３ ９７.５
０５ ＥＵ８８４４０９ Ｍａｌｖａ ｓｐ. Ｓｐａｉｎ ８９.５ ９７.０
０６ ＥＵ８８４４１０ Ｍａｌｖａ ｓｐ. Ｓｐａｉｎ ８９.８ ９７.５
ＮＡＫＴ￣ＮＬ ＦＪ５３９０８４ Ａｎｉｓｏｄｏｎｔｅａ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ ８８.１ ９７.５
Ｎａｐｏｌｉ ＬＮ６５１１９１ Ｍａｌｖａｓｙｌｖｅｓｒｔｉｓ Ｉｔａｌｙ ８７.６ ９７.９
ＤＳ￣Ｂａ￣０１ ＦＭ２１２９７２ Ｍａｌｖａｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ Ｉｔａｌｙ ８８.８ ９８.３
ｔｏｍａｔｏ ＦＪ５６１２９３ ｔｏｍａｔｏ Ｍｅｘｉｃｏ ９０.５ ９７.９
３
　
植物病理学报 ４７卷
Ｆｉｇ. ４　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＶＣＶ￣ＡＲ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ＭＶＣＶ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＣＰ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
为进一步分析本分离物的来源及进化关系ꎬ使用
ＭＥＧＡ７ 软件ꎬ以同属西瓜花叶病毒(Ｗａｔｅｒｍｅ￣ｌｏｎ
ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎬＷＭＶ)为外群ꎬ构建本分离物 ＣＰ 的
氨基酸序列与其他分离物的系统进化树(图 ４)ꎮ
从进化树上可以看出ꎬ本分离物与 ＤＳ￣Ｂａ￣０１ 分离
物归为一簇ꎬ亲缘关系最近ꎬ其他分离物之间的进
化关系也同 Ｐａｒｒｅｌｌａ等[１６]的研究结果相一致ꎮ
３　 讨论
锦葵脉明病毒虽具有马铃薯 Ｙ 病毒属的典型
特征———弯曲线状病毒粒子、蚜传方式、诱导寄主
细胞质中内含体产生[２０ꎬ２１]ꎬ但相对于同属的其他
病毒ꎬ其寄主范围较窄ꎬ自然情况下主要侵染锦葵
科植物ꎮ 目前国内锦葵科植物病毒病主要为双生
病毒ꎬ如木尔坦棉花曲叶病毒 (Ｃｏｔｔｏｎ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ
Ｍｕｌｔａｎ ｖｉｒｕｓꎬＣＬＣｕＭＶ) [２２ꎬ ２３]、云南赛葵黄脉病毒
( Ｍａｌｖａｓｔｒｕｍ ｙｅｌｌｏｗ ｖｅｉｎ Ｙｕｎｎａｎ ｖｉｒｕｓꎬ
ＭＹＶＹＮＶ) [２４]ꎬ尚未见 ＭＶＣＶ 的病害报道ꎮ 本研
究利用 ＳＩＡ 技术首次在中国的蜀葵中检测发现
ＭＶＣＶꎬ并扩增获得其 ｃｐ 基因序列ꎮ 经序列比对
发现ꎬ本分离物与已报道分离物的 ｃｐ 基因核苷酸
同源性在 ８８.１％ ~ ９０.５％之间ꎬ其中与 Ｍｅｘｉｃｏ 的
ｔｏｍａｔｏ分离物(ＦＪ５６１２９３)的同源性最高为 ９０.５％ꎻ
而编码氨基酸的同源性在 ９６.６％ ~ ９８.３％之间ꎬ同
来自 Ｉｔａｌｙ的 ＤＳ￣Ｂａ￣０１分离物(ＦＭ２１２９７２)的同源
性最高为 ９８.３％ꎮ 系统进化分析表明ꎬＭＶＣＶ￣ＡＲ
与 ＤＳ￣Ｂａ￣０１分离物亲缘性最近ꎮ
除本分离物之外ꎬ蜀葵中另一个 ＭＶＣＶ 分离
物(ＧＱ８５６５４４)是由德国学者首次报道[１０]ꎮ ２００９
年ꎬＷ. Ｍｅｎｚｅｌ等发现呈脉明、脉黄症状的蜀葵ꎬ并
通过电镜和分子手段证明了感病植株是由 ＭＶＣＶ
侵染所致ꎮ 获得分离物的基因片段大小为 １ ０１１
ｂｐꎬ编码产生内含体复制酶(ＮＩｂ)和部分外壳蛋白
(ＣＰ)ꎮ 经 Ｂｌａｓｔ比对发现ꎬ其基因序列与本研究获
得分离物的序列存在约 ４８０ ｂｐ 的保守区域ꎬ相似
性可达 ９８％ꎬ而且此区域位于 ＣＰ 编码序列的上
游ꎮ 但由于序列长度的限制ꎬ很难确定二者的来源
是否一致ꎮ 目前 ＧｅｎＢａｎｋ 中仅有 ＭＶＣＶ 的 ｃｐ 及
ｎｉｂ基因序列登录ꎬ其基因组全长序列仍无报道ꎮ
若探明 ＭＶＣＶ的致病机理、变异及防控ꎬ还需进一
步开展研究工作ꎮ
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[７] 　 Ｃｈｏｉ Ｓ ＫꎬＹｏｏｎ Ｊ Ｙꎬ Ｓｏｈｎ Ｓ Ｈ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍ￣
ｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｚｕｃｃｈｉｎｉ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ
ｓｔｒａｉｎ ａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｈｏｌｌｙｈｏｃｋ [Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ￣
ｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２００７ꎬ ２３(４): ２４５￣２５０.
[８] 　 Ｉｄｒｉｓ Ａ Ｍꎬ Ｈｕｓｓｅｉｎ Ｍ Ｈꎬ Ａｂｄｅｌ￣ＳａｌａｍＡ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｆｏｒ ｏｋｒａ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ￣ ａｎｄ ｈｏｌｌｙ￣
ｈｏｃｋ ｌｅａｆ ｃｒｕｍｐｌｅ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｂｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｆｉｒｓｔ
ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ＤＮＡｓ [ Ｊ] . Ａｒａｂ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ ２００２ꎬ ５: ６７￣８２.
[９] 　 Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ Ａꎬ Ｋｕｍａｒ Ｓꎬ Ｒａｊ Ｓ Ｋꎬｅｔ ａｌ. Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｈｏｌｌｙｈｏｃｋ ｙｅｌｌｏｗ ｖｅｉｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ
Ｌｕｄｗｉｇｉａ ｌｅａｆ ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎ ｂｅｔａｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｗｉｔｈ ｙｅｌｌｏｗ ｖｅｉｎ ｍｏ￣
ｓａｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｈｏｌｌｙｈｏｃｋ (Ａｌｃｅａ ｒｏｓｅａ) ｉｎ Ｉｎｄｉａ [Ｊ]. Ａｒ￣
ｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙꎬ ２０１４ꎬ １５９(１０): ２７１１￣２７１５.
[１０] Ｍｅｎｚｅｌ Ｗꎬ Ｗｉｎｔｅｒ Ｓꎬ Ｒｉｃｈｅｒｔ￣Ｐöｇｇｅｌｅｒ Ｋ Ｒ. Ｆｉｒｓｔ ｒｅ￣
ｐｏｒｔ ｏｆ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｉｎ
ｈｏｌｌｙｈｏｃｋ ｉｎ Ｇｅｒｍａｎｙ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ ２０１０ꎬ ９４
(２): ２７６￣２７６.
[１１] Ｈｏｎｇ Ｊꎬ Ｌｉ Ｄ Ｂꎬ Ｚｈｏｕ Ｘ Ｐ. Ｐｌａｎｔ ｖｉｒｕｓ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｍａｐ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｍ] . Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ (北
京: 科学出版社)ꎬ ２００１.１００￣１０６.
[１２] Ｈｅｉｎ Ａ. Ｂｅｉｔｒäｇｅ ｚｕｒ Ｋｅｎｎｔｎｉｓ ｄｅｒ Ｖｉｒｕｓｋｒａｎｋｈｅｉｔｅｎ ａｎ
Ｕｎｋｒäｕｔｅｒｎ. Ｉ. Ｄａｓ Ｍａｌｖａ￣ｖｉｒｕｓ [ Ｊ ] . Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏ￣
ｇｉｓｃｈｅ Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔꎬ １９５６ꎬ ２８: ２０５￣２３４.
[１３] Ｃｏｓｔａ Ａ Ｓꎬ Ｄｕｆｆｕｓ Ｊ Ｅ. Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｍａｌｖａ ｙｅｌｌｏｗ
ｖｅｉｎ ｍｏｓａｉｃ ｉｎ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒꎬ
１９５７ꎬ ４１: １００６￣１００８.
[１４] Ｍａｒｃｏ Ｓ. Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ａｌｆａｌｆａ ｍｏｓａｉｃ￣ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｍａｌｖａ
ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｏｎ ｗｅｅｄ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ Ｍａｌｖａｃｅａｅ ｉｎ
Ｉｓｒａｅｌ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒꎬ １９７５ꎬ ５９: ３４￣３６.
[１５] Ｈｏｒｖáｔｈ Ｊꎬ Ｍａｍｕｌａ Ｄꎬ Ｂｅｓａｄａ Ｗ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｏｍｅ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｈｕｎ￣
ｇａｒｙ ａｎｄ Ｙｕｇｏｓｌａｖｉａ [ Ｊ ] . Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｃｈｅ
Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔꎬ １９７９ꎬ ９５: ５１￣５８.
[１６] Ｐａｒｒｅｌｌａ Ｇꎬ Ｎａｐｐｏ Ａ Ｇꎬ Ｄｅｌｅｃｏｌｌｅ Ｂ. Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ Ｉｔａｌｉａｎ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｔｏｄａｙꎬ ２０１５ꎬ ２(２): ６９￣７３.
[１７] Ｋｒａｊａｃｉｃ Ｍꎬ Ｉｖａｎｃｉｃ￣Ｊｅｌｅｃｋｉ Ｊꎬ Ｆｏｒｃｉｃ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｕｒｉｆｉ￣
ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｖｉｒａｌ ａｎｄ ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｄｏｕｂｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡｓ
ｏｎ ＤＥＡＥ ｍｏｎｏｌｉｔｈｓ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ａꎬ ２００７ꎬ １１４４(１): １１１￣１１９.
[１８] Ｔｚａｎｅｔａｋｉｓ Ｉ Ｅꎬ Ｍａｒｔｉｎ Ｒ Ｒ. Ａ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｕｂｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔｓ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ ２００８ꎬ １４９(１): １６７￣１７０.
[１９] Ｎｉｕ Ｙ Ｂꎬ Ｙａｏ Ｍꎬ Ｗａｎｇ Ｄ Ｆꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｖｉｒｕｓ ｏｎ Ａｉｌａｎｔｈｕｓ ａｌｔｉｓｓｉｍａ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｃａ (植物病理学
报)ꎬ ２０１１ꎬ ４: ４３７￣４４０.
[２０] Ｈｅｎｒｉｑｕｅｓ Ｍ Ｉ Ｃꎬ Ｈｅｎｒｉｑｕｅｓ Ｆ Ｓ. Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌｖａ
ｖｅｉｎ￣ｃｌｅａｒｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｒｈａｂｄｏｖｉｒｕｓｌｉｋｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗｉｔｈ
ｍｏｔｔｌｅ ａｎｄ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒｉｎｇ ｏｆ ｍａｌｖａ ｐｌａｎｔｓ [Ｊ] . Ｃａｎａｄｉａｎ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙꎬ １９８６ꎬ ６４: ８５￣８９.
[２１] Ｌｕｎｅｌｌｏ Ｐꎬ Ｔｏｕｒｉñｏ Ａꎬ Ｎúñｅｚ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｏｍｉｃ ｈｅｔｅｒｏ￣
ｇｅｎｅｉｔｙ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｍａｌｖａ ｖｅｉｎ ｃｌｅａｒ￣
ｉｎｇ ｖｉｒｕｓ [Ｊ]. Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００９ꎬ １４０(１￣２): ９１￣９７.
[２２] Ｌｉｎ ＬꎬＣａｉ Ｊ Ｈꎬ Ｌｕｏ Ｅ Ｂꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｒａｎｇｅ ｏｆ ａ ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ Ｈｉｂｉｓｃｕｓ
ｉｎ Ｎａｎｎｉｎｇ Ｃｉｔｙ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ
(植物保护)ꎬ ２０１１ꎬ ３７(４): ４４￣４７.
[２３] Ｄｕ Ｚ Ｇꎬ Ｔａｎｇ Ｙ Ｆꎬ Ｈｅ Ｚ Ｆꎬ ｅｔ ａｌ. Ｈｉｇｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ｈｏ￣
ｍｏｇｅｎｅｉｔｙ ｐｏｉｎｔｓ ｔｏ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｅｖｅｎｔ ｒｅｓｐｏｎ￣
ｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｔｔｏｎ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ Ｍｕｌｔａｎ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ
ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｂｅｔａｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｔｏ Ｃｈｉｎａ [ Ｊ] . Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２０１５ꎬ １２: １６３.
[２４] Ｊｉａｎｇ Ｔꎬ Ｌｉｕ ＰꎬＬｉａｏ Ｂ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍａｌｖａｓｔｒｕｍ ｙｅｌｌｏｗ
ｖｅｉｎ Ｙｕｎｎａｎ ｖｉｒｕｓ ｉｓ ａ ｍｏｎｏｐａｒｔｉｔｅ ｂｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ [ Ｊ] .
Ａｃｔａ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａꎬ ２０１０ꎬ ５４(１): ２１￣２６.
责任编辑:于金枝
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