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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2014年第4期
水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）
是引起人和多种哺乳动物 水 泡 性 口 炎（Vesicular
stomatitis，VS）的病原［1］。VSV 感染人或动物后主
要以口腔粘膜、舌、唇、乳头和蹄冠部上皮发生水
泡为特征，其临床症状与口蹄疫（FMD）、猪水泡病
（SVD）等极为相似，在兽医临床上容易被误诊［2］。
已有的大量研究显示［3］，VSV 与其宿主细胞表面受
收稿日期 ： 2013-12-28
基金项目 ：贵州省科学技术基金项目（黔科合 J 字［2013］2313 号），遵义医学院博士启动基金项目（F-584）
作者简介 ：韩岩岩，女，博士，研究方向 ：分子营养学和营养相关疾病 ；E-mail ：hanyanyan1984@126.com
VSV 糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其
自激活作用的检测
韩岩岩1  宋德光2
（1. 遵义医学院公共卫生学院，遵义 563003 ；2. 吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062）
摘 要 ： 构建水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）酵母双杂交诱饵载体，检测其在酵母细胞中的表达和自激活作用，为进一
步研究酵母双杂交系统筛选与 VSV-G 相互作用蛋白奠定基础。通过 RT-PCR 方法从水泡性口炎病毒（VSV）克隆糖蛋白（G）基因，
BamH I 和 Sal I 双酶切后连接诱饵载体 pSos，获得诱饵质粒 pSos-VSV-G，经测序鉴定后 pSos-VSV-G 转化到酵母菌株 cdcH25（α），
在营养缺陷培养基中观察 pSos-VSV-G 的自激活作用和毒性作用，同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。成功扩增 VSV-G 基因，
并准确克隆入 pSos 中，诱饵载体 pSos-VSV-G 成功转化到酵母菌株 cdcH25（α）中，经表型筛选检测无自激活作用和毒性作用，蛋
白印迹法检测证实 pSos-VSV-G 在酵母细胞中表达诱饵蛋白。 可以利用酵母双杂交系统筛选与 VSV-G 相互作的蛋白质。
关键词 ： 水泡性口炎病毒 糖蛋白 酵母双杂交 诱饵载体
Construction of a Bait Vector for VSV Glycoprotein and Evaluation of
Its Self-activation in Yeast Two-hybrid System
Han Yanyan1 Song Deguang2
（1. School of Public Health，Zunyi Medical University，Zunyi 563003 ；2. College of Animal science and Veterinary Medicine，Jilin
University，Changchun 130062）
Abstract:  It was to construct a bait vector for vesicular stomatitis virus glycoprotein（VSV-G）and detect its protein expression and self-
activation activity in yeast cells, as a basis for further study of screening and VSV-G protein interaction in two hybrid system. Fragment of VSV-G
gene were amplified using RT-PCR and directly ligated to pSos vector, insert-contained plasmid was confirmed by restriction endonuclease
analysis and DNA sequencing. The self-activation and toxicity of the bait plasmid transformed into the yeast cells cdcH25（α）was observed in
selective culture medium, and the bait protein was confirmed by Western blot. Results showed that VSV-G gene was found in the reconstructed
plasmid pSos-VSV-G by sequencing. Yeast two-hybrid tests showed that yeast cells cdcH25（α）transfected with pSos showed that VSV-G had
no self-activation and toxicity, the expression of bait protein was confirmed by Western blot. The yeast two-hybrid system can be applied to screen
the interacting proteins of VSV-G.
Key words:  Vesicular stomatitis virus Glycoprotein Yeast two-hybrid Bait plasmid
体的结合而吸附在宿主细胞膜上这是病毒感染的第
一必备步骤。研究发现 VSV 囊膜 G 蛋白是病毒吸附
至细胞特异性受体的配体蛋白［4］。近年来，对 VSV
分子致病机制的研究成为焦点，其中对细胞膜受体
研究已经成为目前水泡性口炎病毒研究中的重点领
域。根据 VSV 具有广泛的嗜上皮性，推测磷脂酰丝
氨酸（Phosphatidylserine，PS）可能是 VSV 的特异
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第4期110
性受体。2004 年，David 等［5］用锚定蛋白的方法预
先与细胞膜的 PS 结合后再进行试验，结果发现 VSV
仍能感染细胞，因此提出 PS 不是 VSV 细胞膜表面
受体的观点，只是在 VSV 感染后膜融合过程中起重
要作用。上述的观点提示我们，在宿主细胞膜表面
可能存在有 VSV 的未知受体，因此，寻找并鉴定细
胞膜上的未知受体对于阐明 VSV 确切的分子致病机
制及防治该病意义重大。
本研究拟利用分子生物学技术，将 VSV 囊膜 G
蛋白基因克隆到酵母双杂交系统 pSos 诱饵载体上，
构建应用于酵母双杂交系统的诱饵质粒，然后将其
转入酵母温度缺陷株，在排除 VSV-G 蛋白对 cdcH25
（α）细胞的自激活作用后，可以将该诱饵质粒用于
酵母双杂交筛选系统［6，7］，筛选与 VSV 囊膜 G 蛋白
相互作用的受体。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 病 毒 和 质 粒 水 泡 性 口 炎 病 毒（VSV-IN
株 ） 由 本 实 验 室 保 存 ；质 粒 pSos、pSosMAFB、
pMyrMAFB、pMyrC 和 cdcH25（α） 酵 母 菌 株 购 自
Stratagene 公 司 ；DH5α 大 肠 杆 菌 菌 株 由 本 实 验 室
保 存 ；pMD-18T Simple 载 体、 生 物 化 学 试 剂 购 自
TaKaRa 及 Invitrogen 公司。
1.1.2 试剂和主要仪器 葡萄糖、半乳糖、二甲
基 亚 砜、 蛋 白 Maker、Yeast extract、Bacto pepton、
Agar、PEG3350、 醋 酸 锂、Tris 碱、 裂 解 液（Lysis
Buffer）等购自 Sigma 公司。PCR 扩增仪新加坡产
2700 型产品 ；超声波细胞粉碎机为无锡市上佳生
物科技有限公司 GA92- Ⅱ DB 型产品 ；凝胶成像系统
（TFP-M/WL）法国产 ；生化培养箱（HPS-250）产哈
尔滨。
1.2 方法
1.2.1 VSV-G 基因的克隆 设计上游含有 BamH I
酶切位点的引物序列 ：5-CGCGGATCCATGAAGTG-
CCTTTTGTAC-3；下游含有Sal I酶切位点的引物序列：
5-ACGCGTCGACTAAGATGAAGATCGGAGT-3。 提
取 VSV 总 RNA 作为模板进行 RT-PCR 反应，扩增
产物经琼脂糖电泳分析。
1.2.2 重组质粒 pMD18T-VSV-G 的构建及鉴定 利
用凝胶回收试剂盒回收 PCR 产物，按 T 载体试剂盒
说明，将产物与 pMD18T simple 载体连接。用 CaCl2
法转化入大肠杆菌 DH5α 感受态细胞，使用氨苄抗
性板筛选阳性菌落并扩增、抽提质粒，经 PCR 和酶
切分析鉴定插入片段大小，并进行测序鉴定。
1.2.3 诱 饵 重 组 质 粒 的 构 建 及 鉴 定 将 已 构 建
的 pMD18T-VSV-G 及 酵 母 表 达 载 体 pSos 分 别 用
BamH I 和 Sal I 双 酶 切 处 理， 琼 脂 糖 电 泳 回 收 纯
化 目 的 片 段 和 载 体 片 段。 经 T4 连 接 酶 连 接， 用
CaCl2 法 转 化 大 肠 杆 菌 DH5α 感 受 态 细 胞， 使 用
氨苄抗性板筛选阳性菌落并扩增、抽提质粒，双
酶 切 鉴 定 阳 性 质 粒。 重 组 诱 饵 质 粒 命 名 为 pSos-
VSV-G，用酵母表达载体 pSos 的引物，其上游引物
为 5-CCAAGACCAGGTACCATG-3， 下 游 引 物 5-
GCCAGGGTTTTCCCAGT-3，送北京英骏生物公司进
行序列测定。
1.2.4 诱饵载体的毒性检测 利用醋酸锂转化法，
取新制备好的酵母感受态细胞，向装有酵母感受
态细胞的离心管中加入鲑鱼精 DNA 10 μL，再加入
重组诱饵质粒 pSos-VSV-G，轻轻颠倒混匀，室温
作用 20 min。然后再分别加入 20 μL 10×TE（Tris-
EDTA），20 μL 10×LiAc（醋酸锂）和 200 μL 50%
PEG3350，轻轻颠倒混匀。将离心管置于 24℃条件下，
以 225 r/min 转速，培养 45 min。然后向每管中再加
入 30 μL 二甲基亚砜，轻轻混匀。42℃条件下热激
15 min，期间间断混匀，立即置于冰浴冷却 5 min。
8 000 r/min 离心 15 s，弃去上清液。用 0.5 mL 1×TE
重悬沉淀，吸取 100 μL 菌液滴于 SD/glucose（-Leu）
培养基上，倒入灭菌的玻璃珠晃动平板，使菌液均
匀涂布于培养基上，待菌液吸干后，倾倒玻璃珠。
然后将平板置于 24℃条件下倒置培养 4-6 d，观察
菌落的生长情况。
1.2.5 诱饵载体的自激活检测和载体定位检测 共
转化试验分为 5 组进行。其中，第 1 组 ：pSosMAFB
质粒（0.5 μg）和 pMyrMAFB（0.5 μg）为阳性对照
组 1，第 2 组 ：pSosMAFB 质粒（0.5 μg）和 pMyrSB
（0.5 μg） 为 阳 性 对 照 组 2， 第 3 组 ：pSosMAFB 质
粒（0.5 μg）和 pMyrC（0.5 μg）为阴性对照组，第
4 组 ：pSos-VSV-G（0.5 μg） 和 pMyrC（0.5 μg） 为
自 激 活 检 测 组， 第 5 组 ：pSos-VSV-G（0.5 μg） 和
2014年第4期 111韩岩岩等 ：VSV 糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
pMyrSB（0.5 μg）为载体定位检测组。利用醋酸锂方
法进行转化试验，最后分别吸取 100 μL 菌液均匀涂
布于 SD/glucose（-Ura，Leu）平板上，将平板倒置
于 24℃条件下培养 4 d 左右，在此期间观察菌落的
生长情况，直至有菌落长出。每板分别挑取 5 个菌落，
分别用 30 μL 灭菌水重悬，每份吸取 2.5 μL 重悬菌液，
然后分别滴于 2 个 SD/glucose（-Ura，Leu）平板和 1
个 SD/galactose（-Ura，Leu） 平 板。 其 中，1 个 SD/
glucose（-Ura，Leu）平板置于 24℃条件下，另外 1
个 SD/glucose（-Ura，Leu）平板和 1 个 SD/galactose
（-Ura，Leu）平板同时置于 37℃条件下培养 4-6 d，
在此期间观察菌落的生长情况。
1.2.6 诱饵融合蛋白 Western blot 分析
1.2.6.1 酵母菌表达融合蛋白的提取 利用醋酸锂
转化法， 分别进行 3 组试验。第 1 组 ：转化含有
pSos 空载体（0.5 μg）的载体蛋白对照组 ；第 2 组 ：
转化含有诱饵质粒的作为试验组 ；第 3 组 ：不转化
任何质粒的空白对照组。将第 1 组和第 2 组的转化
菌液分别涂布于 YPAD 平板和 SD/glucose（-Leu）平
板上，进行筛选。在 24℃条件下倒置培养 4-6 d，
观察菌落的生长情况。待菌落直径大于 2 mm 时，
挑取单个菌落，分别接种于 10 mL 的 YPAD 液体培
养基和 SD/glucose（-Leu）液体培养基中，然后置于
24℃ 摇床，以 225 r/min，振荡培养，直至菌液 OD
值在 0.6-0.8 之间。将菌液以 5 000 r/min，离心 10
min，收集酵母细胞，弃去上清液。然后加入 400 μL
的裂解液（Lysis Buffer）裂解细胞，重悬沉淀 ；然
后加入相同体积的直径为 0.5 mm 酸洗玻璃珠混匀，
冰浴放置 10 min，漩涡振荡 10 min，4℃进行超声破
碎，功率为 600 W，时间为 20 min，进行超声破碎
时间为每次 10 s，中间间歇 14 s 。最后将超声破碎
后的液体，12 000 r/min，4℃，离心 10 min，小心吸
取上清液，即为蛋白提取物。
1.2.6.2 蛋白印迹检测 首先进行 SDS-PAGE 分析，
然后将分离的蛋白质样品，转移到硝酸纤维素膜 NC
膜上，用脱脂乳封闭过夜，然后加入一抗（鼠抗 Sos
蛋白抗体），37℃孵育 2 h，然后加入酶标二抗反应
物（羊抗鼠 HRP-IgG），37℃孵育 1 h，经过底物化
学发光 ECL 显色。
2 结果
2.1 VSV-G基因的克隆、载体构建及鉴定
2.1.1 VSV-G 基因的克隆 提取病毒总 RNA 后经
RT-PCR 扩增、电泳，可见一条特异性带，大小在
1 200 bp 左右，与预期 VSV-G 基因 1 242 bp 大小近
似（图 1），可初步判断为目的基因片段，并将其回收。
将该特异性条带回收后与 pMD18T 载体连接获得的
重组质粒，采用特异性引物对重组质粒 pMD18T-
VSV-G 目的基因进行 PCR 扩增和重组质粒进行双酶
切鉴定（图 2），所获得目的基因片段和酶切片段大
小均与理论值相符。经测序比对证实为 VSV-G 基因，
全长 1 242 bp，提示 VSV-G 基因扩增以及 pMD18T-
VSV-G 载体构建成功。
M ：DL2000 DNA Marker ；1 ：VSV-G 基因
图 1 VSV-G 基因的 RT-PCR 扩增结果
1242
bp bp
2000
1000
1 M
1 M 2
1242
2000
bp bp
1000
1 ：PCR 方法对重组质粒鉴定 ；M ：DL 2000 Marker ；2 ：双酶切结果
图 2 重组质粒 pMD18T-VSV-G 的 PCR 和酶切鉴定结果
2.1.2 诱 饵 载 体 的 构 建 将 pMD18T-VSV-G 与 和
pSos 空载体分别用 BamH Ⅰ和 Sal Ⅰ双酶切。回收目
的片段和 pSos 载体片段用 T4 连酶连接转化大肠杆
菌。随机挑取阳性克隆，摇菌提取质粒，对构建的
诱饵质粒进行 BamH Ⅰ和 Sal Ⅰ双酶切鉴定（图 3），
酶切片段大小均与理论值相符，测序结果表明插入
的核苷酸序列正确。
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第4期112
2.2 诱饵载体毒性、自激活作用检测及融合蛋白
表达
2.2.1 pSos-VSV-G 对 酵 母 菌 的 毒 性 检 验 转 化 了
pSos-VSV-G 质粒的 cdc25H（α）在 SD/glucose（-Leu）
培养基上生长良好（图 4），说明 pSos-VSV-G 质粒
的表达产物对酵母菌的生长没有毒性作用，为下一
步的试验奠定了基础。
表 1 诱饵载体的自激活情况及定位情况检验
组别 共转化质粒组合
24℃SD/
（-Uar，Leu）
Glucose
37℃SD/
（-Uar，Leu）
Glucose
37℃ SD/
（-Uar，Leu）
Galactose
第一组 pSosMAFB 和
pMyrMAFB
+ - +
第二组 pSosMAFB 和
pMyrSB
+ - +
第三组 pSosMAFB 和
pMyrC
+ - -
第四组 pSos-VSV-G 和
pMyrC
+ - -
第五组 pSos-VSV-G 和
pMyrSB
+ - +
2.2.3 诱饵重组质粒融合蛋白表达结果 对转化有
pSos 空载体质粒和有诱饵重组质粒的单菌落以及未
转化任何质粒的酵母菌摇菌提取总蛋白，然后分别
进行 SDS-PAGE 分析，Western blot 分析，应用 ECL
化学发光方法进行显影，结果（图 5）表明，诱饵
重组质粒成功表达融合蛋白，融合蛋白分子量约为
170 kD。
M1 ：DL 15000 Marker ；1-3 ：诱饵质粒 ；M2 ：DL 2000 Marker
图 3 诱饵质粒双酶切电泳图
图 4 酵母菌株 cdc25H（α）的生长情况
M1 1 2 3 M2
2000
bp
1000
2.2.2 诱饵重组质粒的自激活检测和载体定位情
况检验结果 结果显示，24℃条件下，5 组在 SD/
glucose（-Ura，Leu）平板均长出菌落。 37℃条件下，
5 组在所有 SD/glucose（-Ura，Leu）培养基，均无
菌落生长。然而在 SD/galactose（-Ura，Leu）平板生
长情况有所不同。结果（表 1）显示，第 1 组、第
2 组和第 5 组，均在 SD/galactose（-Ura，Leu）平板
上长出菌落。然而第 3 组和第 4 组，在 SD/galactose
（-Ura，Leu） 营 养 缺 陷 板 上 无 菌 落 生 长（ 表 1）。
上述试验结果表明诱饵重组质粒在宿主酵母菌株
cdc25H（α）的中无自激活作用，并且诱饵重组质粒
在宿主酵母菌株 cdc25H（α）细胞质中表达的融合
蛋白定位结果正确。
200
kD
105
71
50
35
M 1 2 3
170
kD
120
M ：标准的蛋白 ；Maker 1 ：载体对照组 ；2 ：试验组 ；3 ：空白对照组
图 5 酵母表达的诱饵融合蛋白的 Western 印迹鉴定结果
3 讨论
水泡性口炎是由水泡性口炎病毒引起的一种急
性、热性、高度接触性的人畜共患传染病。以在口
腔粘膜、舌、唇、乳头和蹄冠部上皮出现水泡为特
征［1］。水泡性口炎病毒颗粒由脂质双层外膜、基因
组 RNA 和核蛋白 N、P 蛋白、M 蛋白、L 蛋白和 G
蛋白组成。G 蛋白与病毒入侵细胞有关。关于 VSV
是通过病毒囊膜糖蛋白突起吸附于敏感细胞表面受
体，目前还存在争论。然而，G 蛋白的寡糖链与病
毒吸附无关，因为病毒粒子在其 G 蛋白缺少寡糖链
的情况下，仍然具有完全的感染性。VSV 的侵入和
脱壳发生在吸附之后，虽然病毒吸附不需要对能量
2014年第4期 113韩岩岩等 ：VSV 糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
和生理温度的依赖，但侵入却是一个能量和生理温
度依赖的过程。现在普遍认为 VSV 是由胞吞作用而
侵入的，并且随着内吞小泡内 pH 值降低，G 蛋白可
以介导和启动膜融合并脱去病毒包膜，于是病毒核
衣壳释放到胞质中。G 蛋白上含有 2 个糖基化位点，
是病毒的主要表面抗原，决定着病毒的毒力，也是
病毒的保护性抗原。它可刺激机体产生中和抗体，
呈现型、亚型，乃至株的特异性［6］。G 蛋白在病毒
吸附在宿主细胞中以及病毒从宿主中出芽释放起到
了重要作用，与病毒吸附到宿主细胞受体有关的病
毒成分是糖蛋白。当选择性的蛋白溶解以去除 VSV
糖蛋白时，便会降低病毒的感染性，并且抗糖蛋白
的抗体能有效的中和该病毒。
酵母双杂交系统［7，8］作为一种分析蛋白质与蛋
白质之间相互作用的简便而有效的研究体系，具有
许多优点，如采用高拷贝和强启动子的表达载体使
杂合蛋白过量表达，并且避免蛋白质纯化过程。检
测蛋白质与蛋白质之间相互作用是在活细胞内进行，
体现真核细胞内真实反应情况，并且可以检测存在
于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用。而不像
体外蛋白质之间相互作用，受蛋白的浓度亲和力等
限制。酵母双杂交系统还可采用不同细胞类型、组
织、器官和分化时期材料构建 cDNA 文库。易于转化、
便于回收扩增质粒，具有可直接进行选的标记基因
和特征性报道基因。
本试验选用的是 Stratagene CytoTrapTM 双杂交系
统，也就是 SOS 恢复系统（SRS）［9］，该系统具有传
统酵母双杂交系统不具备的优点，检验的蛋白质间
相互作用发生在酵母细胞质中。因此该系统适于研
究非核蛋白，膜蛋白等［10］。Stratagene CytoTrapTM 双
杂交系统中使用的是温度敏感突变型酵母株 cdc25H
（α），该菌株位于 1 328 位氨基酸残基 CDC25 基因存
在突变，由于 CDC25 基因是编码酵母细胞中鸟氨酸
交换因子的基因，该基因的突变使得 Ras 信号转导
通路中断。酵母菌株 cdc25H 由于 CDC25 基因是突
变的，不能激活 Ras 信号转导通路，因此不能在限
制性温度 37℃生长。但仍然可以在 22-25℃左右的
室温条件下正常生长［11］。在 SOS 恢复系统中，pSos
载体被用于构建诱饵质粒的载体，其阅读框中包含
编码 hSos 蛋白 DNA 氨基酸的序列，hSos 蛋白表达
并锚定在细胞膜上，可以弥补 CDC25 基因的缺陷，
激活 Ras 信号转导通路，导致该酵母菌株 cdc25H（α）
可以在限制性温度 37℃正常生长。这样，利用 pSos
载体的这一性质，可以在多克隆位点插入想要的目
的片段作为诱饵序列，hSos 和诱饵序列一起表达为
融合蛋白，如果诱饵与锚定在细胞膜上的猎物蛋白
的之间发生相互作用。使得 hSos 蛋白间接锚定在细
胞膜上，从而激活 Ras 信号转导通路。并且 pSos 载
体可以在酵母中表达 LEU2 基因，可以在大肠杆菌
中表达氨苄抗性，从而便于在酵母和大肠杆菌中挑
取阳性克隆［12］。
4 结论
本试验成功构建诱饵重组质粒，该诱饵重组质
粒无自激活作用，从酵母菌株 cdc25H（α）的生长
情况来看，诱饵质粒对酵母菌株 cdc25H（α）无毒
性作用。对转化有诱饵重组质粒的单菌落进行摇菌
提取总蛋白，结果表明诱饵质粒能够在酵母细胞质
中成功表达融合蛋白。该诱饵质粒可以应用于酵母
双杂交系统。
参 考 文 献
［1］ 殷震 , 刘景华 . 动物病毒学［M］. 第 2 版 , 北京 ：科学出版社 .
1997 ：799-805.
［2］ 马俊儒 , 马相斋 . 牛暴发水疱性口炎［J］. 畜牧与兽医 , 2003,
35（1）：44-48.
［3］ Jayakar HR, Whitt MA. Identification of two additional translation
products from the matrix（M）gene than contribute to VSV
cytopathology［J］. J Virol, 2002, 76（16）：8011-8018.
［4］ Roberts PC, Kipperman T, Compans RW. Vesicular stomatitis virus
g protein acquires pH-independent fusion activity during transport
in a polarized endometrial cell line［J］. Virol Dec, 1999 ；73 ：
10447 - 10457.
［5］ Coil DA, Miller AD. Phosphatidylserine is not the cell surface
receptor for vesicular stomatitis virus［J］. J Virol, 2004, 78（20）：
10920-10926.
［6］ Rose JK, Gallione CJ. Nucleotide sequences of the mRNA’s
encoding the vesicular stomatitis virus G and M proteins determined
from cDNA clones containing the complete coding regions［J］. J
Virol, 1981, 39 ：519-528.
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第4期114
［7］ Feilotter HE, Hannon GJ, Ruddell CJ, et al. Construction of an
improved host strain for two hybrid screening［J］. Nucl Acids Res,
1994, 22 ：1502-1506.
［8］ Tian QY, Zhao YP, Liu CJ. Modified yeast-two-hybrid system to
identify proteins interacting with the growth factor progranulin［J］.
J Vis Exp, 2012, 17（59）：3562.
［9］ Barak, Huang W, Wang SL, Lozano G, et al. cDNA library screening
using the SOS recruitment system［J］. Biotechniques, 2001, 30
（1）：94-99.
［10］ Gietz RD, Schiestl RH, Williems AR, et al.Studies on the transfor-
mation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure
［J］. Yeast, 1995, 11（4）：355-360.
［11］ Serebriiskii IG, Kotova E. Analysis of protein-protein interactions
utilizing dual bait yeast two-hybrid system［J］. Method Mol Biol,
2004, 261 ：263-296.
［12］ Uetz P, Glot L, Cagney G, et al. A comprehensive analysis of
protein-protein interactions in Saccharomyces cerevisiae［J］.
Nature, 2000, 403 ：623-627.
（责任编辑 李楠）