全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2014年第6期
烷 基 糖 苷（Alkyl polyglycoside，APG） 是 生 物
降解迅速且彻底，无毒低刺激的“绿色”表面活性剂。
它不仅具有表面张力低，泡沫丰富而稳定，去污性
优良，而且配伍性能极佳，可广泛于洗涤剂、化妆
品、农药、纺织等行业，是下一代新型表面活性剂
收稿日期 ： 2013-12-09
基金项目 ：国家自然科学基金项目（31171633），广东省工业科技攻关项目（2010B011000004）
作者简介 ：胡霞艳，女，硕士，研究方向 ：酶与酶应用 ；E-mail ：lucksnail@163.com
通讯作者 ：郑穗平，男，博士，教授，研究方向 ：酶工程 ；E-mail ：spzheng@scut.edu.cn
毕赤酵母表面展示棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶催化合成
APG 的工艺条件优化
胡霞艳  刘端玉  郑穗平
（华南理工大学生物科学与工程学院，广州 510006）
摘 要 ： 使用毕赤酵母细胞表面展示棘孢曲霉的 β-葡萄糖苷酶作为全细胞催化剂，以葡萄糖为底物，在水-醇双相体系中逆
水解合成 C6-C10 烷基糖苷。讨论了含水量、葡萄糖添加量、全细胞催化剂添加量、乙酸-乙酸钠缓冲液 pH 值和温度等主要因素
对反应的影响，并与商品酶苦杏仁 β-葡萄糖苷酶、Novozym188 进行比较。结果表明，Novozym188 不适合逆水解合成 APG，苦杏仁 β-
葡萄糖苷酶反应所需时间短，但最终转化率不如全细胞催化剂。在 5 mL 反应体系中，合成 HG 的最优条件 ：葡萄糖 0.1 g，全细胞
催化剂 0.05 g，10% pH 3.0 buffer ；合成 OG 的最优条件 ：葡萄糖 0.2 g，全细胞催化剂 0.05 g，15% pH3.0 buffer ；合成 DG 的最优条
件 ：葡萄糖 0.2 g，全细胞催化剂 0.2 g，20% pH 3.0 buffer ；放置 55℃ 200 r/min 恒温振荡器中，反应时间为 72 h，HG 和 DG 的最大
产率分别为 11.69% 和 3.58%，而 OG 的产率则在 96 h 到达最大值 6.34%。
关键词 ： 细胞表面展示 β-葡萄糖苷酶 全细胞催化剂 烷基糖苷
Optimization of the Synthesis of Alkyl Glucoside Catalyzed by
Aspergillus aculeatus β-glucosidase-displaying Pichia pastoris Whole-cells
Hu Xiayan Liu Duanyu Zheng Suiping
（School of Bioscience and Bioengineering，South China University of Technology，Guangzhou 510006）
Abstract:  Aspergillus aculeatus β-glucosidase displayed Pichia pastoris cell surface was used as whole-cell biocatalyst, glucose as
substrate, catalyzed synthesis alkyl glucosides of C6-C10 with reverse hydrolysis in water-alcohol two-phase system. The effects of various
reaction factors, including water content, whole-cell biocatalyst dose, glucose concentration, pH and temperature were optimized. The catalytic
effect of whole-cell biocatalyst were compared with commercial enzyme almond β-glucosidase and Novozym188 . The results showed that
Novozym188 was not suitable for synthesis of APG, almond β-glucosidase need shorter time than whole-cell biocatalyst, but the final conversion
of whole-cell biocatalyst was higher. In 5 mL total reaction volume, the optimal reaction conditions of HG ：0.1 g glucose, 0.05 g whole-cells
biocatalyst, 10% pH3.0 buffer ；the optimal reaction conditions of OG ：0.2 g glucose, 0.05 g whole-cells biocatalyst, 15% pH3.0 buffer ；the
optimal reaction conditions of DG ：0.2 g glucose, 0.2 g whole-cells biocatalyst, 20% pH3.0 buffer, temperature 55℃, 200 r/min. After 72 h the
maximum HG and DG yield could be 11.69% and 3.58%. The highest yield of OG was 6.34% after 96 h.
Key words:  Cell surface displaying β-glucosidase Whole-cell biocatalyst Alkyl glucosides
最有希望的品种之一［1］。化学合成法是合成 APG 的
传统方法，但是由于化学法需要选择性保护基团，
激活和耦合等步骤，不仅耗时长，还不可避免地存
在副反应。过去的十多年中利用酶法合成糖苷和低
聚糖成为研究热点，因为酶法合成 APG 具有很多化
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第6期206
学法不可比拟的优点，例如，不需要保护-去保护过
程，具有较好的区域选择性和立体专一性，可以避
免异头物的产，反应条件温和产物杂质少且易于纯
化。在水-醇双相体系中，酶促逆水解反应合成糖苷
只需一步，因此可以大大节省后续的产物提取成本，
因而受到人们的广泛关注［2，3］。
棘孢曲霉生产的 β-葡萄糖苷酶，既可以水解可
溶性纤维寡糖，也可以水解不溶性纤维寡糖［4］。一
直以来相关研究报道都是围绕纤维素水解，用于合
成 APG 的研究仍处于探索阶段。近些年，酵母表面
展示技术得到了迅速的发展［5］，其中巴斯德毕赤酵
母（P.pastoris）作为一种新型的真核表达系统，具
有表达量高分泌能力强，生长快和操作简便等特点，
还具有真核细胞翻译后的加工和修饰功能，适合表
达需翻译后修饰的外源蛋白。它能将外源 A-BGL 以
融合蛋白的形式展示在细胞的表面，保持 A-BGL 原
有的生物活性和相对独立的空间构象，因此展示有
A-BGL 的酵母细胞可以作为全细胞催化剂表现出耐
温、耐有机溶剂和热稳定性好等优良特性。韦斌如
等［6］在毕赤酵母细胞表面成功展示了 A-BGL，并初
步用于催化合成 APG。
本研究利用棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶重组毕赤酵
母菌株 GS115/pKFS-ABGL 作为全细胞催化剂，在水-
醇双相体系中逆水解合成 APG，并探讨含水量、葡
萄糖添加量、全细胞催化剂添加量、乙酸-乙酸钠缓
冲液 pH 值和温度等主要因素对反应的影响，并根
据对影响大小确定主次影响因素，为后续工艺优化
试验奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
棘 孢 曲 霉 β-葡 萄 糖 苷 酶 重 组 毕 赤 酵 母 菌
株 GS115/pKFS-ABGL 由 本 实 验 室 构 建 和 保 存，
Novozym 188 购于诺维信，游离苦杏仁 β-glucosidase
购自 Sigma。对硝基苯基 β-D-葡萄糖苷（pNPG）、己
基 β-D-葡萄糖苷（HG）、辛基 β-D-葡萄糖苷（OG）、
癸基 β-D-葡萄糖苷（DG）、购自 Sigma 公司 ；其它
试剂均为市售试剂。
1.2 方法
1.2.1 毕赤酵母表面展示棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶催
化剂的制备 棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶重组毕赤酵母
菌株 GS115/pKFS-ABGL 培养于 YPD 琼脂固体平板
上，培养 24 h 后接种至 YPD 液体培养基中，30℃，
250 r/min 培养 24 h，以 1% 的接种量转接到新鲜
BMGY 培 养 基 中，30℃，250 r/min 24 h， 然 后 在
4℃、8 000 r/min 离心 10 min 得到菌体，转入 BMMY
培养基中，30℃，250 r/min 培养 5 d，每隔 24 h 加
入 0.5%（V/V）甲醇诱导。然后收集发酵菌体，离
心，用双蒸水洗两次，最后用少量双蒸水重悬，通
过真空冷冻干燥得到全细胞催化剂干粉。培养基均
按 Invitrogen 公司毕赤酵母表达操作手册配方配制。
1.2.2 GS115/pKFS-ABGL 冻干酶粉逆水解合成 APG
在水-有机构成的 5 mL 体系中以葡萄糖为底物逆水
解合成 APG，分别探讨了含水量、葡萄糖添加量、
全细胞催化剂添加量、乙酸-乙酸钠缓冲液 pH 值和
温度等主要因素对反应的影响，并优化反应条件。
最后在相同的反应条件下，比较实验室自制的全细
胞催化剂 GS115/pKFS-ABGL 冻干酶粉和商品酶苦杏
仁 β-葡萄糖苷酶、Novozym188 合成 HG、OG 和 DG
的催化效率。
1.2.3 GS115/pKFS-ABGL 冻干酶粉合成 APG 的操作
稳定性 全细胞催化剂的预处理 ：取全细胞催化剂
于丙酮中，置于恒温摇床中 55℃，200 r/min，放置
24 h。离心除去有机溶剂丙酮，收集酶粉，于 30℃
恒温箱中放置 24 h。然后取全细胞催化剂用于催化
合成 HG、OG 和 DG。反应 72 h 后的反应液，离心
去掉上清，酶粉用丙酮洗两次，收集得到全细胞催
化剂，置于 30℃恒温箱中放置 24 h，重复用于催化
合成 HG、OG 和 DG，如此重复使用 5 次。
1.2.4 HPLC-ELSD 定 量 分 析 APG APG 的 检 测 采
用 Waters 2695 型高效液相色谱仪。色谱条件 ：色谱
柱 Zorbax SB-C18（5 μm，250 mm×4.6 mm i.d），流
速 1 mL/min，柱温 30℃，2424 型 ELSD 检测器，进
样量 10 μL，漂移管温度 55℃，氮气流速 30 psi。以
APG 的标准品，制作校正曲线，并根据保留时间定
性。HG 和 OG 检测均用流动相甲醇∶水 =80∶20，
葡 萄 糖、HG 和 OG 的 保 留 时 间 分 别 为 3.46 min，
4.80 min，6.08 min。DG 检测用流动相甲醇∶乙酸乙
酯∶水 =48∶39∶13，葡萄糖和 DG 的保留时间分别
为 3.04 min 和 3.98 min。
2014年第6期 207胡霞艳等 ：毕赤酵母表面展示棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶催化合成 APG 的工艺条件优化
APG 的产率 =Mg/Me ×100%
式中，Me ：反应体系中 APG 的质量，Mg ：反
应体系中葡萄糖的质量。
2 结果
2.1 含水量对全细胞催化剂合成APG的影响
考察了不同含水量下催化反应的效率，发现随
着底物脂肪醇碳链增加，所需要的水含量也逐渐增
加（图 1）。未添加缓冲液时，虽然细胞催化剂本身
含有一定量的结合水，处于微水环境中，反应 4 d
后得到的 APG 产率很低。说明该反应体系不适合全
细胞催化剂合成 APG。在催化合成 HG 时，含水量
为 10%，反应最终产物产率达到最大值 5.25%。在
催化合成 OG 和 DG 时，最适含水量分别为 15% 和
20%。
化较小。而当全细胞催化剂用量超过 0.1 g 时，HG
却有一定量的下降。原因可能是过多的酶粉会使传
质阻力增大［17］。而对于合成 DG 而言，在全细胞催
化剂添加量低于 0.075 g 时，几乎不能检测到 DG。
而在全细胞催化剂添加量由 0.075 g 增加到 0.2 g 时，
产率增加显著。此后体系中全细胞催化剂添加量继
续增加，催化剂很难维持均匀悬浮状态，存在传质
阻力，而且酶浓度过高也会导致产物的水解加剧。
所以在该反应中 0.2 g 是比较合适的全细胞催化剂添
加量。
0
0
1
2转
化
率
% 3
4
5
6
5 10 15 20 30 40
ਜ਼≤䟿%
HG OG DG
图 1 含水量对全细胞催化剂合成 APG 的影响
2.2 葡萄糖和全细胞催化剂添加量对全细胞催化
剂合成APG的影响
如图 2 所示，APG 的转化率随葡萄糖添加量的
变化有相同的趋势，先升后降。HG 最佳的添加葡萄
糖量为 0.1 g，继续增加葡萄糖量，转化率略会降低。
中长链的 OG 和 DG 的合成需要更多的底物作为驱
动力，最佳葡萄糖添加量比 HG 的高，添加 0.2-0.3g
葡萄糖，转化率相似，为了节约成本，均可取最优
葡萄糖添加量为 0.2 g。总体来说，因为 APG 含量并
没有随着葡萄糖添加量增加而发生变化，所以产率
会下降。
优化酶量对于减少反应时间以及过程中的成本
是非常重要的。从图 3 中可以看出，随着酶浓度的
增加，APG 的产率提高。当全细胞催化剂用量大于
0.05 g，再增加全细胞催化剂用量 HG 和 OG 产率变
0.05
0
1
2转
化
率
%
3
4
5
6
7
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
㪑㨴㌆␫࣐䟿g
HG OG DG
图 2 葡萄糖添加量对全细胞催化剂合成 APG 的影响
0.050.025 0.075
0
1
2转
化
率
%
3
4
5
6
7
0.1 0.15 0.2 0.3
ޘ㓶㜎ۜॆ␫࣐䟿g
HG OG DG
图 3 全细胞催化剂添加量对 APG 合成的影响
2.3 乙酸-乙酸钠缓冲液pH值对A-BGL合成APG的
影响
如 图 4 所 示， 反 应 体 系 的 pH 值 对 反 应 体 系
APG 产率影响较大，当乙酸-乙酸钠缓冲液 pH 值为
3 时，A-BGL 催化合成 APG 的产率最高。当以水杨
苷为底物时，A-BGL 的最适 pH 为 4.0-4.5。但从本
试验所得结果看，A-BGL 通过展示毕赤酵母表面在
其对酸度适应性比较强，可适应的 pH 值范围较广。
2.4 温度对A-BGL合成APG的影响
从图 5 中可以看出，温度对反应体系的 APG 产
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第6期208
率有较大的影响，随着温度的变化 APG 产率会有着
明显的变化规律 ；从 30℃到 50℃的温度区间内 APG
产率随着温度的增加而增大，50℃时 HG 产率达到
最大值 11.84%。但是随着反应温度到达 60℃时其产
物浓度和产率却降低了，可能是棘孢曲霉 β-葡萄糖
苷酶在高温下变性而失活，酶促反应速度下降。同
时温度对反应影响也依赖于介质成分，在合成 OG
和 DG 时，反应温度从 50℃上升到 55℃，其产率增
加趋势均相对较大，55℃为其最佳反应温度。
好分散在水中，混合均匀，传质阻力相对较小。所
以在催化合成 APG 时，6 h 时产率就到达最大值，
之后变化不大。相比之下，全细胞催化剂都所需的
反应时间要长一些，但最终的产率全细胞催化剂要
略高于商品化苦杏仁 β-葡萄糖苷酶。由此可以通过
提高展示系统蛋白表达量，进行毕赤酵母的高密度
发酵，提高单位干重细胞酶活，可以进一步提高其
催化合成 APG 的效率。
32 4
0
2
4
转
化
率
%
6
8
10
12
14
5 6
pH٬
HG OG DG
图 4 乙酸-乙酸钠缓冲液 pH 值对合成 APG 的影响
4030 50
转
化
率
%
55 60
৽ᓄ⑙ᓖć
0
2
4
6
8
10
12
14 HG OG DG
图 5 温度对 A-BGL 合成 APG 的影响
2.5 全细胞催化剂、游离苦杏仁β-葡萄糖苷酶和
Novozyme 188催化合成APG的比较
从图 6 中可以看出在等酶活的条件下，全细胞
催化剂与商品化苦杏仁 β-葡萄糖苷酶、Novozym188
在合成 APG 效率上比较。由于 Novozym188 属于纤
维素二糖酶，不适合于逆水解反应，催化合成 APG
效果较差，尤其是对于长链脂肪醇而言。由于苦杏
仁 β-葡萄糖苷酶是游离酶，全细胞催化剂比酶活小，
单位重量酵母细胞表面展示的棘孢曲霉 β-葡萄糖苷
酶蛋白较苦杏仁 β-葡萄糖苷酶要少。体系处于等酶
活的条件，加入酶量较少，杏仁 β-葡萄糖苷酶能较
200 40
0
1
2转
化
率
%
3
4
5
6
7
60 80 100 120 140
৽ᓄᰦ䰤h
ኅ⽪䞦
Nov188
ᵿӱ䞦
图 6 OG 合成的反应曲线
2.6 全细胞催化剂合成APG的操作稳定性
酶的操作稳定性是全细胞催化剂的重要特性之
一，它直接影响着连续化、自动化生产过程和生产
成本。如图 7，全细胞催化剂有较好的操作稳定性。
在反应 5 批次后，APG 的相对产率变化不大略有下
降，其中反应 2 批次均逐步增加。
21 3
0
20
40
转
化
率
%
60
80
100
120
4 5
HG OG DG
৽ᓄᰦ䰤h
图 7 全细胞催化剂合成 APG 的操作稳定性
3 讨论
反应体系中含水量对 APG 的逆水解合成有较大
的影响，Ito 等［7］也报道在酿酒酵母细胞表面展示
的 A-BGL 催化以 pNPG 为底物转糖苷合成 APG 时，
当含水量为 5% 时，几乎不能合成 HG，其最佳含水
2014年第6期 209胡霞艳等 ：毕赤酵母表面展示棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶催化合成 APG 的工艺条件优化
量为 20%。因为水不仅对维持酶的构象起着重要作
用，而且作为溶剂能溶解底物葡萄糖，但是过多的
水便会阻碍反应向生成 APG 的方向进行，导致 APG
产率下降，所以对反应平衡影响很大，APG 的最终
产率是由两个反应之间的比例决定的［8］。
理论上底物葡萄糖的提高应有利于反应向合
成方向的推动，从而提高 APG 的产物浓度，但事
实证明，增加葡萄糖浓度反而会使产物浓度略有下
降，产率显著下降［9］。APG 浓度降低主要是因为葡
萄糖的浓度过高会对 β-葡萄糖苷酶的活性起到抑制
作用。在已被研究的 β-葡萄糖苷酶中，绝大多数 β-
葡萄糖苷酶被葡萄糖强烈抑制［10-12］，而且在极低浓
度的葡萄糖就能抑制 β-葡萄糖苷酶活性［13］。通常葡
萄糖对 β-葡萄糖苷酶活力的抑制常数 Ki 为 0.2-100
mmol/L［14， 15］，也有极少数来自酵母和真菌的 β-葡萄
糖 苷 酶， 其 对 葡 萄 糖 的 抑 制 常 数 超 过 200
mmol/L［16， 17］。Vulfson 等［18］ 报道了在 1-己醇为 20
mL，添加的葡萄糖为 1 mmol（0.18 g）时产率最大。
温度是酶促反应又一个重要因素之一，因为温
度不仅影响底物的溶解度，也影响酶活。Ito 等报道
了棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶转糖苷催化 HG 时，50℃
的产率明显高于 30℃的。这是由于提高反应温度可
以提高底物葡萄糖的溶解度，降低脂肪醇介质黏度，
增加双相反应体系中各相的相容性，使合成反应容
易进行。本试验合成 APG 的最适温度为 55℃，这与
周亚军［19］报道的固定酶催化合成 OG 的反应中，温
度对葡萄糖转化率的影响相一致。
展示在毕赤酵母表面的 A-BGL 类似于固定化
酶，相比游离酶耐酸性更强，操作稳定性强，可回
收利用。本研究全细胞催化剂重复利用了 5 次，转
化率几乎不变，这与任昌琼［20］报道在有机溶剂中
用表面展示南极假丝酵母脂肪酶 B 合成果糖酯的操
作稳定性的结果相似。脂肪醇和乙酸-乙酸钠缓冲液
可能有助于酶表面形成一层结构水膜，对酶有一定
的保护作用，从而增加其热稳定性。由此可知全细
胞催化剂具有良好的水-醇双相体系稳定性和重复利
用性，为进一步扩大化生产奠定了良好的基础。
4 结论
本研究通过试验探讨了几种主要单因素对全细
胞催化剂 GS115/pKFS-ABGL 在水-醇双相体系中逆
水解催化合成 APG 产率的影响，并进行优化。合
成不同碳链的 APG 最适条件有所不一样，但总体变
化趋势相同。在 0-24 h 内，全细胞催化剂催化合成
APG 的合成速率较低，随着 APG 合成速率迅速增加，
72 h 后达到最大产率，其中 HG 和 DG 的产率分别
为 11.69% 和 3.58%，而 OG 产率在 96 h 才到达最大
值 6.34%。虽然苦杏仁 β-葡萄糖苷酶催化合成 APG
较好的转化率，但是成本较高。
采用毕赤酵母展示的棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶能
极大降低酶的应用成本，该酶具有与苦杏仁酶相当
甚至略高的转化率。此外，毕赤酵母展示的全细胞
催化剂 GS115/pKFS-ABGL 有较好的操作稳定性，在
反应 5 批次后，APG 的相对产率变化不大，可以为
酶工业化生产 APG 大大节省了生产成本，具备较好
的应用前景。
参 考 文 献
［1］ Putnik CF, Borys NF. Alkyl polyglycosides［J］. Soap Chem Spec,
1986, 62 ：34-37.
［2］ Milosavić NB, Prodanović RM, Jankov RM. A simple and efficient
one-step, regioselective, enzymatic glucosylation of arbutin by
α-glucosidase［J］. Tetrahedron Letters, 2007, 48（40）：7222-
7224.
［3］ Perugino G, Trincone A, Rossi M, et al. Oligosaccharide synthesis by
glycosynthases［J］. Trends in Biotechnology, 2004, 22（1）：31-
37.
［4］ 杜娟 , 庄蕾 , 季明杰 , 等 . 棘孢曲霉 SM-L22 β-葡萄糖苷酶的纯
化与性质［J］. 菌物系统 , 2002, 21（2）：239-245.
［5］ Kondo A, Ueda M. Yeast cell-surface display—applications of
molecular display［J］. Appl Microbiol Biotechnol, 2004, 64（1）：
28-40.
［6］ 韦斌如 , 刘端玉 , 郑穗平 , 等 . 棘孢曲霉 β-D-葡萄糖苷酶在毕
赤酵母中的表达及烷基糖苷的催化合成［J］. 高等学校化学学
报 , 2012, 33（7）：1498-1504.
［7］ Ito J, Ebe T, Shibasaki S, et al. Production of alkyl glucoside from
cellooligosaccharides using yeast strains displaying Aspergillus
aculeatus β-glucosidase 1［J］. J Mol Catal B：Enzym, 2007, 49（1）：
92-97.
［8］ Rather MY, Mishra S, Chand S. β-glucosidase catalyzed synthesis of
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第6期210
octyl-β-D-glucopyranoside using whole cells of Pichia etchellsii in
micro aqueous media［J］. J Biotechnol, 2010, 150（4）：490-496.
［9］ Ismail A, Soultani S, Ghoul M. Optimization of the enzymatic synth-
esis of butyl glucoside using response surface methodology［J］.
Biotechnol Prog, 1998, 14（6）：874-878.
［10］ Bothast RJ, Saha BC. Ethanol production from agricultural biomass
substrates［J］. Adv Appl Microbiol, 1997, 44 ：261-286.
［11］ Gueguen Y, Chemardin P, Arnaud A, et al. Purification and
characterization of an intracellular β-glucosidase from Botrytis
cinerea［J］. Enzyme Microb Technol, 1995, 17（10）：900-906.
［12］ Woodward J, Wiseman A. Fungal and other β-D-glucosidases—
their properties and applications［J］. Enzyme Microb Technol,
1982, 4（2）：73-79.
［13］ Saha BC, Bothast RJ. Production, purification, and characterization
of a highly glucose-tolerant novel β-glucosidase from Candida
peltata［J］. Appl Environ Microbiol, 1996, 62（9）：3165-3170.
［14］ Karnchanatat A, Petsom A, Sangvanich P, et al. Purification and
biochemical characterization of an extracellular β-glucosidase from
the wood—decaying fungus Daldinia eschscholzii Rehm［J］.
Microbiol. Lett., 2007, 270（1）：162-170.
［15］ Mamma D, Hatzinikolaou DG, Christakopoulos P. Biochemical
and catalytic properties of two intracellular β-glucosidase from the
fungus Penicillium decumbens active on flavonoid glucosides［J］.
J Mol Catal B ：Enzym, 2004, 27（4）：183-190.
［16］ Bronnenmeier K, Staudenbauer WL. Purification and properties
of an extracellular β-glucosidase from the cellulolytic thermophile
Clostridium stercorarium［J］. Appl Microbiol Biotechnol, 1988,
28（4-5）：380-386.
［17］ Xu Y, Wang D, Mu XQ, et al. Biosynthesis of ethyl estersof short-
chain fatty acids using whole-cell lipase from Rhizopus chinesis
CCTCC M201021 in non-aqueous phase［J］. J Mol Catal B ：
Enzym, 2002, 18（1）：29-37.
［18］ Vulfson EN, Patel R, Beecher JE, et al. Alkyl-β-glucoside synthesis
in a water-organic two-phase system［J］. Biotechnol Lett, 1990,
12（6）：397-402.
［19］ 周亚军 , 赖雪雷 , 刘艳菊 , 等 . 固定酶催化合成正辛基葡萄糖
苷工艺研究［J］. 现代化工 , 2010, 30（2）：163-165.
［20］ 任昌琼 . 表面展示南极假丝酵母脂肪酶 B 的毕赤酵母全细胞
催化合成糖酯［D］. 广州 ：华南理工大学 , 2010.
（责任编辑 李楠）